【摘要】：目的： 觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植對血管性癡呆大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響,并探討其機(jī)制。比較立體定向移植與尾靜脈移植兩種方法的療效,為血管性癡呆的臨床治療提供有價值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和方法。 方法： 1、利用大鼠骨髓,通過密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選的方法分離、培養(yǎng)BMSCs,并用BrdU標(biāo)記。 2、將Wistar大鼠隨機(jī)分為以下五組：①正常對照組②假移植組③癡呆模型組④立體定位移植組⑤尾靜脈移植組。假移植組、癡呆模型組、立體定位移植組和尾靜脈移植組均采用永久結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈制作大鼠血管性癡呆模型。立體定位移植組和尾靜脈移植組造模后第7天分別將BMSCs細(xì)胞懸液約10μL(約1×106個細(xì)胞/μL)通過立體定向移植到大鼠海馬部位和通過尾靜脈注射移植,假移植組將等量生理鹽水通過立體定向移植到大鼠海馬部位,正常對照組大鼠不做處理。 3、造模前后和BMSCs移植后均進(jìn)行Morris水迷宮行為學(xué)測試,包括定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)。BMSCs移植后30天后各組大鼠斷頭取腦,制備石蠟切片,行蘇木素-伊紅(HE)染色觀察病理變化。③以NSE、GFAP、DXC及Nestin作為增殖、分化的標(biāo)記物。免疫組化染色方法檢測DXC及Nestin陽性細(xì)胞、Brdu+NSE與Brdu+GFAP的雙陽性細(xì)胞。探討不同途徑移植的MSCs在腦缺血大鼠的腦內(nèi)的存活、遷移及分化情況,并探討其機(jī)制。 結(jié)果： (1)通過密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,在體外進(jìn)行傳代、擴(kuò)增。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測分離所得細(xì)胞表達(dá)粘附分子CD90(BMSCs的標(biāo)志之一)陽性率99%,CD31(內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志)陽性率3.4%,CD34(骨髓造血干細(xì)胞標(biāo)志)陽性率0.3%,證實(shí)所分離的細(xì)胞大部分為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。(2)采用永久結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈制作血管性癡呆大鼠模型后,通過Morris水迷宮行為學(xué)測試,造模后7天、造模后30天與造模前相比,逃避潛伏期延長,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),證實(shí)造模成功。(3)BMSCs移植后30天,模型組、立體定向移植組和尾靜脈移植組進(jìn)行行為學(xué)測試,三者之間相比,立體定向移植組和尾靜脈移植組較模型組逃避潛伏期縮短(P0.05),并且立體定向移植組優(yōu)于尾靜脈移植組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(4)BMSCs移植組在移植部位可觀察到Nestin單染陽性細(xì)胞,Brdu十NSE、Brdu+GEAP雙染陽性細(xì)胞。證實(shí)移植的BMSCs已在宿主腦內(nèi)成活,并且已分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)論： (1)BMSCs可以在體外分離、培養(yǎng),傳代后可獲得純度較高的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。(2)采用永久結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈制作大鼠血管性癡呆模型簡單易行.結(jié)果可靠,可以用于血管性癡呆的研究。(3)經(jīng)立體定向移植和尾靜脈移植后,BMSCs可在腦內(nèi)存活并分化成神經(jīng)元樣及神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞,改善受損的神經(jīng)功能。(4)立體定向移植治療效果較尾靜脈移植治療效果更好。
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果表1模型組大鼠造模前、造模后7天與30天MorriS水迷宮測試結(jié)果(又士、)時間造模前造模7天造模30天逃避潛伏期(S)68.56士10.20*97.23士21.10&114.51士8.20△跨越平臺次數(shù)5.5士1.74☆3.6士0.98.2.4士0.78▲注:&與*比較尸<0.05，△與&比較尸<0.05，☆與，比較尸<0.05，.與▲比較尸<0.05。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果表2移植組大鼠治療前后MorriS水迷宮測試結(jié)果(牙士s)時間逃避潛伏期(s)跨越平臺次數(shù)BMSCs移植前*96.04士24.113.7士0.11BMSCs移植后&58.55士25.844.2士0.23注:&與*比較尸<0.05
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.1

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本文編號：2678573