本文關(guān)鍵詞：阿爾茨海默病的胞吞機(jī)制和風(fēng)險(xiǎn)因素研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Clathrin、PICALM在早期阿爾茨海默病細(xì)胞模型中表達(dá)改變 目的：近來(lái)研究顯示阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）與網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的胞吞途徑（Clathrin-mediated endocytosis，CME）密切相關(guān)。在AD中，CME相關(guān)蛋白的表達(dá)改變。早期AD的病理改變?nèi)鏏β（amyloid β peptide）產(chǎn)生、N-甲基-D-天冬氨酸受體表達(dá)很可能與CME功能異常相關(guān)。因此本部分的目的在于建立阿爾茨海默病的皮層神經(jīng)元模型，研究CME的改變，為探討CME途徑參與阿爾茨海默病的調(diào)控機(jī)制。 方法：首先優(yōu)化培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)新生SD乳鼠皮層神經(jīng)元，，獲得高純度的原代神經(jīng)元細(xì)胞。然后以Aβ1-42寡聚體建立AD細(xì)胞模型，最后采用逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR)、細(xì)胞免疫熒光技術(shù)及免疫印記（Western blotting，WB）從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)水平探測(cè)AD細(xì)胞模型中CME關(guān)鍵蛋白網(wǎng)格蛋白（clathrin）、磷脂酰肌醇連接網(wǎng)格蛋白組裝蛋白（Phosphatidylinositolbinding clathrin assembly protein，PICALM）的表達(dá)情況。 結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，1μM組（1μM Aβ1-42寡聚體處理1h）皮層神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量無(wú)明顯改變、代謝率下降（p＜0.05）；而5μM組（5μM Aβ1-42寡聚體處理1h）凋亡明顯，代謝率明顯下降（p＜0.01）。因此選擇1μM作為干預(yù)，建立AD細(xì)胞模型。RT-PCR、WB及細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示AD細(xì)胞模型中calthrin蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯升高（p＜0.05），PICALM蛋白及mRNA表達(dá)改變并不明顯（p＞0.05）。 結(jié)論：Clathrin、PICALM是CME關(guān)鍵蛋白。在神經(jīng)細(xì)胞中clathrin借助PICALM錨定細(xì)胞膜聚集內(nèi)陷形成CME的起始結(jié)構(gòu)網(wǎng)格蛋白被膜囊泡。因此clathrin與PICALM非協(xié)同性改變很可能引起CME功能障礙，最終導(dǎo)致AD中多種細(xì)胞功能的異常。 第二部分Chitinase1在APP/PS1鼠中表達(dá)增加 目的：文獻(xiàn)報(bào)道AD患者腦脊液、外周血中殼多糖酶1（chitinase1）表達(dá)增加。聯(lián)合chitinase1、Aβ及Tau蛋白診斷AD，準(zhǔn)確率高達(dá)91%，因此有人認(rèn)為chitinase1是下一個(gè)有力的AD診斷指標(biāo)。然而AD中chitinase1作用尚不明晰。因此我們?cè)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)檢查不同臨床階段APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠chitinase1的表達(dá)，探討它在AD的潛在作用。 方法：Morris水迷宮檢測(cè)4月齡、12月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠及野生型（wild type，WT）鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。酶聯(lián)免疫特異性測(cè)定法（enzyme-linked immunospecific assay，ELISA）、實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)水平檢測(cè)不同月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠及WT鼠皮層chitinase1的表達(dá)。 結(jié)果：Morris水迷宮顯示隱藏平臺(tái)期12月齡APP/PS1組較WT組逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)（P＜0.05），4月齡組間無(wú)差異（P＞0.05）；空間搜索期WT組在中心區(qū)域路徑百分比更高（P＜0.05），APP/PS1組在邊緣區(qū)域路徑百分比更高（P＜0.05）。ELISA法和qRT-PCR檢測(cè)chitinase1蛋白與mRNA水平顯示12月齡APP/PS1組較12月齡WT組、4月齡WT組、4月齡APP/PS1組明顯增加（P＜0.05），而后三組之間chitinase1表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。 