【摘要】： 背景與目的:大量的臨床和流行病學資料顯示,生命早期應激可影響成年后學習記憶、性格特征、情緒能力以及對應激事件的處理能力,對其適應社會、工作學習等能力產(chǎn)生重大影響,甚至增加其精神障礙特別是情感障礙的發(fā)病率。這些資料主要來自于對精神疾病患者和存在情緒、性格問題的犯罪者的回顧性研究。近5年來的一些研究試圖揭示生命早期應激與成年后精神疾病之間的生物學聯(lián)系,雖沒有明確的線索,但也提供了早期應激對神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)影響的資料:生命早期應激引起HPA軸的長期激活,導致以后對應激反應的過度增強。應激過程中HPA軸的反應增強,導致垂體促腎上腺皮質(zhì)激素和血漿皮質(zhì)醇(酮)的合成和釋放增加,引起一系列的神經(jīng)生化改變,可導致大腦邊緣系統(tǒng)器質(zhì)性損害,尤其是海馬結(jié)構(gòu)最易受到損害,并且增加情感障礙的易感性和發(fā)病率。不同的研究采用不同種類的應激,證實了生命早期應激對HPA軸的長期激活現(xiàn)象,并且可能與將來精神疾病的發(fā)病相關(guān)聯(lián)。生命早期應激是否通過HPA軸的過度激活導致邊緣系統(tǒng)結(jié)構(gòu)損害,從而對成年后情緒能力產(chǎn)生影響,尚不得而知。我們猜測,孕期和嬰幼兒時期的應激激活HPA軸,釋放較多的糖皮質(zhì)激素,一方面可造成成年后HPA軸對應激的反應增強,另一方面,過多的糖皮質(zhì)激素對邊緣系統(tǒng)特別是海馬的生長發(fā)育產(chǎn)生重要影響,從而對成年后學習記憶和情緒能力造成損害。本研究以母愛剝奪和孤養(yǎng)為生命早期應激手段,觀察生命早期應激大鼠成年后以及其接受慢性應激后,其自發(fā)活動和外周血皮質(zhì)酮濃度及受體的改變,以探討生命早期應激對成年后情緒能力影響的可能生物學機制。本研究不僅可以豐富情緒神經(jīng)生物學理論,而且為幼兒早期教育和心理干預提供理論指導,為情緒障礙的診斷治療提供生化和分子基礎(chǔ)。 研究內(nèi)容與方法:本研究分為二個部分:(1)新生鼠施以母愛剝奪應激,觀察其成年后自發(fā)活動、外周血皮質(zhì)酮濃度和海馬皮質(zhì)酮受體的改變;(2)母愛剝奪大鼠成年后再施以慢性應激,觀察慢性應激后自發(fā)活動、外周血皮質(zhì)酮的濃度及海馬皮質(zhì)酮受體的改變 結(jié)果: 1生命早期應激對大鼠成年后行為與外周血皮質(zhì)酮濃度及其受體的影響早期應激組大鼠于出生后的第3-21天和第22-60天分別接受母嬰分離和隔離飼養(yǎng)應激,對照組正常飼養(yǎng)。分別在成年后的2和3月齡測定各組大鼠的自發(fā)活動,行為學實驗結(jié)束后取血,并處死大鼠取腦。分別測定觀察2和3月齡時外周血皮質(zhì)酮濃度和海馬皮質(zhì)酮受體的改變。 1.1生命早期應激對大鼠成年后自發(fā)活動的影響應用DigBehv動物自發(fā)活動行為視頻跟蹤分析系統(tǒng),由計算機記錄大鼠的運動軌跡,并分析下列行為改變:活動總路程、中央路程、周邊路程以及總活動時間、中央時間和周邊時間。 1.1.1 1小時/日的生命早期應激對行為的影響與對照組相比,新生大鼠經(jīng)過1小時/日的生命早期應激后,2月齡時大鼠自發(fā)活動的總活動時間延長(P=0.0060.01,t檢驗);3月齡時大鼠自發(fā)活動各指標無顯著變化;與2月齡時的結(jié)果相比,3月齡時大鼠自發(fā)活動的總活動時間減少(P=0.0340.05,t檢驗)。其他指標未見顯著改變。本結(jié)果提示,1小時/日的生命早期應激可誘發(fā)成年后的焦慮樣行為,并且這種焦慮樣行為隨著鼠齡的增加而逐漸減弱。 1.1.2 3小時/日的生命早期應激對行為的影響與對照組相比,新生大鼠經(jīng)過3小時/日的生命早期應激后,2月齡時大鼠自發(fā)活動的總活動時間顯著延長(P=0.0040.01,t檢驗);3月齡時大鼠自發(fā)活動的總活動時間縮短(P=0.0410.05,t檢驗);與2月齡時的結(jié)果相比3月齡時大鼠自發(fā)活動的各指標無顯著變化。本結(jié)果提示,3小時/日的生命早期應激可誘發(fā)成年后的焦慮樣行為,這種焦慮樣行為隨著鼠齡的增加無顯著改變。 1.1.3不同強度生命早期應激對成年大鼠自發(fā)活動影響的比較比較1小時/日和3小時/日生命早期應激大鼠的自發(fā)活動,無論是2月齡或3月齡,活動總時間均隨著剝奪時間的增加而顯著延長(P0.01,t檢驗),表明隨著剝奪時間的延長,焦慮樣行為逐漸增加。 