發(fā)布時間：2020-06-04 08:23

【摘要】：第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定 【目的】體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),觀察其生物學(xué)特性并對其進(jìn)行鑒定和標(biāo)記。 【方法】采用全骨髓貼壁法在體外分離培養(yǎng)大鼠MSCs,相差顯微鏡觀察MSCs細(xì)胞形態(tài),透射電鏡觀察MSCs超微結(jié)構(gòu)并繪制生長曲線,分別使用成骨細(xì)胞誘導(dǎo)液和脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)液誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞兩個方向分化。用BrdU對MSCs進(jìn)行體外標(biāo)記,通過免疫組化染色觀察并計算BrdU陽性細(xì)胞標(biāo)記率。 【結(jié)果】分離培養(yǎng)的MSCs為貼壁生長的成纖維樣細(xì)胞,傳代后的細(xì)胞均一性好。超微結(jié)構(gòu)顯示MSCs核質(zhì)比大,胞漿可見較豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等,細(xì)胞表面有大量微絨毛。第3代MSCs生長曲線呈S形,經(jīng)歷潛伏期、對數(shù)增殖期和停滯期。經(jīng)誘導(dǎo)的MSCs能分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞,茜素紅S和油紅O染色陽性。10μmol/L BrdU體外孵育48h后標(biāo)記率為90%。 【結(jié)論】體外MSCs易于分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增。體外培養(yǎng)的MSCs有獨(dú)特的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。MSCs具有多向分化潛能,可通過誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化。用BrdU標(biāo)記MSCs的濃度為10μmol/L,時間為48h。第二部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及對BDNF表達(dá)的影響 【目的】建立2-VO血管性癡呆大鼠模型。探討MSCs在VD大鼠腦組織中的存活情況,MSCs對VD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能、病理改變及腦組織內(nèi)BDNF表達(dá)的影響。 【方法】①將11～13月齡的SD大鼠隨機(jī)分成3組:假手術(shù)組(n＝10),暴露雙側(cè)頸總動脈但不結(jié)扎;模型對照組(n＝15),結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈(2-VO),30d后腦立體定位將10μl PBS注入大鼠海馬內(nèi);MSCs治療組(n＝15),2-VO 30d后腦立體定位將1×10~6 MSCs移植入大鼠海馬內(nèi)。②飼養(yǎng)4w后以Morris水迷宮檢測各組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。③HE染色后光鏡下觀察各組大鼠海馬區(qū)和額葉的病理變化。④免疫組織化學(xué)染色觀察BrdU標(biāo)記的MSCs在VD大鼠腦組織中的存活情況及BDNF在各組大鼠腦組織中的表達(dá)情況并進(jìn)行分析。 【結(jié)果】①造模前各組大鼠Morris水迷宮檢測成績差別無統(tǒng)計學(xué)意義,海馬定位移植4w后,模型對照組與假手術(shù)組比較,平均逃避潛伏期長(P＜0.01),且60s內(nèi)在原平臺象限滯留時間短(P＜0.01)。而MSCs治療組測試成績優(yōu)于模型對照組。②光鏡下可見模型對照組細(xì)胞核固縮,胞質(zhì)密度增高,細(xì)胞脫失。而MSCs治療組上述病理改變減輕。③MSCs移植4w后可在海馬及額葉觀察到BrdU標(biāo)記的MSCs。④海馬定位移植4w后,模型對照組海馬及額葉的BDNF表達(dá)較假手術(shù)組少(P＜0.05),而MSCs治療組BDNF表達(dá)較模型對照組高(P＜0.05)。 【結(jié)論】①M(fèi)SCs移植4W后,VD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力得到改善。②BrdU免疫組化染色證實(shí)MSCs能夠在移植鼠腦內(nèi)存活并遷移。③MSCs可以增加VD大鼠腦內(nèi)BDNF的表達(dá),提示MSCs可能通過增加BDNF的表達(dá)改善VD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。
【圖文】：

粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體(照片6)。(3)生長曲線的繪制不同時間，細(xì)胞生長速度不一。從第3代MSCs生長曲線(圖1一1)可以看出，曲線呈S形，，傳代后24一48h為MSCs生長潛伏期，此時主要為細(xì)

模型對照組和MSCs治療組在平臺象限滯留時間較假手術(shù)組短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。而MSCs治療組在平臺象限滯留時間較模型對照組長 (P<0.05)(圖2一2)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R749.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2696115