【摘要】：首發(fā)抑郁癥遺傳效應及遺傳模式的初步研究 目的 探討首發(fā)抑郁癥的遺傳效應及遺傳模式。 方法 采用嚴格的納入和排除標準，對107例首次發(fā)作的抑郁癥患者即先證者進行詳細的家族史調(diào)查，調(diào)查范圍包括先證者的一至三級親屬共4439人，詢問親屬中各種精神疾病的患病情況，繪制家系圖。(1)對曾經(jīng)明確診斷或疑似有精神疾病的親屬逐個面檢或由知情者描述病情，根據(jù)DSM-IV診斷標準做出診斷，然后計算各種精神疾病尤其是抑郁癥的患病率。(2)采用醫(yī)學遺傳數(shù)理統(tǒng)計方法分離分析中的χ~2測驗法和子女總數(shù)校正法，以及多基因遺傳的Falconer閾值模式分析，初步探討首發(fā)抑郁癥的遺傳模式。 結(jié)果 (1)先證者中，有各種精神疾病家族史者占42.99％(46例)，有抑郁癥家族史者占26.17％(28例)，占所有有陽性家族史者的60.87％(28例／46例)。(2)一至三級親屬中抑郁癥的患病率為0.87％(29例)，顯著高于群體患病率(0.02％，P＜0.01)；其中女性的患病率(1.36％)顯著高于男性(0.41％，P＜0.01)。一、二、三級親屬抑郁癥的患病率分別為7.46％、0.37％和0.05％，與群體患病率比較，前兩者分別有非常顯著性差異(P＜0.01)和顯著性差異(P＜0.05)，后者無顯著性差異(P＞0.05)；各級親屬中女性的患病率均高于男性，其中一級親屬女性患病率為16.12％，男性患病率為8.44％，有非常顯著性差異(P＜0.01)。(3)單基因分離分析的χ~2測驗法顯示χ~2=63.48，差異有非常顯著性意義(P＜0.001)，提示首發(fā)抑郁癥不符合常染色體顯性遺傳；采用子女總數(shù)校正法校正后的分離率為0.20，與隱性遺傳的分離率0.25比較，差異無顯著性意義(P＞0.05)，表明符合常染色體隱性遺傳模式。(4)多基因閾值模式分析發(fā)現(xiàn)，加權(quán)平均遺傳率及標準誤為(109.73±5.26)％，計算得出一、二、三級親屬的預期患病率分別為7.20％、0.62％和0.13％，經(jīng)吻合度檢驗與實際患病率(分別為7.46％、0.37％和0.05％)的差異均無顯著性意義(P均＞0.05)，表明遺傳模式可能為多基因遺傳，由于遺傳率超過100％，提示可能存在主基因效應，加之由 同胞患病率估計的遺傳率高于由父母患病率估計的遺傳率，故推測存在隱性主基因。 結(jié)論 (1)首發(fā)抑郁癥具有明顯的遺傳效應，與患者血緣關(guān)系越近，患病率越高；(2)首發(fā)抑郁癥可能符合具有隱性主基因效應的多基因遺傳模式。 抑郁癥與cAMP反應元件結(jié)合蛋白CREB1基因的關(guān)聯(lián)和表達研究 目的 探討cAMP反應元件結(jié)合蛋白(cyclic AMP response element-binding protein，CREB1)基因與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。研究抑郁癥患者和健康對照外周血白細胞中CREB1基因的表達水平，探討該基因與抑郁癥的關(guān)系以及抗抑郁藥治療對基因表達水平的影響。 方法 (1)收集105個抑郁癥核心家系，均抽取外周靜脈全血，提取基因組DNA。采用限制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(RFLP-PCR)方法對CREB1基因上的兩個單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNP)rs10932201和rs6740584進行基因分型。計算每個SNP位點的等位基因及基因型頻率。采用ETDT軟件進行單個位點的傳遞／不平衡檢驗(transmission disequilibrium test，TDT)來分析每個SNP與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系，采用EMLD程序分析成對SNP之間的連鎖不平衡(linkage disequilibrium，LD)。最后應用TRANSMIT 2．5．2軟件進行多個位點的單體型TDT分析，以探討CREB1基因單體型與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。(2)采集36例首次發(fā)作未服用任何抗抑郁藥的抑郁癥患者、15例抗抑郁藥治療滿12周后的抑郁癥患者及44例健康對照的新鮮外周血1.5ml，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。在ABI 7900型實時定量PCR儀上，采用TaqMan MGB探針法對抑郁癥患者與健康對照的CREB1基因表達水平進行相對定量，以管家基因GAPDH作為內(nèi)對照基因來標化CREB1基因的表達水平，繪制CREB1基因和內(nèi)對照基因兩條標準曲線來測定待測樣本中CREB1基因的起始拷貝數(shù)。比較抑郁癥患者與健康對照、及抑郁癥患者治療前后的基因表達水平。根據(jù)性別、發(fā)病年齡、HAMD-24和HAMA量表評分等將治療前36例患者分為不同的亞組，評估CREB1基因表達水平與性別、發(fā)病年齡、抑郁癥狀嚴重程度、抑郁癥狀各因子、焦慮癥狀及抗抑郁藥治療療效之間的關(guān)系。 結(jié)果 (1)單個SNP位點的TDT分析結(jié)果顯示，CREB1基因上rs10932201和rs6740584兩個SNP位點與抑郁癥均無陽性關(guān)聯(lián)，TDT χ2值分別為2.700(P=0.1004)和0.458(P=0.4986)。(2)應用EMLD程序分析發(fā)現(xiàn)，兩個SNP位點rs10932201和rs6740584之間的D'值為0.884，表明rs10932201和rs6740584之間存在強的LD，位于一個SNP單體型上。(3)單體型TDT分析結(jié)果顯示由rs10932201和rs6740584構(gòu)成的單體型與抑郁癥存在強陽性關(guān)聯(lián)，差異具有非常顯著性(總χ2=23.458，df=3，P=0.00003241)。而單個單體型A-C和A-T與抑 郁癥也均有陽性關(guān)聯(lián)，差異具有顯著性和非常顯著性(χ2值分別為5.405和13.623，P值分別為0.020和0.00022)。