【摘要】：第一部分阿爾茨海默病中早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1對(duì)乙酰膽堿酯酶的調(diào)控機(jī)制我們的前期研究表明,早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1(early growth response-1,EGR1)可能在維持阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)臨床前期膽堿能系統(tǒng)功能完整以及在AD晚期神經(jīng)退行性疾病中起到重要作用。為了探索EGR1在其中的具體工作機(jī)制,我們首先對(duì)我們合作組針對(duì)AD不同進(jìn)展階段人腦前額葉(prefrontal cortex,PFC)樣本進(jìn)行的人類(lèi)全基因組微陣列研究數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘,聚焦于EGR1和AChE在AD進(jìn)程中的表達(dá)變化及其相關(guān)性。我們?cè)诟采w了從正常對(duì)照組(Braak 0期)到AD晚期(Braak Ⅵ期)的49例樣本發(fā)現(xiàn),PFC內(nèi)EGR1-mRNA于AD早期增高而于AD晚期減低,乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)mRNA于AD全程保持穩(wěn)定且于AD晚期輕度減低。EGR1-和AChE-mRNA水平之間存在正相關(guān),尤其在Braak Ⅵ期更為顯著。我們繼而于3-12月齡三轉(zhuǎn)基因AD(triple-transgenic AD,3xTg-AD)模型小鼠額葉中研究了 EGR1-和 AChE-mRNA 表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)與年齡、性別相匹配的野生型(wild-type,WT)小鼠相比,3xTg-AD小鼠額葉中EGR1-和AChE-mRNA水平均顯著減低。此外,WT和3xTg-AD小鼠于全組以及各年齡組中,EGR1-和AChE-mRNA水平之間均存在顯著正相關(guān)。因此,3xTg-AD小鼠并不適合用于研究臨床前期或AD早期腦活性激活的現(xiàn)象及相關(guān)基因表達(dá)。繼而我們于SY5Y細(xì)胞系采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染分別上調(diào)和下調(diào)EGR1表達(dá),發(fā)現(xiàn)AChE在mRNA和蛋白水平均隨之發(fā)生同向改變;于EGR1過(guò)表達(dá)的細(xì)胞系中進(jìn)行雙熒光素酶檢測(cè),對(duì)潛在EGR1結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變,并通過(guò)電泳遷移率變動(dòng)分析實(shí)驗(yàn)(EMSA)以研究EGR1位于AChE基因啟動(dòng)子上的功能性結(jié)合位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)在三個(gè)潛在結(jié)合位點(diǎn)中靠近轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)有效參與了 EGR1直接上調(diào)AChE表達(dá),這一調(diào)控過(guò)程可能顯著參與了腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能于AD進(jìn)程中的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。第二部分臨床前期阿爾茨海默病內(nèi)嗅皮層中病理標(biāo)記物表達(dá)的性別差異阿爾茨海默病(AD)的發(fā)病具有性別差異,女性比男性更容易罹患AD且病理程度更為嚴(yán)重。但是,具體機(jī)制尚未被闡明,其中重要原因之一是缺乏來(lái)自人腦組織樣本的神經(jīng)生物學(xué)證據(jù),也即參與AD發(fā)病的分子病理學(xué)性別差異。我們計(jì)劃于死亡后人腦樣本揭示AD相關(guān)蛋白,即β淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)和過(guò)磷酸化Tau蛋白(hyperphosphorylated Tau,p-Tau)沉積是否存在性別差異,為探尋AD發(fā)病的性別差異機(jī)制奠定基礎(chǔ)。我們分析了從荷蘭人腦庫(kù)(Netherlands Brain Bank,NBB)獲得的648例覆蓋了從正常對(duì)照組(Braak 0期)到AD晚期(BraakⅥ期)個(gè)體的Braak分期和淀粉樣蛋白評(píng)分百分比分布,發(fā)現(xiàn)女性大腦AD病理累積和進(jìn)展較男性更為嚴(yán)重。在沒(méi)有被臨床診斷為癡呆癥(AD臨床前期)個(gè)體的內(nèi)嗅皮層組織樣本,我們通過(guò)4G8抗體對(duì)Aβ進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,AT8抗體對(duì)p-Tau進(jìn)行染色,并采用圖像分析技術(shù)定量染色結(jié)果,發(fā)現(xiàn)AD臨床前期女性?xún)?nèi)嗅皮層中p-Tau表達(dá)量顯著高于男性。我們進(jìn)一步采用含有人TauV337M/R406W基因慢病毒感染SY5Y細(xì)胞(Taumut-SY5Y)以構(gòu)建p-Tau過(guò)表達(dá)環(huán)境,發(fā)現(xiàn)p-Tau轉(zhuǎn)染的細(xì)胞內(nèi)EGR1和AChE表達(dá)水平均顯著增高。這些結(jié)果顯示:女性在AD早期內(nèi)嗅皮層即顯示p-Tau的累積嚴(yán)重于男性,p-Tau于AD早期可能上調(diào)了神經(jīng)元活性,包括上調(diào)細(xì)胞內(nèi)EGR1、AChE等分子表達(dá)。未來(lái)尚需全面探索在AD進(jìn)程中,尤其是AD早期階段,EGR1在AD病理的性別差異機(jī)制中對(duì)膽堿能系統(tǒng)活性(包括乙酰膽堿的生產(chǎn)、滅活)的動(dòng)態(tài)調(diào)控及分子機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【圖文】：

