【摘要】：阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease，AD）是一種神經(jīng)退行性疾病，其病理特征為腦內(nèi)可溶性β-淀粉樣蛋白（β-amyloid，Aβ）的過(guò)度沉積形成的老年斑與神經(jīng)元纖維纏結(jié)。AD發(fā)病機(jī)制學(xué)說(shuō)包括：氧化應(yīng)激炎癥膽堿能鈣穩(wěn)態(tài)失衡Tau蛋白異常修飾早老素基因突變載脂蛋白E基因突變以及Aβ?lián)p傷等學(xué)說(shuō)。眾多發(fā)病機(jī)制中，Aβ作為AD發(fā)病始動(dòng)因子的觀點(diǎn)己被廣泛認(rèn)可。 Aβ是I型跨膜蛋白淀粉樣蛋白前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）經(jīng)過(guò)β-分泌酶（BACE-1）和γ-分泌酶（γ-secretase）順序剪切的產(chǎn)物，根據(jù)其氨基酸片段的長(zhǎng)度大致可分為Aβ25-35Aβ1-40及Aβ1-42等。Aβ1-42片段最長(zhǎng)，毒性最大，在神經(jīng)變性過(guò)程中作用最強(qiáng)。 現(xiàn)階段用于AD研究的動(dòng)物模型主要有各型轉(zhuǎn)基因小鼠，快速老化小鼠（SAM）以及通過(guò)海馬CA1區(qū)或者側(cè)腦室注射Aβ誘導(dǎo)的動(dòng)物模型。轉(zhuǎn)基因鼠雖可模擬人類(lèi)老年癡呆的神經(jīng)病理特征，但經(jīng)常表現(xiàn)為無(wú)或極少的老年斑沉積，細(xì)胞死亡有限及學(xué)習(xí)認(rèn)知功能損害多變。既往大量研究利用可溶性Aβ寡聚體對(duì)動(dòng)物進(jìn)行干預(yù)進(jìn)而誘導(dǎo)制備AD模型，但能否誘導(dǎo)出可靠的AD相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶損害仍存在較大爭(zhēng)議，部分學(xué)者認(rèn)為AD相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶損害是Aβ與其他因素相互作用的結(jié)果。 AD患者不但腦內(nèi)有Aβ的沉積，而且同時(shí)伴有相關(guān)血清性激素水平的降低，血清睪酮水平降低是年齡相關(guān)性男性AD患者的危險(xiǎn)因素。生理水平的雄激素對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶具有改善作用，然而也有研究顯示睪酮與空間學(xué)習(xí)記憶無(wú)關(guān)或呈負(fù)相關(guān)。 雄激素對(duì)內(nèi)源性Aβ發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，年齡相關(guān)性的雄激素丟失將增加腦內(nèi)Aβ的水平并相應(yīng)增加AD患病的風(fēng)險(xiǎn)。雄激素調(diào)節(jié)Aβ的機(jī)制還不清楚，但可能涉及三個(gè)常規(guī)途徑中的一個(gè)或多個(gè)，即通過(guò)雄激素受體（androgen receptor，AR）依賴(lài)的途徑直接發(fā)揮作用；通過(guò)睪酮芳香化為雌二醇，間接通過(guò)雌激素發(fā)揮作用；通過(guò)對(duì)下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)節(jié)間接發(fā)揮作用。 AR在腦內(nèi)主要負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)記憶的功能區(qū)高表達(dá)，海馬對(duì)空間記憶的獲得發(fā)揮至關(guān)重要的作用。睪酮對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶的作用可能是通過(guò)局部芳香化為雌二醇或者通過(guò)與海馬局部AR直接作用實(shí)現(xiàn)的。體內(nèi)雄激素水平與認(rèn)知功能密切相關(guān)，但雄激素究竟通過(guò)何種機(jī)制影響認(rèn)知功能目前還無(wú)定論。近年，突觸的形態(tài)異常在AD發(fā)病中的作用逐漸受到重視，突觸的異常改變可能是AD發(fā)病機(jī)制中的核心環(huán)節(jié)。 性激素與突觸可塑性（synaptic plasticity）的調(diào)節(jié)具有相關(guān)性。雌激素水平的升高可誘導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶相關(guān)腦區(qū)產(chǎn)生新的突觸和樹(shù)突。雄激素對(duì)突觸可塑性調(diào)節(jié)的作用和機(jī)制近些年也開(kāi)始得到重視。 海馬參與近期空間學(xué)習(xí)記憶的獲取、再現(xiàn)及鞏固，是AD最早受累的病變部位。因此，本研究欲采取雙側(cè)海馬CA1區(qū)可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢(shì)模型（復(fù)合模型）大鼠，通過(guò)Morris水迷宮檢測(cè)能否誘導(dǎo)出可靠的空間學(xué)習(xí)記憶的損害；探討睪酮能否改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的損害；同時(shí)對(duì)動(dòng)物血清睪酮濃度進(jìn)行檢測(cè)，探討血清睪酮濃度與空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)之間的關(guān)系；通過(guò)給予AR拮抗劑氟他胺驗(yàn)證睪酮是否通過(guò)依賴(lài)特異性的AR來(lái)發(fā)揮作用。