本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細(xì)胞移植治療阿爾茨海默病的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：隨著人們生活水平的提高,和社會環(huán)境的不斷改變,阿爾茨海默病(Alzheimer'S disease, AD)的發(fā)病率卻呈現(xiàn)了不斷且快速上升的趨勢,根據(jù)大量的醫(yī)學(xué)研究資料顯示,對于阿爾茨海默病至今還沒有特效藥物以及治療方法。本實驗是用純化了的綠色熒光蛋白(green fluorecent protein,GFP)轉(zhuǎn)基因小鼠的胚胎神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSCs),進行分離、培養(yǎng),然后移植到APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)的海馬中。探討神經(jīng)干細(xì)胞在修復(fù)患鼠腦組織過程中的作用,從而為臨床應(yīng)用神經(jīng)干細(xì)胞來治療阿爾茨海默病提供理論依據(jù)。 方法：(1)E14的GFP轉(zhuǎn)基因小鼠內(nèi)的胚胎,取其端腦,制成神經(jīng)干細(xì)胞懸液進行培養(yǎng),并進行免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)來檢測所培養(yǎng)干細(xì)胞巢蛋白(Nestin)的表達(dá)。同時用胎牛血清來誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞進行分化,用MAP-2(神經(jīng)元特異烯醇化酶),GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白)免疫細(xì)胞化學(xué)染色,對其所分化成的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞進行鑒定。(2)E14的C57小鼠內(nèi)的胚胎,用上述方法制成神經(jīng)干細(xì)胞懸液進行培養(yǎng),傳至4-6代時,以每孔8×104—1×105個細(xì)胞/500μl的密度接種于24孔板內(nèi),按照復(fù)染指數(shù)(Multiplicities of infection,MOI)為0,1,5,10,15,20加入攜帶有GFP基因的慢病毒載體(lent iviral vector-GFP,LV/GFP)稀釋液,每六孔為一滴度,共六組。2-3天后置于倒置熒光顯微鏡下觀察其GFP的陽性表達(dá)。以流式細(xì)胞儀檢測各組各組神經(jīng)干細(xì)胞的GFP陽性轉(zhuǎn)染率。 (3)根據(jù)腦立體定位技術(shù)將含有GFP基因的神經(jīng)干細(xì)胞移植到AD小鼠腦內(nèi)海馬中,一周后做水迷宮與曠場試驗,以檢測小鼠的學(xué)習(xí)與記憶能力是否有所改善。移植四周后取小鼠腦部采用熒光技術(shù)來檢測移植后,神經(jīng)干細(xì)胞的存活及遷移能力。 結(jié)果：體外實驗充分證明,從E14的胎鼠端腦內(nèi)可以成功的分離培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞,并且此細(xì)胞中絕大多數(shù)可以表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志物——巢蛋白(Nestin);在胎牛血清分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下,神經(jīng)干細(xì)胞具有多方向分化的潛能,其中少數(shù)干細(xì)胞可以分化成被MAP-2表達(dá)的神經(jīng)元,多數(shù)可以分化成被GFAP所表達(dá)的星形膠質(zhì)細(xì)胞。 神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染GFP基因后,除MOI=0組以外,2-3天后各孔的GFP均有表達(dá)。且隨著MOI值的增加而陽性表達(dá)率亦增加。MOI=0-10時,P0.05。 通過行為學(xué)檢測,在學(xué)習(xí)與記憶能力上,細(xì)胞移植組的小鼠比模型組有差異(P0.05),與對照組比較差異無顯著性(P0.05).免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測：移植后的神經(jīng)干細(xì)胞不僅能夠可以很好與AD小鼠的腦組織進行整合,而且可以在AD小鼠腦組織內(nèi)進行遷移。 結(jié)論：神經(jīng)干細(xì)胞在無血清完全培養(yǎng)基培養(yǎng)下可以很好的存活,并且大量增殖。移植腦組織海馬區(qū)后可以完成遷移與整合。神經(jīng)干細(xì)胞對阿爾茨海默病的治療有一定療效。同時慢病毒可以作為將外源基因轉(zhuǎn)入到神經(jīng)干細(xì)胞的理想載體。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 神經(jīng)干細(xì)胞 移植 GFP轉(zhuǎn)基因小鼠
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 英文縮寫5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-12
• 文獻綜述12-30
• 綜述112-22
• 1 阿爾茨海默病的流行病學(xué)12
• 2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對AD的認(rèn)識和研究12-14