(4)36例治療前組抑郁癥患者、15例治療前組*和治療后組*患者(標記*的兩組為治療滿12周后隨訪到的15對患者)、以及44例健康對照的外周血CREB1基因平均表達量(amole／0.3μl cDNA)分別為0.197±0.103、0.232±0.140、0.186±0.065和0.168±0.055。治療前組患者與健康對照組之間的CREB1基因表達量無顯著性差異(t=1.503，P=0.139)。治療前后的CREB1基因表達量也無顯著性改變(t=1.029，P=0.321)。(5)根據(jù)性別對治療前組36例患者進行分組，發(fā)現(xiàn)男性患者與男性對照、女性患者與女性對照以及男性患者與女性患者之間的CREB1基因表達量均無統(tǒng)計學差異(P分別為0.157、0.669和0.133)。(6)根據(jù)發(fā)病年齡將治療前組36例患者分為早發(fā)組和晚發(fā)組，發(fā)現(xiàn)無論患者的發(fā)病年齡早晚，其CREB1基因表達量均與健康對照組無統(tǒng)計學差異(P均＞0.05)，但早發(fā)組與健康對照組的表達量差異接近顯著性水平(P=0.054)。(7)根據(jù)HAMD-24量表評分，將治療前組36例患者分為重度抑郁組和輕中度抑郁組，發(fā)現(xiàn)無論是重度抑郁組，還是輕中度抑郁組，其CREB1基因表達水平均與健康對照組無統(tǒng)計學差異(P均＞0.05)。又根據(jù)HAMA量表評分，將治療前組36例患者分為有重度焦慮組和輕中度焦慮組，發(fā)現(xiàn)其CREB1基因表達水平也與健康對照組無統(tǒng)計學差異(P均＞0.05)。采用Pearson相關(guān)分析研究抑郁癥患者CREB1基因表達量與HAMD-24和HAMA量表各因子分之間的相關(guān)關(guān)系，發(fā)現(xiàn)無論在治療前還是治療后，患者的基因表達水平均與各癥狀亞群無相關(guān)(P均＞0.05)。(8)計算HAMD-24量表減分率為平均0.798±0.147，以治療滿12周的15對患者治療后CREB1基因的平均表達水平變化為-0.045±0.170。經(jīng)Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)兩者之間無相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為-0.172(P=0.540)。 結(jié)論 (1)CREB1基因上rs10932201和rs6740584兩個SNP位點與抑郁癥均無關(guān)聯(lián)，但由這兩個SNP位點構(gòu)成的單體型與抑郁癥存在強陽性關(guān)聯(lián)，表明CREB1基因rs10932201-rs6740584單體型可能在抑郁癥的遺傳學發(fā)病機制中起重要作用，CREB1基因可能是抑郁癥的易感基因。(2)抑郁癥患者外周血的CREB1基因表達水平與健康對照無顯著性差異，與性別、發(fā)病年齡、臨床癥狀群無關(guān)，而且抗抑郁藥治療對外周血CREB1基因的表達水平無顯著影響。 抑郁癥與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF基因的關(guān)聯(lián)研究 目的 探討腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)基因與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。 方法 收集105個抑郁癥核心家系，均抽取外周靜脈全血，提取基因組DNA，采用限制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(RFLP-PCR)方法對BDNF基因上的三個單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNP)rs6265、rs10835210和rs2030324進行基因分型。計算每個SNP位點的等位基因及基因型頻率。采用ETDT軟件進行單個位點的傳遞／不平衡檢驗(transmission disequilibrium test，TDT)來分析每個SNP與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系，采用EMLD程序分析成對SNP之間的連鎖不平衡(linkage disequilibrium，LD)，并應用GOLD程序作圖。最后應用TRANSMIT 2．5．2軟件進行多個位點單體型的TDT分析，以探討B(tài)DNF基因上由單個SNP構(gòu)成的單體型與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。 結(jié)果 (1)單個SNP位點的TDT分析結(jié)果顯示，BDNF基因上rs6265、rs10835210和rs2030324三個SNP位點與抑郁癥均無陽性關(guān)聯(lián)，TDT χ2值為0.374(P=0.5408)、0.474(P=0.4913)和0.000(P=1.0000)。(2)應用EMLD程序分析三個SNP位點rs6265、rs10835210和rs2030324兩兩之間的LD，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rs6265-rs10835210和rs6265-rs2030324均存在LD(D'值分別為0.447和0.669)，rs10835210-rs2030324則存在強的LD(D'值為0.922)，表明rs6265、rs10835210和rs2030324位于一個SNP單體型上。(3)單體型TDT分析結(jié)果顯示，由BDNF基因rs6265、rs10835210和rs2030324三個SNP位點構(gòu)成的單體型與抑郁癥無陽性關(guān)聯(lián)(總χ2=9.216，df=6，P=0.162)。單個單體型的TDT分析發(fā)現(xiàn)，由三個SNP構(gòu)成的7個單體型與抑郁癥均未顯示陽性關(guān)聯(lián)(P均＞0.05)，但單體型A-A-T與抑郁癥之間的差異接近顯著性水平(P=0.061)。 結(jié)論 研究結(jié)果顯示BDNF基因上三個SNP rs6265、rs10835210和rs2030324及其構(gòu)成的單體型與抑郁癥無顯著關(guān)聯(lián)，提示BDNF基因在抑郁癥的病因?qū)W中可能不起主要作用。
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R749.4
【圖文】：

