【摘要】：目的：本研究通過建立條件性敲除大腦皮層興奮性神經(jīng)元中Notch1、Notch2及Notch1/2基因小鼠[Notch1, Notch2, and Notch1/2 conditional knockout (cKO) mice],旨在探討Notch1和/或Notch2是否為早老素/γ分泌酶介導(dǎo)成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元存活的功能靶底物,及Notch1、Notch2基因與阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)相關(guān)性的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：我們使用了與條件性敲除早老素或Nicastrin基因小鼠模型相同的技術(shù),如基因載體的構(gòu)建,胚胎干細(xì)胞的獲得,同源重組,選擇篩選已擊中的細(xì)胞,與aCaMKⅡ-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交等方法,獲得條件性敲除大腦皮層興奮性神經(jīng)元中Notch1、Notch2及Notch1/2基因小鼠[Notch1, Notch2, and Notch1/2 conditional knockout (cKO) mice],并使用PCR及Western blot方法檢測Notch1/Notch2等位基因及其蛋白表達(dá)評價此三種基因敲除小鼠是否成功；運用尼氏染色、免疫組織化學(xué)及Western blot技術(shù)分析該模型小鼠大腦皮層形態(tài)、體積、神經(jīng)元數(shù)量、膠質(zhì)細(xì)胞增生等變化；運用Northern blot和Western blot技術(shù)分析Notchl及Notch2的mRNAs及蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：本研究建立的小鼠模型中,成功的在大腦皮層興奮性神經(jīng)元中發(fā)生了條件性敲除,且當(dāng)原代培養(yǎng)的floxed Notchl/Notch2新生小鼠大腦皮層神經(jīng)元中引入Cre重組酶后,Notchl及Notch2本來的高表達(dá)在3-4天后也完全消失,證明了Cre重組酶系統(tǒng)的有效性。我們并未在成年Notch cKO小鼠模型(年齡約2歲)的大腦皮層中檢測到任何神經(jīng)退行性變化。在成年Notch1, Notch2 cKO小鼠模型(年齡約2-3月)的大腦皮層中也未檢測到Notch1及Notch2的mRNAs及蛋白質(zhì)水平的減退。 結(jié)論：以上實驗結(jié)果說明Notch1及Notch2并不是早老素或Y分泌酶介導(dǎo)的神經(jīng)元存活的直接底物,并且Notch1及Notch2受體蛋白并不或很少在成年小鼠大腦皮層興奮性神經(jīng)元中表達(dá),未來的研究將集中在Notch受體蛋白在除外興奮性神經(jīng)元的大腦其它細(xì)胞中的功能與AD發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,及其它可能參與調(diào)節(jié)早老素/γ分泌酶影響神經(jīng)元存活的重要底物。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

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本文編號：2537040