結(jié)論：4月齡APP/PS1鼠有空間學(xué)習(xí)障礙，無(wú)空間記憶障礙；12月齡APP/PS1鼠的空間學(xué)習(xí)記憶均下降。因此前者處于AD早期認(rèn)知下降不明顯，后者處于AD中晚期認(rèn)知障礙明顯。Chitinase1的表達(dá)在高低月齡的WT組間無(wú)差異，而在高齡APP/PS1明顯增高。這提示chitinase1與年齡無(wú)關(guān)，與認(rèn)知降低有關(guān)，因此它很可能是認(rèn)知障礙的一種標(biāo)志。 第三部分認(rèn)知障礙與營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)性研究 目的：認(rèn)知障礙是困擾老年人的常見(jiàn)癥狀。嚴(yán)重影響老年人生活質(zhì)量，加重家庭及社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。然而目前的醫(yī)療手段仍無(wú)法治愈，治療以改善癥狀、延緩進(jìn)餐為主。因此掌握認(rèn)知障礙的危險(xiǎn)因素對(duì)于它的防治異常的重要。 方法：2011年4月至2012年10月，橫斷面研究重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院老年病科及重慶市江北區(qū)南橋寺社區(qū)服務(wù)中心老年患者（年齡≥60歲）的一般健康問(wèn)題。老年人綜合健康評(píng)估量表包括問(wèn)卷調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室及體格檢查。所有的調(diào)查及操作均由專業(yè)培訓(xùn)醫(yī)師完成。 結(jié)果：平均年齡73.1±8.0歲，其中男性占43.9%，MNA-SF平均分?jǐn)?shù)為12.5（SD=1.9，4-14）,MMSE平均分?jǐn)?shù)為27.1（SD=2.1，10-30）。營(yíng)養(yǎng)不良率和營(yíng)養(yǎng)不良風(fēng)險(xiǎn)率分別為3.2%，19.3%,認(rèn)知障礙率為18.8%。統(tǒng)計(jì)分析顯示輕度認(rèn)知障礙與營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)相關(guān)。常吃魚類降低營(yíng)養(yǎng)不良的風(fēng)險(xiǎn)。 結(jié)論：與營(yíng)養(yǎng)良好的老年人相比，營(yíng)養(yǎng)不良的患者認(rèn)知能力更差。因此維持老年人良好的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，對(duì)于延緩認(rèn)知減退可能有一定的幫助。多吃魚類是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。不過(guò)這還需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 阿爾茨海默病細(xì)胞模型 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)胞吞途徑 clathrin PICALM 阿爾茨海默病 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠 認(rèn)知能力 chitinase1 老年人健康綜合評(píng)估 營(yíng)養(yǎng)狀況 認(rèn)知能力
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 摘要6-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-19
• 第一部分 Clathrin、PICALM 在阿爾茨海默病細(xì)胞模型中的表達(dá)改變19-41
• 1 材料與方法19-27
• 2 結(jié)果27-33
• 3 討論33-40
• 4 小結(jié)40-41
• 第二部分 Chitinase 1 在 APP/PS1 鼠中表達(dá)增加41-51
• 1 材料與方法41-44
• 2 結(jié)果44-48
• 3 討論48-50
• 4 小結(jié)50-51
• 第三部分 認(rèn)知障礙與營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)性研究51-61
• 1 研究方法51-53
• 2 結(jié)果53-58
• 3 討論58-60
• 4 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 文獻(xiàn)綜述66-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文75-76

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 冷幸生;邵蔚;;1187名老年人健康檢查情況分析[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2008年22期

2 林紅,張拓紅,楊輝,王成彪,段立嶸,張曉萍,龔廣才;北京市895名老年人慢性病現(xiàn)狀及其影響因素分析[J];中國(guó)慢性病預(yù)防與控制;2002年06期

  本文關(guān)鍵詞：阿爾茨海默病的胞吞機(jī)制和風(fēng)險(xiǎn)因素研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：290704