發(fā)布時間：2020-10-28 09:30

　　 膿毒癥是指由侵襲性感染引起的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS),是ICU患者死亡的主要原因之一。譫妄是一種臨床狀態(tài),以認(rèn)知和意識等功能出現(xiàn)急性波動性紊亂為特征,在危重病人中發(fā)生率高達(dá)80%,特別是在膿毒癥病人。目前,急性腦功能障礙被認(rèn)為是影響膿毒癥病人發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后和死亡的重要因素。但關(guān)于膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙預(yù)防和治療方面尚無研究報道,且其病理機制仍然不清。炎癥被認(rèn)為在膿毒癥性認(rèn)知并發(fā)癥中起重要作用。尿胰蛋白酶抑制劑(Urinary trypsin inhibitor, UTI),是一種來源于成人尿的絲氨酸蛋白酶抑制劑,通過抑制中性粒細(xì)胞浸潤和彈性蛋白酶等化學(xué)介質(zhì)的釋放來發(fā)揮抗炎作用。本研究擬利用腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)造成大鼠膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙模型研究UTI是否對膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng),并對其機制進(jìn)行初步研究,為臨床治療膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙提供新的思路。 實驗一LPS刺激所致膿毒癥模型存在急性認(rèn)知功能障礙 目的:證實LPS所致膿毒癥存在急性認(rèn)知功能損害。 方法:健康成年雄性SD大鼠每組15只,隨機分成:LPS-16組動物經(jīng)腹腔注射LPS 16mg/kg(溶于1ml生理鹽水),LPS-8組動物經(jīng)腹腔注射LPS 8mg/kg(溶于1ml生理鹽水),NS組動物經(jīng)腹腔注射等容積的生理鹽水(NS)。腹腔注射LPS后1、4、7 h進(jìn)行線索學(xué)習(xí)實驗。 另45只大鼠,分組方法和實驗設(shè)計同上,在腹腔注射LPS后1、4、7 h進(jìn)行Morris水迷宮實驗。 為曠場實驗,另45只大鼠被納入本實驗中,分組和設(shè)計方法同上。在腹腔注射LPS之前和注射之后的1、2和3天進(jìn)行曠場實驗。 另45只大鼠用來觀察給予LPS/NS后24小時大鼠的死亡率,分組和設(shè)計方法同上。 結(jié)果:線索學(xué)習(xí)實驗結(jié)果表明,NS組、LPS-8組和LPS-16組大鼠有相似的逃避潛伏期、游泳速度和游泳距離(P 0.05)。Morris水迷宮結(jié)果表明,LPS-16組大鼠在腹腔注射LPS后4和7 h的逃避潛伏期明顯延長(與NS組或LPS-8組相比,P 0.01 );三組大鼠的游泳距離和游泳速度均無統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。曠場實驗結(jié)果表明,在腹腔注射LPS后的第1、2天,LPS-16組和LPS-8組大鼠運動次數(shù)和活動距離與NS組相比,明顯減少(P 0.05或0.01)。在腹腔注射LPS后的第2天,LPS-16組大鼠運動次數(shù)和活動距離與LPS-8組相比明顯增加(P 0.05或P 0.01)。LPS-16組大鼠在給予LPS后24小時,6只大鼠死亡(與NS組相比,P0.05);而LPS-8組大鼠沒有死亡。 結(jié)論:腹腔注射LPS所致大鼠膿毒癥存在急性認(rèn)知功能損害。 實驗二研究膿毒癥并發(fā)急性認(rèn)知功能障礙的炎癥機制 目的:探討炎癥因子TNF-alpha和IL-1beta在膿毒癥所致認(rèn)知功能障礙發(fā)生機制中的作用。 方法:雄性SD大鼠39只隨機分為3組:LPS-16組:經(jīng)腹腔注射LPS 16mg/kg(溶于1ml生理鹽水),LPS-8組:經(jīng)腹腔注射LPS 8mg/kg(溶于1ml生理鹽水),NS組:經(jīng)腹腔注射等容積的生理鹽水(NS)。在注射LPS或NS后4 h,每組動物抽取8只采集血樣測定血清炎癥因子TNF-alpha、IL-1beta及神經(jīng)損傷標(biāo)志NSE水平;其余5只動物被麻醉后灌注取腦做NSE免疫組化研究。 結(jié)果:與NS組相比,腹腔注射LPS后4 h,LPS-8組和LPS-16組大鼠血清TNF-alpha和IL-1beta水平明顯增加(P 0.05或 0.01);LPS-16組大鼠血清TNF-alpha和IL-1beta水平高于LPS-8組(P 0.05)。LPS-16組大鼠血清NSE水平高于NS組和LPS-8組(P 0.01)。LPS-16組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元NSE免疫反應(yīng)性累積光密度值(IOD)明顯較NS組低(P 0.01)。 結(jié)論:血清炎癥因子TNF-alpha、IL-1beta水平的變化和與腦損傷相關(guān)的血清和神經(jīng)元中NSE的變化與膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙關(guān)系密切。 實驗三烏司他丁對膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙的保護(hù)效應(yīng)研究 目的:研究UTI對膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙的保護(hù)效應(yīng)。 方法:健康雄性SD大鼠每組15只,隨機分成:NS+NS、NS+UTI-5、NS+UTI-20、LPS+NS、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組。