通過邊緣系統(tǒng)引發(fā)抑郁癥狀的出現(xiàn)[7’一74]。Duman等和Urani等認為，抑郁癥的神經(jīng)發(fā)生假說可能只是一個“細胞可塑性假說”，他們將信號級聯(lián)cAMP一CREB一BDNF一TrkB作為聯(lián)系抑郁癥樹突重塑、神經(jīng)元存活下降和海馬神經(jīng)發(fā)生減少之間的橋梁，這一信號級聯(lián)被稱為“神經(jīng)營養(yǎng)通路”。由此出現(xiàn)了抑郁癥的“神經(jīng)營養(yǎng)假說”，該假說的核心為CREB一BDNF一TrkB組成的通路[64一66]。許多信號分子(如神經(jīng)遞質(zhì)、生長因子等)，通過作用于cAMP一或ca2+一活化的激酶，或直接激活酪氨酸激酶，導致轉(zhuǎn)錄因子e雙B發(fā)生磷酸化，進而增強由。AMP反應元件(eAMpresponseelement，CRE)介導的下游靶基因BDNF的轉(zhuǎn)錄，BDNF再通過激活特定的受體TrkB發(fā)揮生理作用。研究表明，應激及其后的血漿皮質(zhì)類固醇水平增高等因素均能引起CREB一BDNF一TrkB營養(yǎng)通路活性下降，而動物實驗發(fā)現(xiàn)多種抗抑郁藥長期治療不僅能預防應激誘導的該信號系統(tǒng)減弱，還能上調(diào)其活性(圖1為抑郁癥的神經(jīng)營養(yǎng)假說示意圖)。值得注意的是，抗抑郁藥短期治療并不能起到上述作用，這與臨床上抗抑郁藥起效緩慢的現(xiàn)象一致[65，66，68，69]。

