【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種最常見的神經(jīng)退行性疾病,約占癡呆原因的60%,典型病理特征包括老年斑的形成,神經(jīng)纖維纏結(jié)以及神經(jīng)元死亡。目前研究認(rèn)為β淀粉樣蛋白(beta amyloid, Aβ)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和線粒體功能障礙在AD發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用。 目的：探討坡壘酚甲(Hopeahainol A, Hop A)和甘草酸二銨(Diammonium glycyrrhizinate,DG)對Ap1-42誘導(dǎo)神經(jīng)毒性的保護(hù)作用。 方法：(1)第一部分研究利用高效液相色譜法,電鏡以及染色法評價(jià)HopA對于Aβ1-42體內(nèi)外聚集能力的影響。ELISA法檢測HopA處理APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織氧化應(yīng)激水平的變化,電生理學(xué)檢測HopA對于APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬長時程電位(long term potential, LTP)的影響,行為學(xué)檢測HopA對于APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知以及記憶功能的影響。(2)第二部分研究利用MTT, LDH以及AnnexinV/PI染色判斷DG對Aβ1-42處理神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響,Real-time PCR和Western blot檢測DG對于過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator la, PGC-la)水平的表達(dá),并通過報(bào)告基因技術(shù)探討DG的可能作用位點(diǎn)。同時行為學(xué)檢測DG對于Aβ1-42誘導(dǎo)AD小鼠的認(rèn)知以及記憶功能的影響。 結(jié)果：(1)野生型B6小鼠經(jīng)尾靜脈注射HopA,可以在血清,腦組織以及腦脊液檢測到HopA的存在。HopA能夠顯著降低APP/PS1小鼠腦皮質(zhì)和海馬區(qū)蛋白,脂質(zhì)以及核酸過氧化產(chǎn)物3-NT,4-HNE以及8-OHGD的水平,電鏡以及剛果紅染色結(jié)果證實(shí)HopA可以抑制Aβ1-42的纖維化和沉積；電生理結(jié)果顯示HopA明顯改善APP/PS1小鼠突觸功能以及海馬CA1區(qū)的LTP誘導(dǎo)功能；行為學(xué)結(jié)果顯示HopA明顯減少APP/PS1小鼠找到平臺的潛伏期以及上臺前路程,同時增加其穿過平臺的次數(shù)。(2)MTT, LDH以及AnnexinV/PI染色證實(shí)DG能夠顯著提高神經(jīng)元細(xì)胞活力并減少其凋亡水平,DG能夠部分代償Aβ1-42所致的神經(jīng)元線粒體膜電位降低,同時明顯降低細(xì)胞色素c的釋放以及下游caspase-9和caspase-3的活性。DG能夠顯著上調(diào)PGC-1α的mRNA和蛋白水平,而特異性抑制PGC-1α則部分抑制了其保護(hù)作用。對PGC-1α的啟動子分析顯示,DG可能通過上調(diào)CREB從而誘導(dǎo)PGC-1α的轉(zhuǎn)錄。行為學(xué)結(jié)果顯示DG明顯減少AD小鼠找到平臺的潛伏期以及上臺前路程,同時增加其穿過平臺的次數(shù)。 結(jié)論：氧化應(yīng)激在AD的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用,而針對氧化應(yīng)激過程中兩種靶分子ABAD和PGC-1α的藥物HopA與DG通過抑制氧化應(yīng)激抑制Aβ-42誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性,提示HopA與DG是兩種潛在治療AD的新型藥物。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2565667