1.2生命早期應激對大鼠成年后外周血清皮質(zhì)酮水平的影響早期應激大鼠分別在成年后的2月齡和3月齡尾靜脈取血,檢測外周血清皮質(zhì)酮的濃度, 1.2.1 1小時/日的生命早期應激對大鼠成年后外周血清皮質(zhì)酮水平的影響新生大鼠經(jīng)過1小時/日的生命早期應激,其2月齡時外周血清皮質(zhì)酮濃度顯著高于對照組(P=0.0140.05,t檢驗);3月齡時外周血清皮質(zhì)酮濃度未見顯著改變;與2月齡時的結(jié)果相比,3月齡時大鼠外周血清皮質(zhì)酮濃度顯著降低(P=0.0080.01 t檢驗);結(jié)果提示1小時/日的生命早期應激可導致成年后外周血皮質(zhì)酮濃度的升高,隨著鼠齡的增長,外周血皮質(zhì)酮濃度的升高逐漸減弱。 1.2.2 3小時/日的生命早期應激對外周血清皮質(zhì)酮水平的影響新生大鼠經(jīng)過3小時/日的生命早期應激,其2月齡和3月齡的血清皮質(zhì)酮濃度均顯著高于對照組(P值分別為0.001和0.007,均小于0.01, t檢驗);與2月齡時的結(jié)果相比,3月齡時大鼠外周血清皮質(zhì)酮濃度未見顯著改變;結(jié)果提示3小時/日的生命早期應激可導致成年后皮質(zhì)酮濃度的升高,隨著鼠齡的增長,血清皮質(zhì)酮濃度的升高無明顯改變。 1.2.3不同強度生命早期應激對成年大鼠外周血清皮質(zhì)酮水平的影響的比較與1小時/日早期應激大鼠相比,無論在2月齡或3月齡, 3小時/日生命早期應激大鼠外周血皮質(zhì)酮濃度均顯著升高(P0.01,t檢驗),表明生命早期應激強度與成年后的外周血皮質(zhì)酮濃度相關(guān)。 1.3生命早期應激對大鼠成年后海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體的影響早期應激大鼠分別在成年后的2月末和3月末處死,取海馬組織,檢測皮質(zhì)酮受體的改變。 新生大鼠經(jīng)過3小時/日的生命早期應激,2月末時海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)(P=0.0010.01,t檢驗)和陽性面積比(P=0.0020.01,t檢驗)均顯著低于正常對照組;3月末時海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)和陽性面積比與正常對照組相比無顯著差異;與2月末時的結(jié)果相比,3月末時大鼠海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)和陽性面積比均顯著升高;結(jié)果提示3小時/日的生命早期應激可導致成年后海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)和陽性面積比的降低,隨著鼠齡的增長,皮質(zhì)酮受體的降低逐漸減弱。 2生命早期應激大鼠接受慢性應激后行為與血清皮質(zhì)酮及其受體的改變 2.1生命早期應激大鼠接受慢性應激后行為的改變生命早期應激大鼠成年后(2月末)接受足底電擊(電流1mA,6次/min,1s/次,隨機頻率),10分鐘/日,連續(xù)14天。大鼠于出生后91d上午9:00-10:00測定自發(fā)活動。 2.1.1 1小時/日生命早期應激接受慢性應激后大鼠行為的改變新生大鼠經(jīng)過1小時/日的生命早期應激再接受慢性應激,與正常大鼠接受慢性應激相比,自發(fā)活動總路程(P=0.0150.05,t檢驗)和總時間(P=0.0030.01, t檢驗)出現(xiàn)顯著性增加,結(jié)果提示1小時/日生命早期應激大鼠成年后再接受慢性應激,更易表現(xiàn)出焦慮行為。 2.1.2 3小時/日生命早期應激大鼠接受慢性應激后行為的改變新生大鼠經(jīng)過3小時/日的生命早期應激再接受慢性應激,與正常大鼠接受慢性應激相比,自發(fā)活動總路程(P=0.0250.05),中央路程(p=0.0020.01)和總時間(P=0.0010.01)出現(xiàn)顯著性增加,結(jié)果提示3小時/日生命早期應激大鼠成年后再接受慢性應激,更易表現(xiàn)出焦慮行為。 2.1.3不同強度生命早期應激大鼠接受慢性應激后行為改變的比較與1小時/日生命早期應激大鼠再接受慢性應激相比,3小時/日生命早期應激大鼠再接受慢性應激的自發(fā)活動總路程,周邊路程和周邊時間顯著升高(P0.01,t檢驗),結(jié)果提示慢性應激對自發(fā)活動增多的促進作用和早期應激的強度有關(guān)。 