發(fā)布時間：2017-04-07 15:10

  本文關鍵詞：阿爾茨海默病的胞吞機制和風險因素研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Clathrin、PICALM在早期阿爾茨海默病細胞模型中表達改變 目的：近來研究顯示阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease，AD）與網(wǎng)格蛋白介導的胞吞途徑（Clathrin-mediated endocytosis，CME）密切相關。在AD中，CME相關蛋白的表達改變。早期AD的病理改變?nèi)鏏β（amyloid β peptide）產(chǎn)生、N-甲基-D-天冬氨酸受體表達很可能與CME功能異常相關。因此本部分的目的在于建立阿爾茨海默病的皮層神經(jīng)元模型，研究CME的改變，為探討CME途徑參與阿爾茨海默病的調(diào)控機制。 方法：首先優(yōu)化培養(yǎng)技術，培養(yǎng)新生SD乳鼠皮層神經(jīng)元，，獲得高純度的原代神經(jīng)元細胞。然后以Aβ1-42寡聚體建立AD細胞模型，最后采用逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR)、細胞免疫熒光技術及免疫印記（Western blotting，WB）從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個水平探測AD細胞模型中CME關鍵蛋白網(wǎng)格蛋白（clathrin）、磷脂酰肌醇連接網(wǎng)格蛋白組裝蛋白（Phosphatidylinositolbinding clathrin assembly protein，PICALM）的表達情況。 結(jié)果：與正常對照組相比，1μM組（1μM Aβ1-42寡聚體處理1h）皮層神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量無明顯改變、代謝率下降（p＜0.05）；而5μM組（5μM Aβ1-42寡聚體處理1h）凋亡明顯，代謝率明顯下降（p＜0.01）。因此選擇1μM作為干預，建立AD細胞模型。RT-PCR、WB及細胞免疫熒光結(jié)果顯示AD細胞模型中calthrin蛋白及mRNA表達水平明顯升高（p＜0.05），PICALM蛋白及mRNA表達改變并不明顯（p＞0.05）。 結(jié)論：Clathrin、PICALM是CME關鍵蛋白。在神經(jīng)細胞中clathrin借助PICALM錨定細胞膜聚集內(nèi)陷形成CME的起始結(jié)構(gòu)網(wǎng)格蛋白被膜囊泡。因此clathrin與PICALM非協(xié)同性改變很可能引起CME功能障礙，最終導致AD中多種細胞功能的異常。 第二部分Chitinase1在APP/PS1鼠中表達增加 目的：文獻報道AD患者腦脊液、外周血中殼多糖酶1（chitinase1）表達增加。聯(lián)合chitinase1、Aβ及Tau蛋白診斷AD，準確率高達91%，因此有人認為chitinase1是下一個有力的AD診斷指標。然而AD中chitinase1作用尚不明晰。因此我們設計實驗檢查不同臨床階段APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠chitinase1的表達，探討它在AD的潛在作用。 方法：Morris水迷宮檢測4月齡、12月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠及野生型（wild type，WT）鼠的學習記憶能力。酶聯(lián)免疫特異性測定法（enzyme-linked immunospecific assay，ELISA）、實時定量反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個水平檢測不同月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠及WT鼠皮層chitinase1的表達。 結(jié)果：Morris水迷宮顯示隱藏平臺期12月齡APP/PS1組較WT組逃避潛伏期明顯延長（P＜0.05），4月齡組間無差異（P＞0.05）；空間搜索期WT組在中心區(qū)域路徑百分比更高（P＜0.05），APP/PS1組在邊緣區(qū)域路徑百分比更高（P＜0.05）。ELISA法和qRT-PCR檢測chitinase1蛋白與mRNA水平顯示12月齡APP/PS1組較12月齡WT組、4月齡WT組、4月齡APP/PS1組明顯增加（P＜0.05），而后三組之間chitinase1表達無明顯差異（P＞0.05）。 結(jié)論：4月齡APP/PS1鼠有空間學習障礙，無空間記憶障礙；12月齡APP/PS1鼠的空間學習記憶均下降。因此前者處于AD早期認知下降不明顯，后者處于AD中晚期認知障礙明顯。Chitinase1的表達在高低月齡的WT組間無差異，而在高齡APP/PS1明顯增高。這提示chitinase1與年齡無關，與認知降低有關，因此它很可能是認知障礙的一種標志。 第三部分認知障礙與營養(yǎng)不良相關性研究 目的：認知障礙是困擾老年人的常見癥狀。嚴重影響老年人生活質(zhì)量，加重家庭及社會的經(jīng)濟負擔。然而目前的醫(yī)療手段仍無法治愈，治療以改善癥狀、延緩進餐為主。因此掌握認知障礙的危險因素對于它的防治異常的重要。 方法：2011年4月至2012年10月，橫斷面研究重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院老年病科及重慶市江北區(qū)南橋寺社區(qū)服務中心老年患者（年齡≥60歲）的一般健康問題。老年人綜合健康評估量表包括問卷調(diào)查、實驗室及體格檢查。所有的調(diào)查及操作均由專業(yè)培訓醫(yī)師完成。 結(jié)果：平均年齡73.1±8.0歲，其中男性占43.9%，MNA-SF平均分數(shù)為12.5（SD=1.9，4-14）,MMSE平均分數(shù)為27.1（SD=2.1，10-30）。營養(yǎng)不良率和營養(yǎng)不良風險率分別為3.2%，19.3%,認知障礙率為18.8%。統(tǒng)計分析顯示輕度認知障礙與營養(yǎng)狀態(tài)相關。常吃魚類降低營養(yǎng)不良的風險。 結(jié)論：與營養(yǎng)良好的老年人相比，營養(yǎng)不良的患者認知能力更差。因此維持老年人良好的營養(yǎng)狀態(tài)，對于延緩認知減退可能有一定的幫助。多吃魚類是一個不錯的選擇。不過這還需要進一步的研究證實。
【關鍵詞】：阿爾茨海默病 阿爾茨海默病細胞模型 網(wǎng)格蛋白介導胞吞途徑 clathrin PICALM 阿爾茨海默病 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鼠 認知能力 chitinase1 老年人健康綜合評估 營養(yǎng)狀況 認知能力
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 摘要6-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-19
• 第一部分 Clathrin、PICALM 在阿爾茨海默病細胞模型中的表達改變19-41
• 1 材料與方法19-27
• 2 結(jié)果27-33
• 3 討論33-40
• 4 小結(jié)40-41
• 第二部分 Chitinase 1 在 APP/PS1 鼠中表達增加41-51
• 1 材料與方法41-44
• 2 結(jié)果44-48
• 3 討論48-50
• 4 小結(jié)50-51
• 第三部分 認知障礙與營養(yǎng)不良相關性研究51-61
• 1 研究方法51-53
• 2 結(jié)果53-58
• 3 討論58-60
• 4 結(jié)論60-61
• 參考文獻61-66
• 文獻綜述66-74
• 參考文獻71-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文75-76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 冷幸生;邵蔚;;1187名老年人健康檢查情況分析[J];社區(qū)醫(yī)學雜志;2008年22期

2 林紅,張拓紅,楊輝,王成彪,段立嶸,張曉萍,龔廣才;北京市895名老年人慢性病現(xiàn)狀及其影響因素分析[J];中國慢性病預防與控制;2002年06期

  本文關鍵詞：阿爾茨海默病的胞吞機制和風險因素研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：290704