發(fā)布時間：2020-01-22 09:23

【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是發(fā)生在老年前期及老年期、以進行性認(rèn)知功能障礙和行為損傷為特征的中樞神經(jīng)退行性疾病,主要表現(xiàn)為進行性認(rèn)知功能障礙和記憶力減退。其病理特征為細胞外出現(xiàn)老年斑(senile plaque,SP)和神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangle,NF),但AD病因尚不清楚且發(fā)病機制復(fù)雜,臨床缺乏能夠減少神經(jīng)元死亡和延緩疾病進程的藥物。大量臨床和流行病學(xué)證據(jù)表明女性與男性相比有較高的發(fā)病率,表明女性更年期雌激素水平下降可能誘發(fā)AD。研究表明雌激素有提高神經(jīng)元活力和減少Aβ聚集的作用,故雌激素可用于AD的預(yù)防或是治療,但絕經(jīng)后婦女的臨床試驗數(shù)據(jù)顯示雌激素療法存在不良反應(yīng),使其在臨床治療中的應(yīng)用具有局限性。研究發(fā)現(xiàn)采用與雌激素化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的植物雌激素用于神經(jīng)退行性相關(guān)疾病的治療時,植物雌激素不僅具有雌激素樣神經(jīng)保護作用同時可以降低不良反應(yīng)的發(fā)生,因此有望成為預(yù)防和治療AD的藥物。槲皮素(Quercetin,Que)作為一種黃酮類天然化合物,是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)和雌激素相似的植物雌激素,可以從多種天然植物或食物中提取,無明顯毒性和不良反應(yīng)。本課題組的前期研究證實槲皮素可以通過結(jié)合雌激素α受體表現(xiàn)出雌激素樣作用,促進人乳腺癌MCF-7細胞系的增殖;對大鼠海馬和皮層的神經(jīng)元具有保護作用,提高了神經(jīng)元突觸的數(shù)目及長度,促進突觸的生長及發(fā)生,從而改善神經(jīng)元細胞的生長率和存活率。本研究采用老化的Aβ_(25-35)處理PC12細胞構(gòu)建AD體外模型,探討槲皮素類雌激素樣神經(jīng)保護作用及相關(guān)機制,為阿爾茨海默病的藥物治療提供思路和策略。實驗中老化的Aβ_(25-35)與PC12細胞共孵育24小時后分別加入陽性對照藥物17β-雌二醇0.1μmol·L-1、金雀異黃素50μmol·L-1和三個不同濃度的槲皮素(200、300、400μmol·L-1)進行藥物干預(yù)24小時。通過MTT實驗檢測槲皮素對大鼠PC12細胞Aβ_(25-35)損傷模型活性的影響,通過細胞免疫熒光染色法和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測細胞模型中雌激素受體α(Estrogen receptorα,ERα)和雌激素受體β(Estrogen receptorβ,ERβ)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated,p-ERK1/2)、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表達量的變化。并使用工具藥雌激素受體拮抗劑ICI182,780和MAPKK抑制劑U0126探索槲皮素在AD細胞損傷模型中發(fā)揮雌激素樣神經(jīng)保護作用的機制。實驗結(jié)果顯示,隨著Aβ_(25-35)作用濃度的增加,細胞活力所受抑制程度逐漸加強,與對照組相比Aβ_(25-35)10μmol·L-1作用細胞24h后能夠顯著降低細胞存活率(P㩳0.01)。MTT法檢測細胞活力結(jié)果表明,與模型組相比,17β-雌二醇、金雀異黃素和三個不同濃度的槲皮素組的細胞存活率均顯著增強(P㩳0.05)。免疫熒光法和蛋白印跡法結(jié)果顯示,與模型組相比,槲皮素提高ERα和p-ERK1/2蛋白表達量(P㩳0.05),對于ERβ蛋白表達量雖有增加但無顯著性差異(P0.05)。并且在Western blot實驗中實驗組凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2/Bax表達比值增加及Caspase-3蛋白表達下降(P㩳0.05)。當(dāng)槲皮素雌激素受體受到ICI182,780抑制后,p-ERK1/2蛋白表達下降(P㩳0.05),Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3蛋白表達增加(P㩳0.05)。當(dāng)U0126作用于槲皮素后,Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3蛋白表達增加(P㩳0.05)。槲皮素對Aβ_(25-35)導(dǎo)致的PC12細胞損傷的AD模型具有保護作用,其雌激素樣神經(jīng)保護作用通過經(jīng)典的雌激素受體通路及MAPK途徑減弱凋亡發(fā)生,并且ERα還可以介導(dǎo)槲皮素激活MAPK信號通路。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Yan Wang;Biao Cai;Jing Shao;Ting-ting Wang;Run-ze Cai;Chang-ju Ma;Tao Han;Jun Du;;Genistein suppresses the mitochondrial apoptotic pathway in hippocampal neurons in rats with Alzheimer's disease[J];Neural Regeneration Research;2016年07期

2 李林;;中國阿爾茨海默病研究進展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2015年05期

3 陳紅;趙鵬;孫亞平;董貴成;;阿爾茨海默病發(fā)病機制研究進展[J];生物技術(shù)世界;2015年10期

4 袁婷婷;張乃丹;何勇靜;李媚;許紅濤;張巧艷;;天然藥物中植物雌激素樣化學(xué)成分的研究進展[J];中國中藥雜志;2014年23期

5 謝貴花;潘小玲;李慧;陳靜華;曹飛;陳寶;黃鵬;;雌激素與老年性癡呆關(guān)系的研究進展[J];南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年10期

6 李興宇;高燦;;突觸上與突觸外的NMDA受體及其與阿爾茨海默病關(guān)系的研究進展[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2014年09期

7 周潔;吳敏;;植物雌激素的研究[J];長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2014年03期

8 陳雪;孫婧霞;蔣常文;;Bcl-2、Caspase-3與阿爾茨海默病關(guān)系的研究進展[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2013年09期

9 黨惠子;李瑞晟;王虹;任映;孫海蕓;楊金鐸;王蓬文;;姜黃素對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬PI3K及p-PI3K表達的影響[J];中國中藥雜志;2013年09期

10 Yun Peng;Bo Jiang;Huiling Wu;Ruchun Dai;Liming Tan;;Effects of genistein on neuronal apoptosis,and expression of Bcl-2 and Bax proteins in the hippocampus of ovariectomized rats[J];Neural Regeneration Research;2012年36期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 王文君;中藥復(fù)方更年春對β-淀粉樣蛋白致PC12細胞損傷的保護作用[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 黃艷紅;植物雌激素對絕經(jīng)后阿爾茨海默病神經(jīng)保護機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

，

本文編號：2571918