此外，通過(guò)檢測(cè)突觸相關(guān)蛋白SYN與PSD-95表達(dá)量有無(wú)變化，并且通過(guò)對(duì)CaMK II（p-CaMK II）CREB（p-CREB）及BDNF的檢測(cè)探討可能的信號(hào)傳導(dǎo)通路。 第一部分Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢(shì)誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害大鼠模型的建立 目的：觀察雙側(cè)海馬CA1區(qū)可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢(shì)能否誘導(dǎo)出可靠的AD相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶功能的損害，并探討Aβ1-42與去勢(shì)對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶是否具有協(xié)同作用。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組（每組10只），分別為正常對(duì)照組（gonadally-intact group，GI group）假手術(shù)組（shamgonadally-intact group，SGI group）溶劑對(duì)照組（Vehicle group）以及Aβ組（Aβ group）。 實(shí)驗(yàn)二：雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組（每組10只），分別為正常對(duì)照組（Intact group）去勢(shì)假手術(shù)組（Sham group）以及去勢(shì)組（GDXgroup）。 實(shí)驗(yàn)三：雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組（每組10只），分別為對(duì)照組（Control group）Aβ組（Aβ group）復(fù)合模型假手術(shù)組（S-Aβ+GDX group）復(fù)合模型組（Aβ+GDX group）去勢(shì)組（GDXgroup）。 雙側(cè)海馬CA1區(qū)埋管：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)2%戊巴比妥鈉（40-60mg/kg）腹腔注射麻醉，固定于腦立體定位儀。暴露前囟（bregma），參照大鼠腦圖譜，以前囟為始點(diǎn)，向后3.8mm，中線(xiàn)左右2.5mm處垂直顱骨表面進(jìn)行打孔，垂直顱骨表面進(jìn)針2.9mm（以顱骨外表面為基點(diǎn)），用牙科水泥固定。 可溶性Aβ1-42寡聚體雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射：動(dòng)物于海馬CA1區(qū)埋管1周后進(jìn)行可溶性Aβ1-42寡聚體雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射。每側(cè)5min內(nèi)緩慢注入5μLAβ1-42（2μg/μL）。 行為學(xué)測(cè)試：術(shù)后第15天至第20天進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試。定位航行實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5天，每天訓(xùn)練4次。記錄大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期上臺(tái)前路程及平均游泳速度。第6天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，記錄動(dòng)物120s內(nèi)穿越平臺(tái)的次數(shù)及在平臺(tái)所在象限停留的時(shí)間百分比等指標(biāo)。 標(biāo)本制備與處理：空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)束后24小時(shí)，所有動(dòng)物深度麻醉，心臟穿刺采血0.5mL，置于抗凝管內(nèi)。靜置30min后進(jìn)行低溫超速離心，4℃，5000rpm，離心20min，取上清分裝于無(wú)菌EP管內(nèi)，-80℃存放以備放射免疫法檢測(cè)血清睪酮濃度所用。5只大鼠斷頭取腦，冰浴剝離雙側(cè)海馬，-80℃存放以備后用。5只動(dòng)物取腦組織，常規(guī)組織固定，脫水，透明，石蠟包埋。制備5μM病理切片，進(jìn)行尼氏染色。 結(jié)果： 1可溶性Aβ1-42寡聚體對(duì)SD成年雄性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逃避潛伏期與上臺(tái)前路程組間均存在顯著性差異（P 0.01）。