• 2.1 AD的歷史12-13
• 2.2 AD的診斷13
• 2.3 AD的病理學(xué)13-14
• 3 中醫(yī)學(xué)對AD的認(rèn)識14-15
• 3.1 古籍對AD的描述14-15
• 3.2 中醫(yī)學(xué)對AD病因病機的認(rèn)識15
• 4 AD的治療15-17
• 4.1 西醫(yī)治療15-16
• 4.2 中醫(yī)治療16-17
• 5 阿爾茨海默病的模型17-22
• 5.1 單轉(zhuǎn)基因小鼠19-20
• 5.2 雙轉(zhuǎn)基因小鼠20
• 5.3 三轉(zhuǎn)基因小鼠20-22
• 綜述222-30
• 1 神經(jīng)干細(xì)胞的概念22
• 2 神經(jīng)干細(xì)胞的分布22-23
• 3 神經(jīng)干細(xì)胞的來源23
• 4 神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化與鑒定23-26
• 5 神經(jīng)干細(xì)胞的研究方向26
• 6 人類神經(jīng)干細(xì)胞的研究26-28
• 7 神經(jīng)干細(xì)胞用于AD治療的可行性28
• 8 神經(jīng)干細(xì)胞治療AD面臨的問題28
• 9 神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用前景28-30
• 材料與方法30-39
• 1 實驗材料30-32
• 1.1 實驗動物及分組30
• 1.2 主要試劑/試劑盒30
• 1.3 儀器設(shè)備30-31
• 1.4 主要溶液配制31-32
• 2 實驗方法32-33
• 2.1 神經(jīng)干細(xì)胞的單細(xì)胞懸液制備32-33
• 2.2 半量換液方法33
• 2.3 傳代培養(yǎng)33
• 3 神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定--巢蛋白(Nestin)33-34
• 4 神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化、鑒定34
• 4.1 神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化34
• 4.2 神經(jīng)干細(xì)胞分化的鑒定34
• 5 慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞34-35
• 6 行為學(xué)35-36
• 7 移植36-37
• 8 腦組織的取材和冰凍切片制備37
• 9 腦組織切片HE染色37-38
• 10 統(tǒng)計學(xué)處理38-39
• 結(jié)果39-42
• 1 神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定39-40
• 1.1 神經(jīng)干細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)39
• 1.2 神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定39
• 1.3 神經(jīng)干細(xì)胞的分化以及分化鑒定39-40
• 1.4 神經(jīng)干細(xì)胞的慢病毒轉(zhuǎn)染檢測40
• 2 神經(jīng)干細(xì)胞對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響40
• 2.1 曠場實驗40
• 2.2 Morris水迷宮實驗40
• 3 神經(jīng)干細(xì)胞對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織的影響40-42
• 討論42-46
• 1 阿爾茨海默病動物模型42
• 2 移植后神經(jīng)干細(xì)胞存活42-43
• 3 移植神經(jīng)干細(xì)胞后的遷移43-44
• 4 慢病毒介導(dǎo)GFP基因轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞44
• 5 移植神經(jīng)干細(xì)胞后APP/PS1小鼠的行為學(xué)改變44-45
• 6 移植神經(jīng)干細(xì)胞治療阿爾茨海默病的可能機制45
• 7 應(yīng)用展望45-46
• 結(jié)論46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-57
• 附錄57-62
• 攻讀博、碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文62-64
• 個人簡歷64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 應(yīng)春怡 ,陳汝筑 ,汪雪蘭 ,陳系古;神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病相關(guān)的tau蛋白及其轉(zhuǎn)基因動物模型[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

2 耿佃盛,韓恩吉;神經(jīng)生長因子與老年性癡呆[J];國外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊;2000年03期

  本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細(xì)胞移植治療阿爾茨海默病的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：331609