人染色體22q11.2區(qū)域缺失引起一系列發(fā)育障礙,其中約有23%⁴3%的病人患有精神分裂癥（SCZ）。SCZ易感基因DGCR2（DiGeorge syndrome critical region gene2）位于缺失區(qū)域,在SCZ病人腦中表達(dá)降低。最近有研究對(duì)SCZ病人外顯子測(cè)序表明DGCR2基因上一新生（de novo）錯(cuò)義突變（P429R）與SCZ相關(guān),但P429R突變對(duì)DGCR2功能的影響以及與SCZ之間的關(guān)系并不清楚。為此,我們利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）定點(diǎn)突變的方法構(gòu)建了DGCR2-P429R突變體的真核細(xì)胞表達(dá)載體。在細(xì)胞系中過表達(dá)P429R突變體,通過免疫印跡（Immunoblotting,IB）發(fā)現(xiàn)其水平與野生型（WT）的DGCR2相當(dāng);但P429R在蛋白質(zhì)電泳中的遷移速率變快,其相對(duì)分子量比WT小8 kDa（kilo-Dalton）左右。進(jìn)一步,在原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中表達(dá)P429R突變體,通過免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunocytochemistry,ICC）發(fā)現(xiàn)其在神經(jīng)元的分布與WT一致。DGCR2是一種主要分布在突觸后致密（PSD）的單次跨膜蛋白... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

2q11DS的小鼠模型

第一章 前言factor typeC repeat）位于DGCR2的胞外段（extracellular domain, ECD），緊接著是跨膜區(qū)（transmembrane, TM）和胞內(nèi)段（intracellular domain, ICD）。在DGCR2的ICD并無明顯的結(jié)構(gòu)域，但我們對(duì)其序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其中最靠近C端的三個(gè)氨基酸TVV是結(jié)合含有PDZ-domain蛋白的結(jié)構(gòu)域。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，很多PDZ蛋白在突觸，尤其是突觸后致密（postsynaptic densities, PSDs）的部位發(fā)揮重要作用，如PSD-95[13]。DGCR2的ICD尾端含有該結(jié)構(gòu)域提示DGCR2有可能定位在突觸后膜上，同PSD-95結(jié)合。本研究利用免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)DGCR2通過其C末端的TVV三個(gè)氨基酸與PSD-95結(jié)合。

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 DGCR2 在小鼠腦中的表達(dá)為了探索 DGCR2 的功能，我們首先利用抗 DGC小鼠各種不同組織中的表達(dá)情況。如圖 3.1A 所示，D肝臟以及脾臟中表達(dá)較高。DGCR2 是精神分裂癥易感它在不同腦區(qū)的表達(dá)，發(fā)現(xiàn) DGCR2 在皮層、海馬、狀體等腦區(qū)均有較高的表達(dá)（圖 3.1B）。我們還收集至出生后 50 天（P50）的小鼠腦組織裂解液，檢測(cè)了的表達(dá)，發(fā)現(xiàn) DGCR2 從 E12.5 開始表達(dá)，P5-P21 表達(dá)3.1C）。P5-P21 是神經(jīng)元突起以及突觸發(fā)育的重要時(shí)期經(jīng)元突起和突觸發(fā)育中發(fā)揮重要作用。BA


本文編號(hào)：3277089