【摘要】：p-淀粉樣多肽最初是在阿爾茲海默病患者腦部淀粉樣斑塊中發(fā)現(xiàn)的,并被命名為β-淀粉樣多肽(β-amyloid peptide, Aβ)。Aβ由淀粉樣蛋白前體蛋白剪切而成,因?yàn)榈鞍纂逆滈L(zhǎng)度不一,所以是一類(lèi)蛋白。檢測(cè)到這類(lèi)蛋白在腦區(qū)堆積是診斷阿爾茲海默癥最有效的手段。研究這類(lèi)蛋白和阿爾茲海默癥的關(guān)系的文章眾多。研究者發(fā)現(xiàn)淀粉樣能夠使突觸功能紊亂、誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡、促進(jìn)氧化性脂質(zhì)損傷。但同時(shí)研究人員也發(fā)現(xiàn),淀粉樣多肽同時(shí)具有生理功能。據(jù)報(bào)道淀粉樣多肽能夠調(diào)控神經(jīng)突觸傳遞；用阻斷劑阻斷淀粉樣多肽的產(chǎn)生會(huì)使得神經(jīng)元死亡增加,而在培液中添加淀粉樣多肽后能夠減少細(xì)胞的凋亡。但是關(guān)于淀粉樣多肽對(duì)神經(jīng)元發(fā)育成熟的調(diào)控的報(bào)道卻鮮有涉及。在本人的研究中發(fā)現(xiàn)淀粉樣多肽Aβ40能夠增加GABAAa6的表達(dá),并增加其參與介導(dǎo)的GABA配體門(mén)控型C1-離子電流。此外,通過(guò)生物素標(biāo)記膜蛋白的方法檢測(cè)到膜上GABAAa6蛋白的增加。利用western blotting和定量PCR的方法我們檢測(cè)到蛋白的增加,但其mRNA水平?jīng)]有變化,cycloheximide阻斷蛋白翻譯后發(fā)現(xiàn)Aβ40的作用被抑制,所以我們初步確定Aβ40影響了GABAAa6蛋白的翻譯,但不影響轉(zhuǎn)錄。利用U0126阻斷MEK/ERK信號(hào)通路,我們發(fā)現(xiàn)Aβ40的作用被抑制且Aβ40提高ERK1/2磷酸化水平的現(xiàn)象也能被U0126阻斷。利用rapamycin阻斷mTOR信號(hào)途徑,發(fā)現(xiàn)同樣能夠抑制Aβ40的作用,且驗(yàn)證mTOR信號(hào)在ERK信號(hào)下游。Co-IP實(shí)驗(yàn)揭示Aβ40和膜上p75受體能夠相互作用,p75受體阻斷抗體(blocking antibody)能夠阻斷Aβ40的作用,同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)阻斷其他幾個(gè)能夠和Aβ40相互作用的受體并不能阻斷Aβ40的作用。 利用APP基因敲除小鼠,我們檢測(cè)了小腦GABAAa6蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)APP基因敲除后,小腦區(qū)域GABAAa6蛋白水平下降,在APP基因敲除小鼠小腦區(qū)域注射Aβ40能夠?qū)ABAAa6蛋白表達(dá)水平明顯挽回。由于GABAAa6和小腦顆粒神經(jīng)元的成熟密切相關(guān),為了進(jìn)一步研究Aβ40和小腦顆粒發(fā)育成熟的關(guān)系,我們觀察離體培養(yǎng)小腦腦片和APP基因敲除小鼠在Aβ40處理前后小腦形態(tài)學(xué)的變化。我們發(fā)現(xiàn)Aβ40處理的離體培養(yǎng)小腦腦片其外顆粒層比對(duì)照組薄,而內(nèi)顆粒層增厚,這個(gè)趨勢(shì)和小腦發(fā)育成熟過(guò)程一致。在APP敲除小鼠模型上,APP敲除組小鼠小腦內(nèi)顆粒層薄且分層不明顯,Aβ40顯微注射小鼠后小腦發(fā)育情況和對(duì)照組一致。 另外我們還檢測(cè)了Aβ40對(duì)小腦和小腦顆粒細(xì)胞其他發(fā)育情況的影響。利用GFP轉(zhuǎn)染的小腦顆粒細(xì)胞拍攝共聚焦顯微照片并經(jīng)三維重構(gòu)后分析發(fā)現(xiàn),Aβ40處理后小腦顆粒細(xì)胞上樹(shù)突小棘的分布密度明顯增力。NeuroD2是與神經(jīng)元發(fā)育、分化密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,它的表達(dá)水平與神經(jīng)元的發(fā)育程度密切相關(guān)。定量PCR檢測(cè)NeuroD2的mRNA水平發(fā)現(xiàn),Aβ40能夠在發(fā)育早期(5DIC)增加神經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子NeuroD2的轉(zhuǎn)錄。這些線索和GABAAa6的變化一起揭示Ap40和小腦的發(fā)育密切相關(guān),有助于我們更深入地了解淀粉樣肽段的生理作用。
【圖文】：

后者主要是形成離子通道的孔道。（圖1-1) [8]目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)16ABAa受體亞基，根據(jù)序列的相似性，它們被分成不同的亞基家族，不同的有多個(gè)成員：a(l-6)，p(l-3)，Y(l-3)，5，e，e和ii。一般來(lái)說(shuō)最常見(jiàn)的GABA類(lèi)型是由2個(gè)a亞基、2個(gè)P亞基和一個(gè)Y亞基組成。[8]

EGL)逐漸變薄，內(nèi)顆粒層（internal granule layer，IGL)逐漸變厚，構(gòu)上的改變是由CGC的遷移引起的。CGC在遷移的不同時(shí)間和地點(diǎn)表發(fā)育階段和形態(tài)特征。在EGL中分布的主要是顆粒細(xì)胞前體（granulersors),它能夠每18-20小時(shí)分裂一次[35]，，分裂后的顆粒細(xì)胞開(kāi)始往方向遷移。在EGL中間層的顆粒細(xì)胞長(zhǎng)出水平突起，EGL底部的顆粒^u始伸長(zhǎng)，水平突起變長(zhǎng)[20]。隨著顆粒細(xì)胞遷移到分子層（molecular lay,細(xì)胞長(zhǎng)出瘦長(zhǎng)的尾突和大體積的前突（leading process)。遷移到丨GL細(xì)胞長(zhǎng)出眾多的樹(shù)突和長(zhǎng)長(zhǎng)的軸突，隨著顆粒細(xì)胞的成熟，樹(shù)突數(shù)量減突的前端呈現(xiàn)爪狀。（圖1-2)
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2554659