發(fā)布時間：2020-07-30 18:31

【摘要】： 研究背景和目的: 已有的研究表明,可溶性和纖維性β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)在阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)發(fā)病過程中均發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,如何有效地抑制其神經(jīng)毒性作用已經(jīng)成為AD治療的關(guān)鍵問題。Humanin及其衍生物S14G-Humanin(HNG)的發(fā)現(xiàn),為開發(fā)AD治療藥物帶來了新的希望,但迄今為止,對于其在Aβ所致神經(jīng)功能損害中的治療作用及相關(guān)機制仍然缺乏深入的研究。本項課題(1)應用小鼠海馬腦片,首次從突觸可塑性的角度,探討HNG拮抗Aβ神經(jīng)毒性的作用及其相關(guān)機制;(2)應用轉(zhuǎn)基因AD動物模型(APP/PS-1小鼠),進一步深入探討HNG在AD病程進展中的治療作用及其相關(guān)機制;為Humanin及其衍生物未來的臨床應用提供可靠的實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 研究方法: 1.以小鼠海馬腦片為研究對象,應用神經(jīng)電生理技術(shù)、免疫組織化學方法和Western blot方法,探討HNG對于可溶性Aβ所致突觸可塑性損害的治療作用及其相關(guān)機制。 2.以轉(zhuǎn)基因AD動物模型(APP/PS-1小鼠)為研究對象,應用多種行為學研究方法、免疫組織化學方法和熒光染色方法,探討HNG對于AD轉(zhuǎn)基因小鼠行為學障礙的治療作用及其相關(guān)機制。 研究結(jié)果: 1.正常對照組、Aβ25-35組、HNG組和Aβ25-35+不同濃度HNG組,隨著刺激強度的增加,海馬CA1區(qū)興奮性突觸后電位(EPSP)波幅和斜率均逐漸增加,在相同刺激強度條件下各個處理組產(chǎn)生的EPSP斜率沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)。 2.與正常對照組相比,Aβ25-35組明顯抑制海馬CA1區(qū)早期長時程增強(E-LTP)和晚期長時程增強(L-LTP)的產(chǎn)生(P0.001),而HNG并不影響海馬CA1區(qū)E-LTP和L-LTP的產(chǎn)生(P0.05)。 3.使用不同濃度的HNG(100nM、200nM和400nM)可以不同程度地改善Aβ25-35對海馬CA1區(qū)E-LTP和L-LTP的抑制作用。與Aβ25-35組相比,HNG 100nM組可以增加E-LTP和L-LTP的產(chǎn)生但并無統(tǒng)計學差異(P0.05),HNG 200nM組可以明顯改善E-LTP和L-LTP的產(chǎn)生(P0.05),而HNG 400nM組則可以完全逆轉(zhuǎn)Aβ對E-LTP和L-LTP的抑制作用(P0.001)。 4.在E-LTP中,正常對照組、HNG組、Aβ25-35組和Aβ25-35+ HNG組海馬CA1區(qū)p-CREB(Ser133)的含量沒有明顯改變(P0.05)。在L-LTP中,與正常對照組和HNG組相比,Aβ25-35組海馬CA1區(qū)p-CREB(Ser133)的含量明顯減少(P0.001);而與Aβ25-35組相比,Aβ25-35+ HNG組海馬CA1區(qū)p-CREB(Ser133)的含量明顯增加(P0.001)。 5.在Morris水迷宮實驗中,與APP/PS-1+生理鹽水治療組相比,APP/PS-1+HNG治療組能夠明顯縮短定向航行實驗中小鼠找到平臺的潛伏期,并明顯增加空間探索實驗中小鼠在目標象限出現(xiàn)的時間(P0.05)。在被動回避實驗中,與APP/PS-1+生理鹽水治療組相比,APP/PS-1+HNG治療組能夠明顯延長小鼠電擊刺激后自明箱進入暗箱的潛伏期(P0.05)。在主動回避實驗中,與APP/PS-1+生理鹽水治療組相比,APP/PS-1+HNG治療組能夠明顯增加記憶獲取實驗和記憶保持實驗中小鼠的主動回避次數(shù)(P0.05)。 6.與APP/PS-1+生理鹽水治療組海馬和大腦皮層Aβ斑塊面積相比,APP/PS-1+HNG治療組海馬和大腦皮層Aβ斑塊面積沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)。與APP/PS-1+生理鹽水治療組海馬和大腦皮層纖維性Aβ斑塊面積相比,APP/PS-1+HNG治療組海馬和大腦皮層纖維性Aβ斑塊面積顯著減少(P0.001)。 研究結(jié)論: 1.低濃度的可溶性Aβ通過抑制小鼠海馬CA1區(qū)E-LTP和L-LTP的產(chǎn)生損害突觸可塑性。 2.HNG能夠改善可溶性Aβ對于海馬CA1區(qū)E-LTP和L-LTP的抑制作用,保護突觸可塑性,兩者之間存在劑量依賴關(guān)系。 3.可溶性Aβ對海馬CA1區(qū)E-LTP的抑制效應及HNG相應的保護作用與p-CREB(Ser133)無關(guān)。 4.可溶性Aβ通過減少海馬CA1區(qū)p-CREB(Ser133)的表達,抑制L-LTP的產(chǎn)生;HNG可以增加p-CREB(Ser133)的含量,改善可溶性Aβ對于海馬CA1區(qū)L-LTP的抑制作用,發(fā)揮突觸可塑性保護功能。 5.HNG可以改善APP/PS-1轉(zhuǎn)基因小鼠空間學習記憶功能、傷害性刺激記憶功能和條件反射性學習記憶功能。 6.HNG不影響APP/PS-1小鼠海馬和大腦皮層Aβ的數(shù)量,但可以抑制纖維性Aβ斑塊的形成和沉積。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R749.16

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Separation and analysis of the soluble trimer of Aβ_(1-40) and its effects on the rise in intracellular calcium[J];Chinese Science Bulletin;2006年07期

2 鄭曉惠;王麗s

本文編號：2775918