發(fā)布時(shí)間：2020-08-24 20:15

【摘要】： 阿爾茨海默癥(Alzheimer's disease,AD)是患病率最高的老年性神經(jīng)系統(tǒng)疾病,臨床以記憶力、感覺能力、判斷力、思維能力、運(yùn)動(dòng)能力、情感反應(yīng)等降低為主。構(gòu)建阿爾茨海默癥的細(xì)胞模型對研究其病因、病理過程以及篩選防治阿爾茨海默病的新藥具有重要作用。本研究使用RT-PCR的方法從人神經(jīng)細(xì)胞中克隆了多個(gè)AD相關(guān)基因。在此基礎(chǔ)上用pcDNA3.1真核表達(dá)載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞、G418篩選后獲得了APPsw(Lys595Asn,Met596Leu)和野生型BACE1轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株�；蚪MDNA PCR、RT-PCR和Western blot結(jié)果表明目的基因轉(zhuǎn)染成功并在mRNA和蛋白質(zhì)水平穩(wěn)定表達(dá),APPsw蛋白和BACE1蛋白表達(dá)對U251細(xì)胞形態(tài)無明顯影響,APPsw(Lys595Asn,Met596Leu)轉(zhuǎn)染后APP蛋白和Abeta的表達(dá)量與對照組相比明顯增多,BACE1轉(zhuǎn)染組的Abeta產(chǎn)量明顯增多。本研究結(jié)果將為以后深入研究阿爾茨海默癥分子機(jī)制和藥物篩選奠定實(shí)驗(yàn)和物質(zhì)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：北京交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R749.16
【圖文】：

adamlo基因的PCR擴(kuò)一增結(jié)果(adamlo圖l.10taee基[A1的PCR擴(kuò)增結(jié)wasamplifiedbyPCR)M:DL2000，l:adam1oamPlifiedbyPCR)M:DLZ000，1:二、重組體的鑒定和測序結(jié)果

1重組體pMD18一Tzapp的NeoFsalx雙酶切鑒定結(jié)果(pMD18一T/appwasidentifiednenz卿eNeo1andsall)l，3，4，7，9，一。，l一可以酶切出兩條帶，為正確重組體;2，s，重組體2.設(shè)計(jì)引物App84O/APPll73，pCR鑒定Appisoforms結(jié)果(DesignedpriAPPll73andidentifiedbypCR)4號是appvl;3，7，9，11號是appvZ:10

2.設(shè)計(jì)引物App84O/APPll73，pCR鑒定Appisoforms結(jié)果(DesignedPPll73andidentifiedbypCR)4號是appvl;3，7，9，11號是appvZ:1異構(gòu)體測序結(jié)果克隆過程中，抽取3個(gè)菌液樣品各取100ul送北京奧科測序，采用T正反向測序結(jié)果如下:測序結(jié)果:atgetgeeegqtttgqeaetgCteetgetggCCgeetggacqgCtCgCtggaggtaCcCaCtga匕qgtaatgctgqCCtqetggCtgaaCCeeaga七七geeCtgtggCagaCtgaaea七‘JcaCatqaatgtCCagaatgggaagtqggattCagataggqaeCaaaaeetgeattqataeeaagqaaggeateCtgeagtattgeeaagaaeeetgaaCtqeagateae‘二aatgtggtagaageeaaeCaaCCagtgaCCatCCaggtgCaaqCqqggCCgCaaJCaqtgCaagaCCCatCCCCaCtttgtgattCCCtae

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本文編號：2802796