而正常對(duì)照組假手術(shù)組與溶劑對(duì)照組三組之間無(wú)顯著性差異。Aβ組逃避潛伏期在第4天（P 0.05）與第5天（P 0.001）與其他各組存在顯著性差異，較正常對(duì)照組明顯增加。Aβ組上臺(tái)前路程在第5天（P 0.05）與其他各組存在顯著性差異，較正常對(duì)照組明顯增加。平均游泳速度組間及組內(nèi)均無(wú)差異。 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異（P 0.05），Aβ組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比較正常對(duì)照組明顯減�。≒ 0.05），而正常對(duì)照組假手術(shù)組與溶劑對(duì)照之間無(wú)差異。穿越平臺(tái)次數(shù)各組間也存在顯著性差異（P 0.05），Aβ組較正常對(duì)照組穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減�。≒ 0.05），而正常對(duì)照組假手術(shù)組與溶劑對(duì)照之間無(wú)差異。血清睪酮放射免疫結(jié)果顯示，各組之間無(wú)差異。 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組假手術(shù)組及溶劑對(duì)照組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量無(wú)差異。與正常對(duì)照組相比，Aβ組海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量（55.6%）顯著減少（P 0.001）。 2去勢(shì)對(duì)SD成年雄性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組間逃避潛伏期（P 0.01）與上臺(tái)前路程（P 0.05）組間存在顯著性差異。去勢(shì)組在第4天（P 0.05）與第5天（P 0.001）逃避潛伏期較正常對(duì)照組明顯增加，其他三天組間無(wú)差異。去勢(shì)組在第4天（P 0.05）與第5天（P 0.001）上臺(tái)前路程較正常對(duì)照組明顯增加，其他三天組間無(wú)差異。而平均游泳速度組間及組內(nèi)均無(wú)差異。 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異（P 0.05）。去勢(shì)組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比較正常對(duì)照組明顯減小（P 0.05），而正常對(duì)照組與假手術(shù)組之間無(wú)差異。各組穿越平臺(tái)次數(shù)存在顯著性差異（P 0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)去勢(shì)組較正常對(duì)照組明顯減�。≒ 0.05），而正常對(duì)照組與假手術(shù)組之間無(wú)差異。血清睪酮放射免疫結(jié)果顯示，血清睪酮濃度各組之間存在顯著性差異（P 0.001），去勢(shì)組動(dòng)物血清睪酮濃度顯著降低，與正常對(duì)照組相比存在顯著性差異（P 0.001）。 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，對(duì)照組與假手術(shù)組CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量無(wú)差異；與對(duì)照組相比，去勢(shì)組海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量（47.0%）顯著減少（P 0.001）。 3雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢(shì)對(duì)SD成年雄性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逃避潛伏期與上臺(tái)前路程各組間均存在顯著性差異（P 0.001）。Aβ+GDX組逃避潛伏期在第3-5天（第3天（P 0.05），第4天（P 0.001），第5天（P 0.001））與其他各組相比存在顯著性差異。Aβ+GDX組上臺(tái)前路程在第4天（P 0.05）與第5天（P 0.001）與其他各組相比存在顯著性差異。與同一天Control組相比，逃避潛伏期與上臺(tái)前路程明顯增加。動(dòng)物平均游泳速度組間及組內(nèi)均無(wú)差異。 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異（P 0.05）。與Control組相比，Aβ+GDX組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比明顯減小（P 0.05），而Control組與S-Aβ+GDX組之間無(wú)差異。穿越平臺(tái)次數(shù)各組存在顯著性差異（P 0.001），Aβ+GDX組穿越平臺(tái)次數(shù)較Control組明顯減�。≒ 0.001），Control組與S-Aβ+GDX組之間無(wú)差異。血清睪酮放射免疫結(jié)果顯示，血清睪酮濃度各組之間存在顯著性差異（P0.001）。 