【摘要】：研究背景 阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,主要表現(xiàn)為記憶和認(rèn)知功能障礙、行為及人格異常改變,隨著年齡增長(zhǎng)發(fā)病率逐年攀升,21世紀(jì)人口老齡化問題突顯,AD將成為威脅老年人生活質(zhì)量并導(dǎo)致死亡的最嚴(yán)重疾病之一,這給患者、家庭及社會(huì)帶來了極大的痛苦和沉重的負(fù)擔(dān)。但時(shí)至今日,其發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚,診斷手段嚴(yán)重滯后,特效的治療方法更是無從談起。因此,明確其發(fā)病機(jī)理,探索早期高效診斷方法,尋找有明顯療效藥物已成為當(dāng)前和將來應(yīng)對(duì)AD的三個(gè)環(huán)節(jié),其重要性不言而喻,其緊迫性迫在眉睫。 目的 1.探討β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)致神經(jīng)組織和BV2小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生炎性反應(yīng)的機(jī)制。 2.探討脂氧素A4 (lipoxin A4 , LXA4)抑制β-淀粉樣蛋白(β-amyloid ,Aβ)所致炎性反應(yīng)的機(jī)制,及其用于治療阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的前景。 3.通過靶向納米造影劑結(jié)合核磁共振成像,對(duì)AD腦內(nèi)的老年斑班病灶進(jìn)行活體顯像,以明確AD的診斷。 方法 1.用Aβ1-42刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系(BV2 cells)和C57BL/6小鼠顱內(nèi)神經(jīng)組織;或用吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)預(yù)處理后,再給予Aβ1-42刺激,然后取相應(yīng)的標(biāo)本,分別檢測(cè)IL-1β和TNFα蛋白及mRNA、核因子(NF-κB p65)及其抑制蛋白IkBα的表達(dá);并對(duì)細(xì)胞中的NF-κB p65免疫熒光定位。 2.用Aβ1-42刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系(BV2 cells)和C57BL/6小鼠顱內(nèi)神經(jīng)組織;或用LXA4預(yù)處理后,再給予Aβ1-42刺激,然后取相應(yīng)的標(biāo)本,分別檢測(cè)IL-1β和TNFα蛋白及mRNA、核因子(NF-κB p65)及其抑制蛋白IkBα的表達(dá);并對(duì)細(xì)胞中的NF-κB p65免疫熒光定位。 3.制備對(duì)AD腦內(nèi)老年斑具有特異靶向性結(jié)合能力的磁性材料,對(duì)活體AD模型鼠腦內(nèi)的老年斑進(jìn)行磁共振強(qiáng)化對(duì)比顯像、無創(chuàng)診斷AD,并進(jìn)行組織學(xué)驗(yàn)證。 結(jié)果 1. Aβ1-42作用于BV2小膠質(zhì)細(xì)胞后,胞漿內(nèi)IkBα表達(dá)下降,胞核內(nèi)NF-κB p65表達(dá)明顯增加,IL-1β和TNFα蛋白及mRNA表達(dá)增加;給予PDTC后,以上改變均被抑制,PDTC的抑制效果呈劑量依賴性。 2. Aβ1-42作用于BV2小膠質(zhì)細(xì)胞后,胞漿內(nèi)IkBα表達(dá)下降,胞核內(nèi)NF-κB p65表達(dá)明顯增加,IL-1β和TNFα蛋白及mRNA表達(dá)增加;給予LXA4后,以上改變均被抑制,LXA4的抑制效果呈劑量依賴性。 3.在活體內(nèi)靶向磁性納米材料能夠透過血腦屏障與AD模型鼠腦內(nèi)的老年斑特異性結(jié)合,進(jìn)而老年斑進(jìn)行磁共振強(qiáng)化對(duì)比顯像,與組織學(xué)標(biāo)記方法互相進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果比較理想的。 結(jié)論 1. Aβ可通過激活小鼠皮層和海馬組織及BV2小膠質(zhì)細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)IL-1β和TNFαmRNA轉(zhuǎn)錄,增加IL-1β和TNFα的表達(dá)。 2. LXA4拮抗Aβ的致炎作用是通過抑制IkBα的降解、減少NF-κB核內(nèi)移,抑制IL-1β和TNFαmRNA合成,減少IL-1β和TNFα表達(dá),并且抑制作用呈劑量依賴性。 3.利用納米技術(shù)制造的磁性材料能夠與AD鼠腦內(nèi)的老年斑病灶特異性靶向結(jié)合,并在磁共振成像下顯像,是一種非常有應(yīng)用前景的診斷新技術(shù)。 創(chuàng)新點(diǎn) 1.通過體外和在體研究,從細(xì)胞和組織層面完整揭了示Aβ對(duì)神經(jīng)組織和細(xì)胞的致炎作用和機(jī)制。 2.首次從細(xì)胞和組織兩個(gè)層面揭示了脂氧素對(duì)Aβ所致的炎癥的拮抗作用,探討了其中的抗炎機(jī)制和信號(hào)通路,顯示出脂氧素用于治療AD具有廣闊前景。 3.自主研發(fā)了新的、與AD鼠腦內(nèi)老年斑病灶靶向結(jié)合、在高場(chǎng)強(qiáng)磁共振成像的納米造影劑,為將來臨床診斷AD打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),意義重大,影響深遠(yuǎn)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R749.16

【引證文獻(xiàn)】

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1 唐睿;;阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)理與治療策略[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué).醫(yī)學(xué)版);2013年02期

本文編號(hào)：2751672