阿爾茨海默癥是一種慢性神經(jīng)退行性疾病,其特征為記憶力衰退、語(yǔ)言和方向能力降低、情緒變動(dòng)、行動(dòng)能力喪失和思維與行為障礙等。近幾年的研究表明,β-淀粉樣蛋白可以作為阿爾茨海默癥的標(biāo)記物,并且β-淀粉樣蛋白（Aβ）與Cu或Fe等金屬離子的結(jié)合會(huì)產(chǎn)生具有氧化性的活性氧（ROS）,產(chǎn)生氧化損傷,給患者帶來(lái)很大困擾。隨著傳感器研究的發(fā)展,目前已有多種傳感器應(yīng)用于β-淀粉樣蛋白的檢測(cè)。本文以電致化學(xué)發(fā)光技術(shù)為測(cè)試方法,選用不同發(fā)光底物,利用適體與蛋白的特異性,運(yùn)用不同的傳感策略,建立了三種不同傳感器,以實(shí)現(xiàn)對(duì)β-淀粉樣蛋白單體的檢測(cè)。主要內(nèi)容如下:1)一種免標(biāo)記和信號(hào)“開(kāi)”的傳感策略用于β-淀粉樣蛋白的靈敏檢測(cè)。建立了一種簡(jiǎn)單,免標(biāo)記且具有信號(hào)增強(qiáng)作用的ECL適體傳感器,使用魯米諾作為ECL信號(hào)的發(fā)光體,通過(guò)適體與靶標(biāo)物的特異性結(jié)合,利用Cu²⁺-Aβ與水中溶解氧之間的催化作用,原位生成ROS作為共反應(yīng)劑,來(lái)特異性檢測(cè)Aβ肽。具體來(lái)講,利用Au-S鍵將β-淀粉樣蛋白的適體固定在金電極表面。當(dāng)Aβ與Cu²⁺結(jié)合形成復(fù)合物后,可以通過(guò)適體與靶標(biāo)的特異性結(jié)合捕獲... 

【文章來(lái)源】：青島科技大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Aβ聚集示意圖

電致化學(xué)發(fā)光技術(shù)用于β-淀粉樣蛋白體系檢測(cè)的研究8圖1-3.多銅氧化酶銅藍(lán)蛋白的結(jié)構(gòu)，其中三個(gè)單核T1銅位點(diǎn)（深藍(lán)色）和三核T2/T3銅位點(diǎn)（青色），另外橙色顯示的是Fe2+的結(jié)合位點(diǎn)，而灰色顯示的是Ca2+的結(jié)合位點(diǎn)[13]。Figure1-3.Thestructureofthemulticopperoxidaseceruloplasminwithitssixactivesitecoppersshownindarkblue(mononuclearT1sites)andcyan(trinuclearO2-reducingT2/T3site).TheFe2+siteisshowninorangeandtheCa2+siteisshowningray.1.2.活性氧1.2.1活性氧的定義活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)是對(duì)氧不完全還原時(shí)形成的化學(xué)物質(zhì)的一個(gè)統(tǒng)稱。它主要包括超氧陰離子(O2-)，過(guò)氧化氫(H2O2)，單線態(tài)氧(1O2)和羥基自由基(OH)。這些化學(xué)物質(zhì)參與生物體的生化反應(yīng)，并且在調(diào)節(jié)生物體的各種生理功能中起著必不可少的作用。適量的ROS是生物體發(fā)育所必需的，而過(guò)量的ROS會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激，這種氧化應(yīng)激涉及多種疾病，例如癌癥[49]，AD[13]，炎癥[50]等。1.2.2ROS與生物學(xué)在1908年，Warburg在受精后的海膽卵中觀察到氧氣消耗增加（H2O2的呼吸爆發(fā)），這是ROS生物學(xué)中一個(gè)重要的里程碑。雖然ROS被廣泛用作細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，但是對(duì)于此仍存在爭(zhēng)議。OH和1O2擴(kuò)散的距離相對(duì)較短，只能存在于分割的時(shí)空中，因此，它們不能在細(xì)胞的氧化還原信號(hào)通路中起作用。此外，O2-具有不穩(wěn)定性及其無(wú)法跨膜擴(kuò)散的特性，這也使得這種類型的ROS不能成為良好的信號(hào)分子。相比較而言，H2O2溫和的反應(yīng)性能，高特異性，強(qiáng)擴(kuò)散性和膜滲透性，使得它成為細(xì)胞間傳遞信息的“信使”。

青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文21列[118]。如圖2-1所示，通過(guò)Au-S鍵將β-淀粉樣蛋白的適體固定在金電極表面。當(dāng)Aβ與Cu2+結(jié)合形成復(fù)合物后，可以通過(guò)適體與靶標(biāo)的特異性結(jié)合捕獲到電極表面。當(dāng)Aβ-Cu2+捕獲到電極表面后，可以在AA存在的情況下催化O2產(chǎn)生ROS，進(jìn)而增強(qiáng)魯米諾的ECL發(fā)光信號(hào)。因?yàn)锳β16不會(huì)纖維化，所以被用作研究Aβ與Cu2+結(jié)合的模型[119]。在本論文中，使用Aβ16作為研究的模型。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)設(shè)計(jì)的ECL適體傳感器對(duì)Aβ單體具有良好的分析性能。此外，本文提出的傳感器不僅能夠在緩沖溶液中進(jìn)行檢測(cè)，而且在人的血清中也表現(xiàn)出良好的性能。圖2-1.基于Aβ-Cu2+復(fù)合物催化ROS的產(chǎn)生來(lái)增強(qiáng)魯米諾ECL信號(hào)的方案設(shè)計(jì)。Figure.2-1.SchemeillustrationoftheluminolECLenhancingmechanismbasedoninsitugenerationofROSacceleratedbyCu2+-Aβcomplexes.2.2.實(shí)驗(yàn)部分2.2.1化學(xué)試劑及藥品所有的化學(xué)試劑都是分析純。魯米諾和三（2-羧乙基）膦(TCEP)購(gòu)買自阿拉丁試劑公司。Aβ16、Aβ40和Aβ的適體鏈均來(lái)自上海生工生物工程股份有限公司。其序列包括以下，適體鏈：5ˊ–HS–GCCTGTGGTGTTGGGGCGGGTGCG-3ˊ、Aβ16：DAEFRHDSGYEVHHQK和Aβ40：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAILGLMVGGVV。癌胚抗原(CEA)、牛血清白蛋白(BSA)和甲胎蛋白(AFP)從博賽購(gòu)買。NaCl，KCl，NaH2PO4，Na2HPO4，CuSO4購(gòu)自博迪（中國(guó)，天津）�？箟难�(AA)購(gòu)自能源化工（中國(guó)，上海）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所使用的水均為超純水。2.2.2儀器ECL檢測(cè)在MPI-EECL儀器（中國(guó)西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司）上進(jìn)行。電化學(xué)阻抗(EIS)檢測(cè)使用CHI660E電化學(xué)工作站（中國(guó)，上海），檢測(cè)液含


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