發(fā)布時間：2021-02-18 11:43

　　目的:本研究旨在探討mi RNA-451/MIF及其下游信號通路在血腦屏障損傷、神經(jīng)炎癥激活及神經(jīng)元損傷中對帕金森病認知障礙的影響,闡明其通過神經(jīng)血管單元在帕金森病認知功能障礙中的作用與機制。方法:采用Mpp⁺誘導MN9D細胞構(gòu)建細胞帕金森病模型及MPTP誘導小鼠構(gòu)建動物帕金森病模型,并采用Morris水迷宮測試評估動物認知功能,根據(jù)認知功能障礙程度進行分組,分為NC組、Control組、MPTP組-1、MPTP組-2。采用熒光定量PCR測定mi RNA-451的表達水平,探究mi RNA-451與帕金森病認知功能障礙的相關性,并通過免疫組化技術(shù)測定多巴胺能神經(jīng)元酪氨酸羥化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）損傷。采用慢病毒轉(zhuǎn)染MN9D細胞,在細胞中過表達及沉默mi RNA-451后,采用Mpp⁺誘導帕金森病模型,使用Western Blot測定mi RNA-451/MIF表達水平改變后MIF蛋白和TH的表達水平。采用MPTP腹腔注射和側(cè)腦室立體定向注射mi RNA-451 antagomir及mi RNA-451 antag... 

【文章來源】：華南理工大學廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元受損情況

第二章miRNA-451在MPTP/Mpp+誘導的帕金森病模型中的變化31圖1.2平均潛伏期變化曲線，注射MPTP組比未注射MPTP組曲線變化較為平緩。**P<0.01vsNCgroup,#P<0.01vsControlgroup,P<0.01vsMPTP-2group。圖1.3水迷宮實驗結(jié)果柱狀圖圖A表示Morris水迷宮測試各組小鼠空間學習記憶能力的比較。**P<0.01vsNCgroup。圖B表示各組小鼠在水迷宮測試時的最大游泳速度，各組游泳速度無統(tǒng)計學差異。圖C表示腹腔注射MPTP后各組小鼠的第三天的潛伏期的對比；**P<0.01vsNCgroup,****P<0.0001vsNCgroup，#P<0.01vsMPTP-23.1.4miRNA-451在MPTP誘導帕金森病小鼠與認知障礙的相關性

第二章miRNA-451在MPTP/Mpp+誘導的帕金森病模型中的變化33圖1.5TH免疫熒光。由免疫熒光結(jié)果可見，本實驗使用的MN9D的TH免疫熒光陽性，確實是小鼠種屬的多巴胺能神經(jīng)元細胞。（右下角標尺：75μm）除了在研究帕金森病動物模型的miRNA-451水平的變化，我們還探討了細胞帕金森病模型(MN9D細胞在MPP+處理下)miRNA-451的表達情況。MPTP不能直接被MN9D細胞攝取，在體內(nèi)注射MPTP后，MPTP透過血腦屏障，再由神經(jīng)膠質(zhì)細胞處理，轉(zhuǎn)化為MPP+，再于大腦內(nèi)進行相關的病理生理反應，是MPTP活性成分。因此，帕金森病細胞模型常用MPP+處理。相比于正常組，MN9D細胞被MPP+處理24小時后，miRNA-451的表達水平顯著上升。結(jié)果如圖1-3所示。以U6基因作為內(nèi)參，將正常組MN9D細胞的miRNA-451校正為1，相比于正常組，MN9DMPP+組miRNA-451表達水平顯著增加。圖1.6表示MN9D正常細胞與經(jīng)Mpp+處理后的miRNA451水平，****P<0.001。


本文編號：3039511