【摘要】：精神分裂癥是一種反復(fù)發(fā)作的慢性遷延性疾病,患病率約占世界總?cè)丝诘?%�；颊咄憩F(xiàn)為三種不同類型的癥狀：陽性癥狀(如妄想、幻覺),陰性癥狀和認知功能障礙(包括情感冷漠、社會退卻、注意力減退、空間記憶減退)等。精神分裂癥病因不明,發(fā)病機理復(fù)雜,其發(fā)病涉及多種學(xué)說、多條基因通路,但均不能完全解釋精神分裂癥的臨床表現(xiàn),治療轉(zhuǎn)歸,該病的發(fā)病機理仍需要進一步的探索研究。 MK-801,又名地佐環(huán)平,為非競爭性NMDA受體拮抗劑。NMDA受體是谷氨酸受體的一個亞型,廣泛分布于大腦皮質(zhì)、丘腦、海馬、紋狀體和脊髓,參與中樞興奮性神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)。MK-801通過阻斷非競爭性NMDA受體模擬精神分裂癥的陽性與陰性癥狀,而廣泛應(yīng)用于精神分裂癥動物模型的建立。行為學(xué)研究應(yīng)用MK-801制備的模型鼠感覺運動功能障礙,其學(xué)習和工作記憶、空間定位記憶能力均受到不同程度的損害,形態(tài)學(xué)檢測顯示腦皮層神經(jīng)元空泡化,神經(jīng)元胞體萎縮及樹突斷裂。體外研究表明,MK-801可降低小腦顆粒細胞的活性,促進凋亡蛋白的表達進而誘導(dǎo)細胞凋亡,并能抑制神經(jīng)細胞突起的生長。國外學(xué)者曾應(yīng)用MK-801損傷神經(jīng)元,并作為精神分裂癥的體外模型,分析相關(guān)的病理機制。 非經(jīng)典抗精神病藥物又稱為第二代抗精神病藥物,與經(jīng)典抗精神分裂癥藥物相比,非經(jīng)典抗精神病藥物在臨床上得到廣泛應(yīng)用得益于其在發(fā)揮治療精神分裂癥作用時較少引起錐體外系反應(yīng)等副作用,同時非經(jīng)典抗精神病藥物能降低患者腦體積減少的程度,有效發(fā)揮神經(jīng)保護作用。帕潘立酮(paliperidone)是一種新型的非經(jīng)典抗精神病藥物,其臨床治療效果明顯優(yōu)于經(jīng)典抗精神病藥物。研究發(fā)現(xiàn)帕潘立酮通過提高細胞存活率、降低凋亡蛋白而發(fā)揮神經(jīng)元保護作用。然而,帕潘立酮發(fā)揮神經(jīng)元保護作用及其抗精神分裂癥機制還清楚,需要進一步的研究。 鑒于此,我們設(shè)計以下實驗檢測帕潘立酮的神經(jīng)保護作用及其相關(guān)的分子學(xué)機制以及帕潘立酮抗精神分裂癥的相關(guān)機制。在體外實驗中,我們?nèi)〔腅15天胎鼠腦皮層神經(jīng)元,行微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)免疫細胞化學(xué)染色鑒定提取神經(jīng)元的純度,用不同濃度的MK-801毀損腦皮層神經(jīng)元,同時加入帕潘立酮進行處理,通過檢測神經(jīng)元活性、乳酸脫氫酶(LDH)的釋放、鈣離子濃度及time course來觀察其對神經(jīng)元的保護作用,通過神經(jīng)突起總長度及神經(jīng)突起密度計數(shù)檢測帕潘立酮對神經(jīng)突起生長的影響,在進一步的分子機制研究中檢測了與精神分裂癥密切相關(guān)的信號通路Akt1/GSK3β的表達變化,并應(yīng)用該通路的抑制劑LY294002處理培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元,通過Hoechst33342/PI染色及神經(jīng)元活性分析驗證帕潘立酮是否是通過Akt1/GSK3β信號通路發(fā)揮神經(jīng)保護及抗精神分裂癥作用。體內(nèi)實驗中,我們運用MK-801建立精神分裂癥小鼠動物模型,并同時給予帕潘立酮藥物處理,通過動物行為學(xué)檢測、皮層組織Akt1/GSK3β蛋白表達的變化來分析帕潘立酮抗精神分裂癥作用及可能的分子機制。 結(jié)果顯示,提取的胎鼠皮層神經(jīng)元純度高,絕大多數(shù)表達MAP-2。應(yīng)用不同濃度的MK-801處理后,與正常對照組相比,神經(jīng)元活性明顯下降,LDH釋放增多,神經(jīng)突起總數(shù)目及神經(jīng)突起密度均有不同程度的下降,細胞內(nèi)鈣離子濃度顯著升高(P均0.01),鈣離子time course檢測顯示在360-720s時間范圍內(nèi),細胞內(nèi)鈣離子熒光強度急劇升高(P0.01), real-time PCR及western-blot檢測結(jié)果顯示Akt1/GSK3β信號通路表達下調(diào)(P0.01)。加入帕潘立酮共處理后,與MK-801組相比,帕潘立酮能明顯提高神經(jīng)元活性,促進神經(jīng)突起的生長,降低LDH釋放及細胞內(nèi)鈣離子濃度的升高(P均0.01),鈣離子time course檢測顯示在360-720s時間范圍內(nèi),細胞內(nèi)鈣離子熒光強度的升高被明顯抑制(P0.01),并能夠上調(diào)Aktl/GSK3β信號通路的表達。帕潘立酮與MK-801共培養(yǎng)加入LY294002后,可明顯抑制帕潘立酮的神經(jīng)保護作用。體內(nèi)結(jié)果顯示,應(yīng)用MK-801可成功建立精神分裂癥小鼠動物模型,小鼠刻板性旋轉(zhuǎn)次數(shù)及平衡木穿梭次數(shù)顯著增加,額葉皮層腦組織p-Akt1及p-GSK3p表達明顯下降。應(yīng)用帕潘立酮治療后,小鼠刻板性旋轉(zhuǎn)及平衡木穿梭次數(shù)明顯減少,額葉皮層p-Aktl及p-GSK3p表達上升。 綜上所述,本研究結(jié)果表明,帕潘立酮能明顯保護MK-801造成的皮層神經(jīng)元的損傷,改善模型鼠的癥狀,其可能的分子機制是通過上調(diào)Aktl/GSK3β信號通路發(fā)揮神經(jīng)元保護及抗精神分裂癥作用。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.3

【參考文獻】

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1 王金寧;董燕;隋海娟;張永興;;知母皂苷元對體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元樹突發(fā)育的影響及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制[J];中國藥理學(xué)通報;2011年11期

2 蘇允愛;司天梅;周東豐;郭春梅;舒良;;MK-801建立谷氨酸功能低下精神分裂癥小鼠模型的研究[J];中國神經(jīng)精神疾病雜志;2006年06期

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本文編號：2550356