LPS+NS、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組動物均腹腔注射LPS 16mg/kg(溶于1ml生理鹽水)誘導(dǎo)膿毒癥。NS+NS、NS+UTI-5和NS+UTI-20組動物腹腔注射1ml生理鹽水(NS)作為對照。在腹腔注射LPS或NS后30 min,NS+UTI-5、NS+UTI-20、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組動物分別腹腔注射UTI 50或200 kU/kg(溶于1ml生理鹽水),NS+NS組和LPS+NS組腹腔注射1ml生理鹽水作為對照。分別在腹腔注射LPS或NS后1、4和7 h進(jìn)行線索學(xué)習(xí)實驗。另90只大鼠,分組方法和實驗設(shè)計同上,在腹腔注射LPS后1、4、7 h進(jìn)行Morris水迷宮實驗。 為曠場實驗,另90只大鼠被納入本實驗中,分組和設(shè)計方法同上。在腹腔注射LPS之前和注射之后的1天進(jìn)行曠場實驗。 另90只大鼠用來觀察給予LPS/NS后24小時大鼠的死亡率,分組和設(shè)計方法同上。 結(jié)果:給予LPS后24小時,LPS+NS組有6/15只動物死亡(與NS+NS組相比,P0.05);LPS+UTI-5組有3/15只動物死亡(與LPS+NS組相比,P=0.427);LPS+UTI-20組有1/15只動物死亡(與LPS+NS組相比,P=0.08)。在線索學(xué)習(xí)實驗中,NS+NS、NS+UTI-5、NS+UTI-20、LPS+NS、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組大鼠有相似的潛伏期、游泳速度和游泳距離(P 0.05)。Morris水迷宮結(jié)果表明,腹腔注射LPS后4和7 h,LPS+NS組大鼠的逃避潛伏期和游泳距離與NS+NS組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P 0.01)。腹腔注射LPS后4 h,LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組大鼠逃避潛伏期和游泳距離比LPS+NS組明顯縮短(P 0.01)。腹腔注射LPS后7 h,LPS+UTI-20組大鼠的逃避潛伏期和游泳距離明顯比LPS+NS組短(P 0.01)。腹腔注射LPS后4和7 h,LPS+UTI-20組大鼠逃避潛伏期和游泳距離與LPS+UTI-5組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P 0.05或 0.01)。在試驗中,各組大鼠的游泳速度沒有明顯差異。 結(jié)論:UTI明顯改善膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙并且改善膿毒癥的預(yù)后。 實驗四烏司他丁對膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙的保護(hù)效應(yīng)機制研究 目的:研究UTI對膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙的治療效應(yīng)機制。 方法:健康雄性SD大鼠78只,隨機分成:NS+NS、NS+UTI-5、NS+UTI-20、LPS+NS、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組。LPS+NS、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組動物腹腔注射LPS 16mg/kg(溶于1ml生理鹽水)誘導(dǎo)膿毒癥。NS+NS、NS+UTI-5和NS+UTI-20組動物腹腔注射1ml生理鹽水作為對照。在腹腔注射LPS或NS后30 min,NS+UTI-5、NS+UTI-20、LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組動物分別腹腔注射UTI 50或200 kU/kg(溶于1ml生理鹽水);NS+NS和LPS+NS組動物注射1ml生理鹽水作為對照。在注射LPS或NS后4 h,每組動物抽取8只,采集血樣測定血清炎癥因子TNF-alpha, IL-1beta及NSE水平;其余5只動物被麻醉后灌注取腦做NSE免疫組化研究。 結(jié)果:腹腔注射LPS后4 h,LPS+NS組大鼠血清TNF-alpha和IL-1beta水平均較NS+NS組明顯增加(P 0.01);50或200 kU/kg UTI均可逆轉(zhuǎn)LPS引起的血清TNF-alpha和IL-1beta水平增加(P 0.01或 0.05)。LPS+NS組大鼠血清NSE水平較NS+NS組明顯增加(P 0.01);LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組大鼠血清NSE水平較LPS+NS組明顯減少(P 0.01)。LPS+NS組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元NSE免疫反應(yīng)性累積光密度值(IOD)較NS+NS組的IOD值明顯減低(P 0.01);LPS+UTI-5和LPS+UTI-20組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元NSE的IOD值較LPS+NS組顯著增高(P 0.01)。 結(jié)論:炎癥因子TNF-alpha和IL-1beta在UTI對膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙的治療效應(yīng)機制中起重要作用。 結(jié)論 我們通過Morris水迷宮試驗和血清中炎癥因子及腦中NSE的改變來證明腹腔注射LPS所致膿毒癥模型存在急性認(rèn)知功能障礙,其機制與炎癥因子密切相關(guān);烏司他丁是通過抑制炎癥因子,減輕腦損傷,從而改善膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R459.7;R749.161
【部分圖文】：

