阿爾茨海默癥（Alzheimer’s disease,AD）是一種多因素引起的,與年齡高度相關(guān),以進行性認知障礙和記憶力損傷為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,是最常見的癡呆類型之一。老齡人口中65歲后約13%,85歲后約45%的人患有AD。AD特征性病理改變包括:（1）由39-43個氨基酸組成的β淀粉樣蛋白（amyloidβpeptide,Aβ）沉積形成的神經(jīng)細胞外老年斑（senile plaque,SP）;（2）tau蛋白過度磷酸化形成的神經(jīng)細胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles,NFT）;（3）神經(jīng)元丟失伴膠質(zhì)細胞增生。神經(jīng)細胞凋亡是其主要病理基礎(chǔ)之一。高脂血癥是AD等神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的高危因素,但是高脂血癥與神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的機制并未完全闡明。本課題旨在研究脂質(zhì)對神經(jīng)細胞凋亡的影響及其機制,進而探索高脂血癥導(dǎo)致AD等神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的機制。第一部分:Ox-LDL對PC12細胞脂質(zhì)蓄積、凋亡和分泌Aβ的影響以及對PC12細胞中SREBP2、PCSK9及LRP1表達的影響。目的:觀察Ox-LDL能否通過調(diào)節(jié)SREBP2,PCSK9,LRP1表達影響PC... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮略詞索引
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 細胞和主要試劑
    2.2 主要儀器設(shè)備
第3章 實驗方法
    3.1 細胞培養(yǎng)
        3.1.1 細胞復(fù)蘇
        3.1.2 細胞傳代
        3.1.3 細胞換液
        3.1.4 細胞凍存
        3.1.5 實驗分組
    3.2 常用液體的配制
    3.3 油紅O染色
    3.4 Hoechest33258染色
    3.5 AnnexinV-FITC/PI雙染
    3.6 Western blot
        3.6.1 貼壁細胞蛋白質(zhì)提取
        3.6.2 SDS-PAGE凝膠配制
        3.6.3 電泳
        3.6.4 轉(zhuǎn)膜（濕轉(zhuǎn)膜法）
        3.6.5 封閉
        3.6.6 一抗孵育
        3.6.7 二抗孵育
        3.6.8 ECL化學(xué)發(fā)光檢測
    3.7 siRNA轉(zhuǎn)染
    3.8 ELISA檢測Aβ40及Aβ42含量
    3.9 統(tǒng)計分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 Ox-LDL增加PC12細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積
    4.2 Ox-LDL促進PC12細胞的凋亡
        4.2.1 Hoechst33258染色觀察不同濃度Ox-LDL對PC12細胞凋亡的影響
        4.2.2 流式細胞計數(shù)檢測不同濃度的Ox-LDL對PC12細胞凋亡的影響
    4.3 Ox-LDL增加PC12細胞中SREBP2和PCSK9表達減少LRP1表達
        4.3.1 不同濃度的Ox-LDL對PC12細胞中SREBP2，PCSK9及LRP1表達的影響
        4.3.2 75mg/L Ox-LDL處理PC12細胞不同時間對其SREBP2，PCSK9及LRP1表達的影響
    4.4 Ox-LDL減少PC12細胞Aβ的分泌
    4.5 PCSK9 siRNA轉(zhuǎn)染的結(jié)果鑒定
    4.6 PCSK9 siRNA部分抑制Ox-LDL誘導(dǎo)的PC12細胞凋亡
        4.6.1 Hoechst33258染色觀察PCSK9 siRNA對Ox-LDL誘導(dǎo)的PC12細胞凋亡的影響
        4.6.2 流式細胞計數(shù)檢測PCSK9 siRNA對Ox-LDL誘導(dǎo)的PC12細胞凋亡的影響
    4.7 PCSK9 siRNA部分抑制Ox-LDL誘導(dǎo)的PC12細胞中PCSK9表達增加和LRP1表達減少
    4.8 PCSK9 siRNA對PC12細胞中PI3K，Akt，P-PI3K及P-Akt表達的影響
    4.9 PCSK9 siRNA對PC12細胞中NF-κB，Caspase3，Caspase9，Bax及Bcl-2 表達的影響
    4.10 PCSK9 siRNA增加Ox-LDL處理的PC12細胞分泌的Aβ
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    References
攻讀學(xué)位期間的科研成果
課題資助
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Targeting the PI3K/Akt signaling pathway in gastric carcinoma: A reality for personalized medicine?[J]. Shikha Satendra Singh,Wei Ney Yap,Frank Arfuso,Shreya Kar,Chao Wang,Wanpei Cai,Arunasalam M Dharmarajan,Gautam Sethi,Alan Prem Kumar.  World Journal of Gastroenterology. 2015(43)
[2]Ox-LDL對急性冠脈綜合癥患者外周血單核-巨噬細胞SREBP-2和HMGCR mRNA表達的影響[J]. 張培東,劉映峰,郭陽,繆緋,余志國,王世祥.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2009(05)
[3]阿爾茨海默病淀粉樣β蛋白誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的研究進展[J]. 呂良,鐘振國.  中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志. 2007(06)
[4]針刺對阿爾茨海默病模型大鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響[J]. 姜桂美,賈超,賴新生.  上海針灸雜志. 2006(12)

碩士論文
[1]PCSK9介導(dǎo)脂質(zhì)對海馬神經(jīng)元及PC12細胞凋亡的影響及機制研究[D]. 吳琪.南華大學(xué) 2014



本文編號：3084627