ＡＤ小鼠與ＷＴ小鼠一同飼養(yǎng)于２５°Ｃ、１２／１２小時(shí)晝夜交替的環(huán)境中，能夠自由獲逡逑取所需水和食物。所有３ｘＴｇ－ＡＤ小鼠均經(jīng)剪耳取組織并進(jìn)行基因型檢測(cè)，以確證逡逑攜帶轉(zhuǎn)基因ＰＳ１Ｍ１４６Ｖ、ＡＰＰＳｗｅ和ｔａｕＰ３Ｇ１Ｌ邋（見(jiàn)圖１．１）。動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程均逡逑符合國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)理事會(huì)的要求。逡逑■邋５００邋ｂｐ逡逑３５０邋ｂｐ逡逑５２邋ｂｐ逡逑圖１．１邋３ｘＴｇ－ＡＤ子代小鼠基因檢測(cè)。ＤＮＡ提取方法參照ＯｄｄｏＳ等人論文［５２】，用ＡＢｓｏｌｕｔｅｂｌｕｅ逡逑ｑＰＣＲ試劑盒獲得擴(kuò)增產(chǎn)物，并通過(guò)２％瓊脂糖膠檢驗(yàn)條帶位置。ＰＳ１＝含Ｍ１４６Ｖ突變?nèi)嗽缋襄义纤兀被�，ＡＰＰ＝含Ｋ６７０Ｎ和Ｍ６７１Ｌ突變�(nèi)说矸蹣樱械鞍浊绑w蛋白基因，Ｔａｕ＝含Ｐ３０１Ｌ突逡逑變?nèi)宋⒐芙Y(jié)合蛋白Ｔａｕ基因。逡逑８逡逑

圖１．３邋２％瓊脂糖凝肢檢測(cè)遐火效率。（：�。保睒�(biāo)記的雙鏈寡核苷酸探針，Ｐｒｏｂｅ邋＝生物素２．６．４統(tǒng)計(jì)分析逡逑針對(duì)死亡后人腦ＰＦＣ樣本的研究，驗(yàn)動(dòng)物的研究，采用平方根轉(zhuǎn)換將原以上數(shù)據(jù)進(jìn)行組間差異比較，進(jìn)一步用協(xié)方差分析對(duì)年齡、性別、腦脊液析，以確定或排除它們對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的ＷＴ小鼠之間相關(guān)參數(shù)的差異，以及數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差。采用Ｐｅ性。采用Ｓｐｅａｒｍａｎ檢測(cè)分析Ｂｒａａｋ期和Ｒｅｉｓｂｅｒｇ分組研究相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Heng-Wen Chen;Xuan-Hui He;Yan Liu;Jie Wang;;SESQUITERPENES AND MONOTERPENOID WITH ACETYLCHOLINESTERASE(ACHE) INHIBITORY ACTIVITIY FROM VALERIANA OFFICINALIS VAR.LATIOFOLIA[J];World Journal of Traditional Chinese Medicine;2015年04期

2 ;Preparation of AChE Inhibitors From Jujubogenin[J];Chinese Chemical Letters;2000年08期

3 ;Study on the Enteric Nervous Mechanism of Electroacupuncture Anti-Acute Inflammatory Visceral Pain[J];針刺研究;1997年Z1期

4 朱美財(cái),孫曼霽,辛顏彬,方允中;Monoclonal Antibodies Against Human Brain Acetylcholinesterase and Properties of Epitopes Directed by the Antibodies[J];Chinese Science Bulletin;1994年16期

5 韓文珍;;雙胎之一胎兒死亡后,正常胎兒羊水中甲胎蛋白(AFP)及乙酰膽堿脂酶(AChE)持續(xù)升高[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育分冊(cè));1987年02期