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，Control組與S-Aβ+GDX組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量無(wú)差異。Aβ+GDX組與其他各組相比均存在顯著性差異（P 0.001），海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量最少，神經(jīng)元數(shù)量與Control組相比下降82.8%。 結(jié)論：1雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力具有損害作用。2去勢(shì)對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力具有損害作用。3雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢(shì)對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的損害作用較單純Aβ1-42寡聚體注射或去勢(shì)更嚴(yán)重，二者具有協(xié)同作用，復(fù)合模型動(dòng)物更適合用于對(duì)老年期AD發(fā)病機(jī)制的研究。 第二部分睪酮對(duì)Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢(shì)誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害的保護(hù)作用 目的：探討睪酮能否改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的損害；探討血清睪酮濃度與空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)之間的關(guān)系；通過(guò)給予AR拮抗劑氟他胺（flutamide）驗(yàn)證睪酮是否通過(guò)依賴(lài)特異性AR來(lái)發(fā)揮作用。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：56只復(fù)合模型大鼠隨機(jī)分為7組，每組8只。7組動(dòng)物給予皮下注射0.75mg睪酮，分別在給藥后0，6，12，24，48，72與96h進(jìn)行心臟穿刺采血測(cè)量血清睪酮濃度。 實(shí)驗(yàn)二：56只復(fù)合模型大鼠造模12天后，隨機(jī)分為7組，每組8只。于行為學(xué)測(cè)試的前兩天開(kāi)始給藥，一直到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束，連續(xù)給藥共8天。各組分別皮下注射給予不同劑量的睪酮，即0.25，0.50，0.75，1.00，1.50與2.00mg，0mg組單純給予等劑量的芝麻油。 實(shí)驗(yàn)三：32只復(fù)合模型大鼠造模12天后，隨機(jī)分為4組（每組8只），即復(fù)合模型對(duì)照組（C-Aβ+GDX group），睪酮組（T-Aβ+GDX group），氟他胺組（F-Aβ+GDX group），氟他胺+睪酮組（F+T-Aβ+GDX group）。睪酮于實(shí)驗(yàn)前2天以及行為學(xué)測(cè)試的6天內(nèi)皮下注射。氟他胺于每天行為學(xué)測(cè)試前1h通過(guò)微量注射器給藥，每側(cè)海馬5μg。 行為學(xué)測(cè)試：同第一部分。 標(biāo)本制備與處理：實(shí)驗(yàn)一在各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行血標(biāo)本收集，實(shí)驗(yàn)二三血液處理同第一部分。實(shí)驗(yàn)二三每組各4只大鼠斷頭取腦，冰浴剝離雙側(cè)海馬，-80℃存放以備后用。各組剩余動(dòng)物留取組織標(biāo)本用于組織切片的制備，具體方法同第一部分。 尼氏染色（Nissl staining）及細(xì)胞計(jì)數(shù)：同第一部分。 結(jié)果： 1復(fù)合模型大鼠睪酮注射后不同時(shí)間點(diǎn)血清濃度 各時(shí)間點(diǎn)血清睪酮濃度存在顯著性差異（P 0.001）。其他各給藥組血清睪酮濃度均高于0h組，給藥48小時(shí)后血清睪酮濃度達(dá)到高峰。 2不同劑量睪酮對(duì)復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)的影響 各劑量組動(dòng)物逃避潛伏期（P 0.001）與上臺(tái)前路程（P 0.01）均存在顯著性差異。各劑量組逃避潛伏期在第4天（P 0.01）與第5天（P 0.001）存在顯著性差異。0.75mg組在第4天（P 0.01）與第5天（P 0.001）較0mg組逃避潛伏期明顯縮短。各劑量組上臺(tái)前路程在第4天（P 0.05）和第5天（P 0.001）存在顯著性差異。0.75mg組較0mg組上臺(tái)前路程明顯的減小。平均游泳速度組間及組內(nèi)均無(wú)顯著性差異。 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各劑量組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異（P 0.05）。0.75mg組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比在各劑量組中最大，較0mg組明顯增加（P 0.05）。