阿爾茨海默病的重要病理特征之一就是主要由微管結(jié)合蛋白Tau所形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。由于Tau蛋白和硫酸乙酰肝素在神經(jīng)細胞中是共定位的,因此為了模擬體內(nèi)硫酸乙酰肝素介導(dǎo)的Tau蛋白錯誤折疊,我們在體外實驗中加入了一種多聚陰離子-肝素-來誘導(dǎo)Tau蛋白形成纖維,定量研究了人Tau蛋白微管結(jié)合核心區(qū)片段Tau244-372與肝素的相互作用。研究結(jié)果表明,在生理還原環(huán)境中,肝素與Tau244-372形成緊密結(jié)合的1：1復(fù)合物,而在病理氧化環(huán)境中,肝素與Tau244-372形成中等強度結(jié)合的1：1復(fù)合物。對人Tau蛋白錯誤折疊過程的動力學(xué)分析表明,當肝素濃度與Tau蛋白濃度相等時,Tau蛋白纖維的生長速率最快,而在肝素濃度超過Tau蛋白濃度的條件下,Tau蛋白纖維的生長速率隨著肝素濃度的增加而逐漸降低。實驗結(jié)果表明,一方面,肝素與Tau蛋白單體形成1：1復(fù)合物,誘導(dǎo)Tau蛋白發(fā)生構(gòu)象變化,進而促進Tau蛋白的錯誤折疊；另一方面,過量的肝素通過提高介質(zhì)的離子強度來抑制Tau蛋白的錯誤折疊。該研究結(jié)果將有助于闡釋肝素誘發(fā)Tau蛋白錯誤折疊的分子機制以及阿爾茨海默病的發(fā)病機制。鉛離子對人、特別是對發(fā)育中... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 蛋白質(zhì)錯誤折疊與人類疾病的關(guān)系
        1.1.1 蛋白質(zhì)的錯誤折疊
        1.1.2 蛋白質(zhì)錯誤折疊與神經(jīng)退行性疾病
        1.1.3 阿爾茨海默病與Tau蛋白
    1.2. Tau蛋白
        1.2.1 Tau蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 Tau蛋白的功能
        1.2.3 Tau蛋白的修飾
        1.2.4 Tau的突變體及其影響
    1.3. 影響Tau蛋白纖維形成的因素
        1.3.1 肝素與Tau蛋白
        1.3.2 鉛離子與Tau蛋白
        1.3.3 大分子擁擠與Tau蛋白
    1.4. 研究方法
        1.4.1 紫外光譜法
        1.4.2 等溫滴定量熱法
        1.4.3 透射電鏡
        1.4.4 圓二色技術(shù)
        1.4.5 熒光光譜法
    1.5. 本課題的研究意義
        1.5.1 肝素與Tau蛋白的相互作用以及肝素對Tau纖維形成的影響
        1.5.2 鉛離子與Tau蛋白的相互作用及其對Tau纖維形成的影響
        1.5.3 大分子擁擠對Tau纖維形成的影響
第二章 肝素與Tau蛋白相互作用的定量分析及其生物學(xué)意義
    2.1 摘要
    2.2 引言
    2.3 實驗材料與儀器
        2.3.1 實驗材料
        2.3.2 主要儀器
    2.4 實驗方法
244-372的表達、純化以及鑒定">        2.4.1 Zau_244-372的表達、純化以及鑒定
244-372纖維生長及檢測">        2.4.2 Tau_244-372纖維生長及檢測
244-372與肝素相互作用的檢測">        2.4.3 Tau_244-372與肝素相互作用的檢測
    2.5 實驗結(jié)果
        2.5.1 Tau蛋白純化結(jié)果
        2.5.2 還原條件下Tau與肝素的相互作用
        2.5.3 氧化條件下Tau與肝素的相互作用
        2.5.4 還原條件下肝素介導(dǎo)的Tau纖維的形成
        2.5.5 氧化條件下肝素介導(dǎo)的Tau纖維的形成
        2.5.6 人Tau樣品的形態(tài)學(xué)特征
        2.5.7 全長Tau蛋白與肝素的相互作用以及肝素對全長Tau蛋白纖維化的影響
    2.6 討論
第三章 鉛離子促進Tau蛋白錯誤折疊的分子機制
    3.1 摘要
    3.2 引言
    3.3 實驗材料與儀器
        3.3.1 實驗材料
        3.3.2 主要儀器
    3.4 實驗方法
        3.4.1 質(zhì)粒與蛋白質(zhì)
        3.4.2 ThT結(jié)合分析
        3.4.3 動力學(xué)分析
        3.4.4 ANS分析
        3.4.5 圓二色光譜分析
        3.4.6 傅里葉紅外光譜
        3.4.7 透射電鏡
        3.4.8 等溫滴定量熱法
    3.5 實驗結(jié)果
244-372以及突變體的獲得">        3.5.1 Tau_244-372以及突變體的獲得
        3.5.2 鉛離子的加入促進了Tau蛋白纖維的生成
244-372二級結(jié)構(gòu)的影響">        3.5.3 鉛離子對Tau_244-372二級結(jié)構(gòu)的影響
244-372纖維的形態(tài)學(xué)">        3.5.4 透射電鏡檢測Tau_244-372纖維的形態(tài)學(xué)
        3.5.5 鉛離子對Tau蛋白聚集的影響與組氨酸有關(guān)
        3.5.6 鉛離子與Tau蛋白相互作用的熱力學(xué)
        3.5.7 Tau蛋白纖維的細胞毒性檢測
    3.6 討論
第四章 大分子擁擠加速了人Tau蛋白纖維的形成
    4.1 摘要
    4.2 引言
    4.3 實驗材料與儀器
    4.4 實驗方法
    4.5 實驗結(jié)果
244-372纖維動力學(xué)">        4.5.1 大分子擁擠促進了Tau_244-372纖維動力學(xué)
244-372分子間二硫鍵的形成">        4.5.2 大分子擁擠促進了Tau_244-372分子間二硫鍵的形成
244-372突變體V363I纖維動力學(xué)">        4.5.3 大分子擁擠促進了Tau_244-372突變體V363I纖維動力學(xué)
    4.6 討論
參考文獻
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄
致謝



本文編號：2919801