6 李錚;王書(shū)榮;許紅艷;顏坤;;蛙和鴿頂蓋峽核系統(tǒng)的乙酰膽堿酯酶染色[J];解剖學(xué)報(bào);1987年01期

7 王健本;李光千;祝善樂(lè);殷樹(shù)儀;張祜曾;;心室肌層的副交感神經(jīng)支配——HRP-AChE結(jié)合法的研究[J];解剖學(xué)報(bào);1987年03期

8 劉志誠(chéng);邱莉;洪蕾;;按摩對(duì)軟組織損傷家兔全血乙酰膽堿酯酶活力的影響[J];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;1987年04期

9 ;組織學(xué)[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué));1988年06期

10 朱美財(cái),沈志超,孫曼霽,閻國(guó)珍,辛顏彬,徐品芳;固相化AchE親和層析純化抗AchE單克隆抗體[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1988年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 ;Inhibition of acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase by coptisine and its derivatives[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)刊[C];2011年

2 張學(xué)軍;;AChE deficiency or inhibition decreases apoptosis and p53expression and protects renal function after ischemia/reperfusion[A];第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)論文摘要[C];2010年

3 MO TW;HE HY;JP CAEN;;Mammalian apoptotic cells express specially a novel AchE-isoform[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

4 高希武;周序國(guó);鄭炳宗;趙穎;;棉鈴蟲(chóng)AChE不同分子型對(duì)抑制劑的敏感度及其與抗藥性的關(guān)系[A];“植物保護(hù)21世紀(jì)展望”——植物保護(hù)21世紀(jì)展望暨第三屆全國(guó)青年植物保護(hù)科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)文集[C];1998年

5 黃齊林;王亞;徐志愛(ài);金利通;張文;;高靈敏光電化學(xué)傳感器測(cè)定小鼠血清中AChE活力[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第30屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集-第四分會(huì)：生物分析和生物傳感[C];2016年

6 ;Synthesis and Biological Evaluation of 3,6-Diaryl-7H-thiazolo[3,2-b][1,2,4]triazin-7-one Derivatives as Acetylcholinesterase Inhibitors[A];有機(jī)合成創(chuàng)新—產(chǎn)業(yè)化的新動(dòng)力——中國(guó)化學(xué)會(huì)全國(guó)第三屆有機(jī)合成化學(xué)與過(guò)程學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2010年

7 Qi Sun;Dayong Peng;Yuchao Liu;Wenchao Yang;Dawei Wang;Guangfu Yang;;Rational Design of Dual-site Acetylcholinesterase Inhibitors:Multifunction Lead for Alzheimer's Disease Therapy[A];第八屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2013年

8 魯心安;;紅細(xì)胞內(nèi)容物中AchE的抑制物及其性質(zhì)[A];動(dòng)物學(xué)專(zhuān)輯——上海市動(dòng)物學(xué)會(huì)1999年年會(huì)論文集[C];1999年

9 王瑞輝;張西翠;屈紅艷;;針刺對(duì)家兔坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)肌肉接頭處AChE變化的影響[A];第九屆中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

10 DENG Xin-rong;FAN Cai-yun;SHEN Lang-tao;LUO Zhi-fu;;Synthesis of HPPPD as an Antidote for Nerve agents[A];Annual Report of China Institute of Atomic Energy 2009[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 甘肅蘭藥藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司 張驍 蘭州市肺科醫(yī)院 束梅英;膽堿能加強(qiáng)劑的研究進(jìn)展[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 胡雨婷;阿爾茨海默病中EGR1對(duì)AChE的調(diào)控及疾病病理的性別差異研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 刁劍雄;基于蛋白表面相互作用的AChE定向固定化機(jī)理研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 張丹參;腺苷A_1受體阻斷劑對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響及機(jī)制分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

4 金其煌;乙酰膽堿酯酶在細(xì)胞凋亡中的作用及G418誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年

5 施明安;果蠅和家蠅乙酰膽堿酯酶的表達(dá)與功能研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年

6 盛榮;茚酮類(lèi)AChE抑制劑的設(shè)計(jì)、合成和構(gòu)效關(guān)系研究[D];浙江大學(xué);2005年

7 謝瓊;美普他酚衍生物的AChE抑制劑和鎮(zhèn)痛前藥的設(shè)計(jì)、合成和生物活性[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

8 郎國(guó)竣;蠶兩種類(lèi)型AChE之間及其與蠶寄生蠅AChE的比較研究[D];浙江大學(xué);2010年

9 申艷紅;茚酮及類(lèi)黃酮AChE抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及生物活性研究[D];浙江大學(xué);2008年

10 趙瑩s

本文編號(hào)：2723039