2.2生命早期應激大鼠接受慢性應激后外周血清皮質(zhì)酮濃度的改變 生命早期應激大鼠成年后(2月末)接受足底電擊(電流1mA,6次/min,1s/次,10min,隨機頻率,持續(xù)14d),大鼠于出生后92d上午8:00尾靜脈取血,分離血清,ELISA法測皮質(zhì)酮濃度。 新生大鼠經(jīng)過1小時/日和3小時/日的生命早期應激再接受慢性應激,和正常大鼠接受慢性應激相比,外周血清皮質(zhì)酮濃度均顯著升高(P0.01,t檢驗),結(jié)果提示1小時/日和3小時/日生命早期應激大鼠成年后再接受慢性應激,更易表現(xiàn)出皮質(zhì)酮濃度的升高。而比較1小時/日和3小時/日的生命早期應激大鼠,3小時/日生命早期應激大鼠再接受慢性應激的血清皮質(zhì)酮濃度顯著升高(P0.01,t檢驗),結(jié)果提示慢性應激對皮質(zhì)酮濃度升高的促進作用和早期應激的強度有關(guān)。 2.3生命早期應激大鼠接受慢性應激后海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體的改變 生命早期應激大鼠成年后(2月末)接受足底電擊(電流1mA,6次/min,1s/次,10min,隨機頻率,持續(xù)14d),在3月末處死,取海馬組織,檢測皮質(zhì)酮受體的改變。新生大鼠經(jīng)過3小時/日的生命早期應激再接受慢性應激,和正常大鼠接受慢性應激相比海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)和陽性面積比均顯著降低(P0.01,t檢驗),結(jié)果提示3小時/日生命早期應激大鼠成年后再接受慢性應激,更易表現(xiàn)出皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)和陽性面積比的降低。 結(jié)論: 1、生命早期應激可誘發(fā)大鼠成年后焦慮樣行為,這種行為改變的程度與生命早期應激的強度相關(guān),并隨鼠齡的增長而減弱; 2、生命早期應激可導致大鼠成年后外周血皮質(zhì)酮濃度升高,其升高幅度與生命早期應激強度相關(guān),并隨鼠齡的增長而減弱; 3、生命早期應激可導致大鼠成年后海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)量下降,并隨鼠齡的增長而減弱; 4、生命早期應激大鼠成年后再接受慢性應激,更易表現(xiàn)出焦慮樣行為,外周血皮質(zhì)酮濃度升高和海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體陽性細胞數(shù)的下降比正常大鼠更為顯著,這種傾向性與早期應激的強度相關(guān)。 本結(jié)果提示,生命早期應激可誘發(fā)大鼠成年后的焦慮樣行為,其機制可能與早期應激引起HPA軸的長期激活,導致外周血皮質(zhì)酮濃度長期增高,以及海馬皮質(zhì)酮受體數(shù)量減少引起皮質(zhì)酮負反饋抑制減弱有關(guān)。
【圖文】：

早期應激組 正常對照組圖10 3小時/日早期應激組2月齡海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體免疫組化（40×）早期應激組 正常對照組圖11 3小時/日生命早期早期應激組3月齡海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體免疫組化（40×）表9 3小時/日早期應激大鼠2月齡和3月齡海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體（40×）

早期應激組 正常對照組圖11 3小時/日生命早期早期應激組3月齡海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體免疫組化（40×）表9 3小時/日早期應激大鼠2月齡和3月齡海馬CA3區(qū)皮質(zhì)酮受體（40×）分組陽性面積比(%) 陽性細胞數(shù)(個)正常對照組（2月齡） 21.43±2.31 681±65早期應激組（2月齡） 8.26±1.20** 306±30**正常對照組（3月齡） 20.15±2.16 702±75早期應激組（3月齡） 16.27±3.11## 615±70##與正常對照組相比,** P<0.01,t檢驗,n=8.與2月齡早期應激組相比,## P<0.01,t檢驗,n=8.
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R749

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本文編號：2692440