目的探討蛋白磷酸酶2A催化亞基（PP2Ac）下調(diào)是否參與人tau蛋白積聚引起的線粒體分裂融合動態(tài)及功能失衡的機制。方法大鼠原代海馬神經(jīng)元轉染mito-dsRed質(zhì)粒和人tau40質(zhì)粒48 h后,共聚焦顯微鏡觀測線粒體分布,免疫印跡檢測線粒體分裂融合蛋白、PP2Ac及PP2A調(diào)節(jié)亞基b（PP2Ab）表達水平;大鼠原代海馬神經(jīng)元和野生型HEK293細胞（293wt）共轉染siPP2Ac-EGFP質(zhì)粒和mito-dsRed質(zhì)粒48 h后,檢測線粒體形態(tài)和分布;293wt細胞共轉染siPP2Ac質(zhì)粒和mito-Dendra2質(zhì)粒40 h后,實時觀測線粒體分裂融合動態(tài);293wt細胞沉默PP2Ac表達后,檢測線粒體分裂融合蛋白水平及細胞膜電位和細胞活力;穩(wěn)定表達人tau的HEK293細胞（293htau）共轉染PP2Ac-EGFP質(zhì)粒和mito-dsRed質(zhì)粒48 h后,分析線粒體分布和形態(tài)及功能。結果大鼠原代海馬神經(jīng)元表達人tau蛋白引起突起線粒體分布下降并伴有PP2Ac水平顯著下降（t=4.814,P=0.0086）。下調(diào)PP2Ac表達引起大鼠原代海馬神經(jīng)元和HEK293細胞線粒體變長并異常... 

【文章來源】：中國醫(yī)學科學院學報. 2020,42(03)北大核心CSCD

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大鼠原代海馬神經(jīng)元表達人tau與表達空載體組的線粒體分布和分裂融合蛋白水平的比較

表達PP2Ac的293htau細胞組與表達空載體組的線粒體形態(tài)分布和膜電位的比較

上調(diào)PP2Ac減輕293htau細胞線粒體形態(tài)分布和膜電位異常 293htau細胞分別共轉染EGFP-vector質(zhì)�；駿GFP-PP2Ac質(zhì)粒和mito-dsRed質(zhì)粒36 h后,共聚焦攝像分析線粒體形態(tài)分布結果顯示,PP2Ac表達引起293htau細胞的線粒體平均長度明顯變短(t=7.300,P<0.0001),細胞內(nèi)正常短管狀線粒體比例顯著升高(t=8.303,P<0.0001),且線粒體均勻分布于胞體和突起的細胞比例顯著增多(t=9.269,P<0.001)。線粒體相對膜電位分析結果顯示,PP2Ac表達的293htau細胞與對照質(zhì)粒表達細胞的基礎相對膜電位顯著升高(t=2.271,P=0.0395),但 CCCP 處理后兩者相對膜電位差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(圖5)。圖3 293wt細胞轉染siPP2Ac質(zhì)粒組與ssiPP2Ac質(zhì)粒轉染對照組的線粒體分裂融合動態(tài)(A)及綠色與紅色共定位時間的比較(B)


本文編號：3285534