發(fā)布時(shí)間：2019-11-04 12:23

【摘要】：阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease，AD）是以認(rèn)知功能障礙和記憶損害為主要臨床特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病�；颊吣X內(nèi)出現(xiàn)由beta-淀粉樣蛋白（beta-amyloid peptide，Abeta）聚集形成的老年斑（senile plaques，SP）是最主要的病理學(xué)特征。越來越多的研究證據(jù)表明，當(dāng)Abeta42在體內(nèi)達(dá)到一定濃度時(shí)彼此之間會(huì)發(fā)生聚集，形成不同聚集程度的聚集體，而Abeta42的單體和聚集體在AD的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵性的作用。就目前的研究來看，神經(jīng)毒性最強(qiáng)的Abeta42聚集體是Abeta42寡聚體。但Abeta42通過何種方式聚集，以及Abeta42神經(jīng)毒性的機(jī)理一直不為人所知。在體內(nèi)，Abeta42是由淀粉樣前體蛋白（amyloidprecursor protein，APP）經(jīng)beta-分泌酶和gamma-分泌酶的順次切割而產(chǎn)生的，所以APP與AD的發(fā)生、發(fā)展存在著密切的關(guān)系。APP是一類I型跨膜蛋白，研究表明，APP分子間能夠發(fā)生相互作用，形成二聚體，并且Abeta42也能與APP相互作用，并促進(jìn)APP聚集，但是其相互作用的具體位點(diǎn)并未明確。 本文首先制備了Abeta42單體和三種聚集體。通過透射電鏡觀察并確認(rèn)了單體和三種聚集體的形態(tài)，驗(yàn)證其準(zhǔn)確性。為了驗(yàn)證APP與Abeta42單體和三種聚集體是否存在相互作用，本文開展了以下研究：以Abeta42單體和三種聚集體為基質(zhì)，包被于高粘性的96孔板中，以非洲綠猴腎細(xì)胞COS7為模型細(xì)胞，將表達(dá)APP的轉(zhuǎn)染細(xì)胞加入已包被基質(zhì)的96孔板中進(jìn)行粘附實(shí)驗(yàn)，用MTT法檢測粘附細(xì)胞數(shù)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染組的靶細(xì)胞在Abeta42單體和三種聚集體上的粘附數(shù)明顯高于非轉(zhuǎn)染組，即APP與Abeta42單體和三種聚集體均存在相互作用，，并通過這種相互作用介導(dǎo)靶細(xì)胞在Abeta42單體和三種聚集體上的粘附，其強(qiáng)度與Abeta42的濃度成正比。 然后，本文分析了十三種抗Abeta42抗體對粘附的影響。結(jié)果表明，十三種抗Abeta42抗體均能抑制轉(zhuǎn)染了APP的COS7細(xì)胞在Abeta42單體和三種聚集體上的粘附，即這十三種抗體均能不同程度地抑制APP與Abeta42四種存在形式之間的相互作用。根據(jù)抗原的類型不同，針對Abeta42單體和三種聚集體的抑制強(qiáng)度也各有不同。并且實(shí)驗(yàn)表明，抗體對靶細(xì)胞表面的APP與Abeta42四種形式間相互作用的抑制效應(yīng)，除了通過與基質(zhì)Abeta42競爭APP上相互作用區(qū)域之外，還可能通過其他途徑介導(dǎo)了對細(xì)胞粘附的抑制。 最后，我們檢測了兩種天然藥物——母菊黃酮、母菊內(nèi)酯（以下簡稱中藥A中藥B）對Abeta42單體和三種聚集體聚集程度的影響以及對APP與Abeta42四種形式間相互作用的影響。結(jié)果表明：利用透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)中藥A、中藥B均有抑制Abeta42四種不同形式的聚集和使纖維化的Abeta42解聚的作用。并且中藥A、中藥B均可以抑制轉(zhuǎn)染了APP的COS7細(xì)胞在Abeta42四種聚集形式上的粘附，其中中藥A只有在較高濃度時(shí)才能對Abeta42單體產(chǎn)生明顯抑制作用。在同一濃度下，中藥A對靶細(xì)胞上APP與Abeta42寡聚體之間相互作用的抑制效應(yīng)更強(qiáng)，而中藥B對APP與Abeta42四種不同形式之間相互作用的抑制效應(yīng)相似。 本文的研究結(jié)果為APP與Abeta42間相互作用的研究奠定了基礎(chǔ)，并為Abeta42的致病機(jī)理的研究提供了依據(jù)。此外，在AD的免疫治療和天然藥物治療方面，分析靶細(xì)胞在外基質(zhì)上粘附的影響為抗體和藥物的有效性的檢測提供了一種方便、快捷的途徑。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2555625