復旦大學博士學位論文正文(第二部分)我們對36例治療前組患者、15例治療后組患者和44例健康對照進行熒光實時定量PCR擴增。目的基因和內(nèi)對照基因的擴增效率均高(見圖2一4)，復孔重復性好(見圖2一5)。本研究對每個反應板都設立了陰性對照孔，以檢測實驗是否被污染。經(jīng)檢驗證明擴增產(chǎn)物不是來自污染(見圖2一6)。

復旦大學博士學位論文正文(第二部分)我們對36例治療前組患者、15例治療后組患者和44例健康對照進行熒光實時定量PCR擴增。目的基因和內(nèi)對照基因的擴增效率均高(見圖2一4)，復孔重復性好(見圖2一5)。本研究對每個反應板都設立了陰性對照孔，以檢測實驗是否被污染。經(jīng)檢驗證明擴增產(chǎn)物不是來自污染(見圖2一6)。 100031 1.000曰1nU內(nèi) nUnUU八U八U 1.000E4““爪‘’理一幾一黔‘一一-一含一丫一獷沙”井一’_圣、丫-二二~一_二一二一，一二---一一_一惻，……癮才，竹 竹………吻蟒寸…一 一 05101620偽‘.e 253035叨圖2一4.部分樣本CREBI基因及GApDH基因的幾qMan實時定量PCR擴增曲線 .000E+1 1.000 1.000曰1.000曰21000卜3 1.00064III一·，「_二_二，，_」 」蕎蕎汗節(jié)布下…品入方工妥升干于 于一一:一士。-------一甘:一于耳/矛;一廠一‘t--一一一一汗二_丁資下將才一今聲分一_了‘ ‘謬謬二沙…李二一一二-一一 一 06101620263036叨心加‘.e圖2一 5cREBI基因和GApDH基因幾qMan實時定量PCR擴增標準曲線的單個樣本復孔曲線。均重復2次，2條擴增曲線重疊

【引證文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前2條

1 王磊;GSK-3β基因表達在抑郁障礙治療前后行為模式中的作用[D];山西醫(yī)科大學;2012年

2 張娟;豬INTELECTIN2基因克隆及分子特性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

本文編號：2754511