穿越平臺(tái)次數(shù)各劑量組存在顯著性差異（P 0.001），0.75mg組穿越平臺(tái)次數(shù)在各劑量組中最大，較0mg組明顯增加（P 0.001）。血清睪酮濃度各劑量組之間存在顯著性差異（P 0.001），與給藥劑量呈劑量依賴(lài)性關(guān)系。 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，從0.25mg到1.00mg組完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量隨睪酮給藥劑量的增加而逐漸增多，與0mg組相比均存在顯著性差異（P 0.001）；其中，0.75mg組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量最多，較0mg組升高了162.6%。 3AR拮抗劑氟他胺對(duì)復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)的影響 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逃避潛伏期（P 0.001）與上臺(tái)前路程（P 0.05）各組間存在顯著性差異，而C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組間無(wú)顯著性差異。T-Aβ+GDX組較C-Aβ+GDX組逃避潛伏期明顯縮短（P 0.01）。上臺(tái)前路程各組間存在顯著性差異（P 0.05），T-Aβ+GDX組較C-Aβ+GDX組上臺(tái)前路程明顯減�。≒ 0.01）。平均游泳速度組間及組內(nèi)比較均無(wú)顯著性差異。 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異（P 0.05）。T-Aβ+GDX組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比在所有各組中最大，較C-Aβ+GDX組明顯增加（P 0.05）。而C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組之間無(wú)顯著性差異。穿越平臺(tái)次數(shù)各組間存在顯著性差異（P 0.001），T-Aβ+GDX組穿越平臺(tái)次數(shù)在所有各組中最大，較C-Aβ+GDX組明顯增加（P 0.001）。C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組之間無(wú)顯著性差異。血清睪酮濃度各組之間存在顯著性差異（P 0.001），而氟他胺對(duì)血清睪酮濃度無(wú)影響。 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，T-Aβ+GDX組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量最多，與其他各組相比差異顯著（P 0.001）。F-Aβ+GDX組F+T-Aβ+GDX組與C-Aβ+GDX組海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量無(wú)顯著性差異。 結(jié)論：1適量體外補(bǔ)充睪酮可以改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的損害。2復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶與血清睪酮濃度具有相關(guān)性。3氟他胺可以阻斷睪酮對(duì)復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的改善作用。4睪酮對(duì)復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的改善作用部分是通過(guò)AR途徑完成的。 第三部分睪酮對(duì)Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢(shì)誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害的保護(hù)作用的機(jī)制研究 目的：通過(guò)對(duì)突觸相關(guān)蛋白SYN與PSD-95，以及信號(hào)通路中BDNFCaMK II（p-CaMK II）及CREB（p-CREB）的檢測(cè)探討睪酮影響空間學(xué)習(xí)記憶的可能信號(hào)機(jī)制，為雄激素改善空間學(xué)習(xí)記憶提供理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：應(yīng)用Western blot與RT-PCR對(duì)SYNPSD-95BDNFCaMK II（p-CaMK II）及CREB（p-CREB）進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果： 1雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢(shì)對(duì)SYN及PSD-95的影響 Western blot結(jié)果顯示，Control組與S-Aβ+GDX組內(nèi)SYN與PSD-95表達(dá)量相對(duì)較高，兩組間上述指標(biāo)無(wú)顯著性差異；與Control組相比，Aβ組GDX組及Aβ+GDX組SYN與PSD-95表達(dá)量明顯減少，而Aβ+GDX組下降最顯著，組間比較存在顯著性差異（P 0.001）。 