圖 1. 內(nèi)毒素導(dǎo)致的早期凝血系統(tǒng)的活化免疫效應(yīng)細(xì)胞識別 LPS 識別序列；②細(xì)胞因子的釋放；③）介導(dǎo)的組織因子（tissue factor，TF）的表達(dá)；④ TNF-α 介導(dǎo)（TLR；F-factor；t-PA）的活化。

圖 1. 內(nèi)毒素導(dǎo)致的早期凝血系統(tǒng)的活化天免疫效應(yīng)細(xì)胞識別 LPS 識別序列；②細(xì)胞因子的釋放；③白-6）介導(dǎo)的組織因子（tissue factor，TF）的表達(dá)；④ TNF-α 介導(dǎo)的統(tǒng)（TLR；F-factor；t-PA）的活化。

通過激活鳥苷酸環(huán)化酶升高血管平滑肌細(xì)胞中環(huán)鳥核苷酸水平，從而導(dǎo)致系統(tǒng)性的血管舒張和循環(huán)阻力降低。給予一氧化氮合成酶抑制劑后，膿毒癥休克病人的低血壓在幾分鐘之內(nèi)即可恢復(fù)正常[19]。圖 3 顯示了膿毒癥的炎癥反應(yīng)過程。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 徐康清,黑子清,黃文起,朱艷玲,陳秉學(xué),譚潔芳;烏司他丁在體外循環(huán)心臟手術(shù)中對氧自由基的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2001年12期

2 林勝璋,鄭志強,吳偉軍,俞輝軍,游濤,陳聰;烏司他丁對大鼠肝缺血-再灌流損傷的保護(hù)作用[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

3 謝紅浪;連續(xù)性腎臟替代療法治療膿毒血癥[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2002年04期

4 曾文紅,白國強;烏司他丁研究進(jìn)展[J];中華肝膽外科雜志;2001年01期

5 白育庭,閔清,鄒啟耀,涂仲凡;烏司他丁對急性壞死性胰腺炎大鼠肺局部致炎因子的影響及意義[J];中國急救醫(yī)學(xué);2002年01期

本文編號：2859906