【摘要】： [目的] 1.繁殖和鑒定阿爾茨海默病APPSWE/PS1DE9轉(zhuǎn)基因模型鼠,為進一步的研究提供理想的動物模型。 2.觀察人羊膜上皮細胞在阿爾茨海默病模型鼠側(cè)腦室移植后的存活、遷移及分化情況。 3.觀察人羊膜上皮細胞對阿爾茨海默病模型鼠的行為學、海馬區(qū)乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)及膽堿能神經(jīng)元和膽堿能纖維的影響。 [方法] 1. 8月齡母代及子代小鼠均用PCR檢測鑒定APPSWE基因。水迷宮和明暗箱觀察行為學,剛果紅及六氨銀染色觀察病理變化。 2.轉(zhuǎn)染EGFP的人羊膜上皮細胞,側(cè)腦室移植,熒光鏡下觀察人羊膜細胞的存活及遷移情況,免疫組化檢測Oct-4 and Nanog在hAECs中的表達。 3.將基因鑒定后的轉(zhuǎn)基因陽性模型和陰性模型隨機分為四組:模型假手術(shù)組,模型治療組,野生型假手術(shù)組,野生型治療組。治療組側(cè)腦室注射人羊膜上皮細胞,假手術(shù)組側(cè)腦室注射等量的PBS。移植后5周,水迷宮和明暗箱觀察行為學變化;高效液相電化學儀觀察海馬區(qū)乙酰膽堿的含量;乙酰膽堿酯酶染色觀察膽堿能神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)纖維的變化。 [結(jié)果] 1.雄性和雌性APPswe/PS1小鼠互交,32d內(nèi)產(chǎn)8窩60只,全部存活。PCR鑒定母代16只小鼠APPswe基因表達全部陽性;子代60只小鼠的43只APPswe基因表達為陽性,17只基因表達為陰性,陽性率為70.2% ,存活率為100%。APP基因片段大小為300bp,轉(zhuǎn)基因鼠與野生型比較行為學有統(tǒng)計學差異(p0.05)。轉(zhuǎn)基因模型鼠8月時在海馬和皮層出現(xiàn)淀粉樣蛋白沉積,被染成橘紅色,野生型小鼠沒有發(fā)現(xiàn)淀粉樣蛋白的沉積。兩組都沒有發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元纖維纏結(jié)。 2.人羊膜上皮細胞在阿爾茨海默病模型鼠側(cè)腦室內(nèi)移植后5周可以存活并遷移至第三腦室,可表達干細胞的特異性標記物Oct-4和Nanog。 3.移植后5周,行為學觀察轉(zhuǎn)基因模型治療組和假手術(shù)組比較有統(tǒng)計學意義(p0.01),正常野生型老年鼠假手術(shù)組和治療組比較無統(tǒng)計學差異(p0.05),轉(zhuǎn)基因模型治療組和正常野生型老年鼠比較無統(tǒng)計學差異(p0.05);轉(zhuǎn)基因模型治療組和假手術(shù)組乙酰膽堿含量相比有統(tǒng)計學差異(p0.05),轉(zhuǎn)基因模型治療組和野生型小鼠乙酰膽堿含量比較無統(tǒng)計學差異(p0.05),野生型小鼠治療組和假手術(shù)組乙酰膽堿含量比較無統(tǒng)計學差異(p0.05)。轉(zhuǎn)基因模型組神經(jīng)元纖維數(shù)量明顯少于野生型鼠,轉(zhuǎn)基因模型組治療組比假手術(shù)組神經(jīng)元纖維數(shù)量增加。 [結(jié)論]1.阿爾茨海默病APPSWE/PS1DE9轉(zhuǎn)基因模型鼠通過雌雄交配能穩(wěn)定遺傳下去,在行為及病理上都與野生型鼠表現(xiàn)出顯著的差異。 2.人羊膜上皮細胞具有干細胞的性質(zhì),移植后5周能在腦室中存活。 3.人羊膜細胞側(cè)腦室移植對阿爾茨海默病APPSWE/PS1DE9轉(zhuǎn)雙基因模型鼠有治療作用。改善AD鼠的癥狀,其機制可能與人羊膜上皮細胞釋放的神經(jīng)營養(yǎng)因子對神經(jīng)元的保護作用,存活了更多的膽堿能神經(jīng)元,增多的膽堿能神經(jīng)元增加了海馬區(qū)乙酰膽堿有關。
【圖文】：

圖 1 APPswe 基因的 PCR 基因鑒定原始圖，圖中 24 號為陰性鼠，，其余為基因表達陽性鼠。學結(jié)果組間比較發(fā)現(xiàn)野生型和模型組都具有明顯的學習、記憶能力。鼠逃避潛伏期與野生型相比有顯著性差異（p<0.05），見表 1小鼠學習能力檢測 水迷宮逃避潛伏期p N test1 test2 test3 test4 15 98.82±15.02 87.43±15.98 60.77±20.09 39.85±9 15 109.7±14.97 89.35±15.28 75.18±16.39 53.9±6較：照組:p1-2=0.027, p2-3=0.0001, p3-4=0.0008模型組:p1-2=0.005, p2-3=0.0118, p3-4=0.0002

小鼠記憶能力檢測撤消平臺后，小鼠在水迷宮連續(xù)游泳 120s，小鼠到達原平臺位小鼠的平均值為 3.333±1.665，轉(zhuǎn)基因模型 15 只小鼠的平1。模型組小鼠平臺次數(shù)與野生型相比有顯著性差異（＊p<0.05）
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R749.16

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本文編號：2629466