RT-PCR結(jié)果與Western blot結(jié)果基本一致，β-actin mRNA擴(kuò)增條帶密度各組間無(wú)明顯差異，提示各實(shí)驗(yàn)組上樣量相等。Control組與S-Aβ+GDX組內(nèi)SYN mRNA與PSD-95mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物相對(duì)較高，條帶密度兩組間無(wú)顯著性差異；Aβ組GDX組及Aβ+GDX組與Control組相比SYN mRNA與PSD-95mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物明顯減少，而Aβ+GDX組下降最顯著，條帶密度組間比較存在顯著性差異（P 0.001）。 2睪酮對(duì)SYN及PSD-95表達(dá)量的影響 Western blot結(jié)果顯示，SYN與PSD-95在C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組大鼠海馬組織內(nèi)表達(dá)量較低，組間比較均無(wú)顯著性差異；T-Aβ+GDX組與C-Aβ+GDX組比較SYN（P 0.001）與PSD-95（P 0.01）表達(dá)量明顯增加。RT-PCR結(jié)果顯示，內(nèi)參β-actin mRNA擴(kuò)增條帶密度各組間無(wú)明顯差異，提示各組上樣量相等。SYN mRNA與PSD-95mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物在C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組間無(wú)明顯差異，而T-Aβ+GDX組與C-Aβ+GDX組相比SYN mRNA（P 0.01）與PSD-95mRNA（P 0.001）的擴(kuò)增產(chǎn)物顯著增加。 3睪酮對(duì)p-CaMK II/CaMK II表達(dá)量的影響 Western blot結(jié)果顯示， C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組p-CaMK II表達(dá)量較低，組間比較無(wú)顯著性差異，T-Aβ+GDX組p-CaMK II表達(dá)量明顯增加，與C-Aβ+GDX組比較有顯著性差異（P 0.05），CaMK II表達(dá)量各組間無(wú)顯著性差異。 4睪酮對(duì)p-CREB/CREB表達(dá)量的影響 Western blot結(jié)果顯示，CREB表達(dá)量各組間無(wú)差異；C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組大鼠海馬組織內(nèi)p-CREB表達(dá)量較低，組間比較無(wú)顯著性差異，T-Aβ+GDX組p-CREB表達(dá)量明顯增加，與其他組比較有顯著性差異（P 0.05）。 5睪酮對(duì)BDNF表達(dá)量的影響 Western blot結(jié)果顯示， C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組BDNF表達(dá)量較低，組間比較無(wú)顯著性差異，T-Aβ+GDX組BDNF表達(dá)量明顯增加，與C-Aβ+GDX組比較有顯著性差異（P 0.001）。RT-PCR結(jié)果顯示，β-actin mRNA擴(kuò)增條帶密度各組間無(wú)明顯差異，提示各實(shí)驗(yàn)組上樣量一致。BDNF mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物各組間無(wú)顯著性差異，C-Aβ+GDX組F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組內(nèi)BDNFmRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物較少，條帶密度組間比較無(wú)明顯差別，而T-Aβ+GDX組BDNF mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物明顯增加，條帶密度與C-Aβ+GDX組相比存在顯著性差異（P 0.01）。 結(jié)論：1雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢(shì)對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的損害可能與突觸可塑性的改變有關(guān)。2睪酮改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶可能是通過(guò)Ca2+-CaM/CaMKII-p-CREB通路，，進(jìn)而提高BDNF以及突觸相關(guān)蛋白SYN及PSD-95的表達(dá)，增強(qiáng)對(duì)突觸可塑性的調(diào)節(jié)作用。
【圖文】：

圖S部+GDX口A/f+

圖0.25m9國(guó)0.50mg口
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R965;R749.16

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本文編號(hào)：2530090