酒精依賴或酒精成癮對(duì)個(gè)體和社會(huì)的危害是有目共睹的,相關(guān)機(jī)制的闡明有助于人們認(rèn)識(shí)并幫助酒精成癮者擺脫酒精依賴�，F(xiàn)有研究證明,腦內(nèi)獎(jiǎng)賞通路的重要核團(tuán)(如VTA、NAc和LHb)參與酒精依賴或酒精成癮的形成,并在其中發(fā)揮著重要的作用。最新的研究顯示,表觀遺傳修飾可能在酒精依賴形成中發(fā)揮著不可忽視的作用。本研究聚焦于表觀遺傳修飾中的甲基化修飾的關(guān)鍵酶——DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)、10-11易位蛋白(ten-eleven translocations,TETs)和組蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(protein-arginine methyltransferases,PRMTs),探討酒精依賴動(dòng)物模型腦神經(jīng)核團(tuán)NAc和LHb內(nèi)甲基化修飾關(guān)鍵酶的變化及可能作用。我們首先制備了酒精依賴動(dòng)物模型,通過(guò)讓大鼠自由選擇飲用水和20%酒精溶液,我們獲得了兩組不同程度酒精依賴的大鼠模型——高酒精依賴組和低酒精依賴組。低酒精依賴組對(duì)酒精的偏愛(ài)百分比不隨飲酒天數(shù)發(fā)生變化,基本保持在10~20%的之間,而高酒精依賴大鼠隨著飲酒天數(shù)的增加對(duì)酒精的偏愛(ài)明顯增加,飲酒第十天后酒精偏愛(ài)百分比可達(dá)到相對(duì)較高的水平,穩(wěn)定在20~30%之間,即高酒精依賴大鼠對(duì)酒精的偏愛(ài)程度明顯高于低酒精依賴大鼠。我們推測(cè),大鼠對(duì)酒精依賴程度的不同可能與腦獎(jiǎng)賞通路中特定神經(jīng)核團(tuán)的不同興奮程度有關(guān),因此我們用免疫組化方法檢測(cè)了酒精依賴模型大鼠飲酒前NAc和LHb內(nèi)c-Fos蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,與正常對(duì)照大鼠相比,高酒精依賴和低酒精依賴大鼠的NAc和LHb中c-Fos陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量均明顯增加,說(shuō)明NAc和LHb的活動(dòng)與酒精渴求有關(guān),參與酒精依賴的形成;此外,高酒精依賴大鼠LHb內(nèi)c-Fos陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯多于低酒精依賴大鼠,表明在酒精依賴動(dòng)物模型中LHb內(nèi)c-Fos陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量與酒精依賴程度有關(guān)。我們又檢測(cè)了Camk2a、Camk2b和GLT-1這些神經(jīng)興奮關(guān)聯(lián)基因的表達(dá)情況。與正常對(duì)照大鼠相比,酒精依賴大鼠LHb和NAc中Camk2a和Camk2b m RNA表達(dá)均明顯升高,GLT-1 m RNA表達(dá)均明顯降低,提示酒精依賴大鼠LHb和NAc神經(jīng)元興奮性較高。接下來(lái)我們檢測(cè)了酒精依賴大鼠NAc和LHb內(nèi)甲基化關(guān)鍵酶——DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1、DNMT3A)、10-11易位蛋白(TET1、TET2)和組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶(PRMT1、PRMT5)的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,與正常對(duì)照大鼠相比,酒精依賴大鼠LHb神經(jīng)元DNMT1 m RNA表達(dá)明顯降低,PRMT1 m RNA表達(dá)明顯升高,其他甲基化關(guān)聯(lián)酶m RNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化,提示酒精依賴大鼠LHb神經(jīng)元DNA甲基化程度下降,而組蛋白甲基化增加。另外,酒精依賴大鼠NAc神經(jīng)元DNMT1和PRMT1 m RNA表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照大鼠,其他甲基化關(guān)聯(lián)酶m RNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化,提示酒精依賴大鼠NAc神經(jīng)元DNA甲基化和組蛋白甲基化程度均有提高。我們推測(cè),LHb和NAc內(nèi)DNMT1和PRMT1的變化與酒精依賴形成有關(guān),更多研究有待于后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R749.62
【文章目錄】：
前言
摘要
Abstract
英文詞表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 酒精依賴及其原理
        1.1.1 酒精依賴
        1.1.2 與酒精依賴有關(guān)的神經(jīng)原理
            1.1.2.1 中腦腹側(cè)被蓋與酒精依賴
            1.1.2.2 韁核與酒精依賴
            1.1.2.3 伏隔核與酒精依賴
        1.1.3 酒精依賴與抑郁行為
    1.2 表觀遺傳學(xué)
        1.2.1 DNA甲基化與羥甲基化
        1.2.2 組蛋白修飾
    1.3 表觀遺傳學(xué)與酒精依賴
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑和藥品
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 酒精依賴動(dòng)物模型的制備
        2.2.2 免疫組織化學(xué)染色
        2.2.3 Real-time qPCR
        2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒電轉(zhuǎn)
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 酒精依賴大鼠的特征
    3.2 酒精依賴大鼠外側(cè)韁核和伏隔核c-Fos表達(dá)增加
    3.3 酒精依賴大鼠神經(jīng)興奮關(guān)聯(lián)基因m RNA表達(dá)
        3.3.1 酒精依賴大鼠LHb內(nèi)神經(jīng)興奮關(guān)聯(lián)基因mRNA表達(dá)
        3.3.2 酒精依賴大鼠NAc內(nèi)神經(jīng)興奮關(guān)聯(lián)基因mRNA表達(dá)
    3.4 酒精依賴大鼠甲基化關(guān)鍵酶mRNA表達(dá)
        3.4.1 酒精依賴大鼠LHb內(nèi)甲基化關(guān)鍵酶mRNA表達(dá)
        3.4.2 酒精依賴大鼠NAc內(nèi)甲基化關(guān)鍵酶mRNA表達(dá)
    3.5 mRNA引物的特異性及擴(kuò)增產(chǎn)物大小確定
        3.5.1 用于real-time PCR的mRNA引物的特異性確定
        3.5.2 real-time PCRm RNA擴(kuò)增產(chǎn)物大小確定
    3.6 PRMT1基因沉默效果的驗(yàn)證
        3.6.1 shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的觀察
        3.6.2 PRMT1基因敲減效率的檢測(cè)
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝

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本文編號(hào)：2839739