本文關(guān)鍵詞：PTSD狀態(tài)下HCN2在脊髓和大腦調(diào)控內(nèi)臟高敏感-中樞敏化的作用及機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Posttraumatic stress disorder,PTSD)是指人們遭受嚴(yán)重的打擊后長期和延遲出現(xiàn)的精神心理障礙,可以引起機(jī)體發(fā)生病理生理改變,誘導(dǎo)內(nèi)臟敏感性的形成,但其機(jī)制尚不清楚。近年來,PTSD關(guān)聯(lián)疾病的發(fā)生率呈上升趨勢,患病率及自殺率均較高,且尚無有效的防治措施,嚴(yán)重影響病人的正常生活。目前,國內(nèi)外有關(guān)PTSD的研究才剛剛起步,尚不明確其作用的具體機(jī)制及有效的干預(yù)措施。如果能發(fā)現(xiàn)PTSD相關(guān)聯(lián)疾病作用的具體機(jī)制、防止內(nèi)臟敏感性的形成及發(fā)展,則可望為臨床上防治PTSD相關(guān)聯(lián)疾病提供新的治療方法。超極化激活環(huán)核苷酸門控通道2(hyperpolarizaion-activated cyclic nucleotide-gated channels,HCN2),廣泛分布于大腦和脊髓與內(nèi)臟痛覺調(diào)制相關(guān)區(qū)域。有研究表明,在一些疼痛大鼠模型中,HCN2在脊髓和大腦中均大量表達(dá),而應(yīng)用HCN2的阻斷劑ZD7288阻斷Ih電流可明顯減輕大鼠的疼痛癥狀。因此我們猜測HCN2通道在PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟高敏感-中樞敏化的形成中亦發(fā)揮了重要作用,可能成為防止或抑制PTSD的新的靶點(diǎn)之一。NR2B亦在脊髓和海馬中廣泛表達(dá)。在脊髓背角神經(jīng)元共培養(yǎng)模型中發(fā)現(xiàn),突觸前神經(jīng)元的HCN2通道激活后可引起谷氨酸的釋放,誘發(fā)脊髓背角NR2B介導(dǎo)的突觸可塑性變化,導(dǎo)致NR2B發(fā)生酪氨酸磷酸化,參與痛覺及其中樞敏化形成。在疼痛模型研究中亦已證實(shí),HCN2通道及其Ih電流、NR2B參與了疼痛及其痛覺敏化的調(diào)控作用。因此,我們推測,在脊髓和海馬水平HCN2、NR2B共同參與了PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性—中樞痛覺敏化的形成。本文擬采用免疫熒光技術(shù)、激光共聚焦技術(shù)及內(nèi)臟敏感性的測定等方法闡明HCN2通道、NR2B共同參與PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性—中樞敏化形成的機(jī)制,及CTX通過下調(diào)HCN2的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性效應(yīng),為臨床上防治PTSD相關(guān)疾病提供新方法。性刺激效應(yīng)目的:研究PTSD誘導(dǎo)的內(nèi)臟敏感性的改變及HCN2阻斷劑ZD7288的抗內(nèi)臟傷害性刺激效應(yīng)。方法:1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:隨機(jī)選取清潔成年SD(sprague-dawley rats,SD)雌性大鼠22只,體重約150~200g,將大鼠隨機(jī)分為3組:即正常對照組(7只)、PTSD組(8只)和PTSD+ZD7288組(7只)。正常對照組:不予任何處理正常飼養(yǎng);PTSD組:采用連續(xù)單一應(yīng)激(single-prolonged stress model,SPS)聯(lián)合電擊刺激(1 m A,持續(xù)4 s)的方法制備PTSD內(nèi)臟高敏感大鼠模型,術(shù)后7天進(jìn)行實(shí)驗(yàn);PTSD+ZD7288組:在建立PTSD大鼠模型的基礎(chǔ)上,給予鞘內(nèi)注射HCH2的阻斷劑ZD7288(100 nmol/L),2h后開始實(shí)驗(yàn)。2)PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性的檢測:采用結(jié)直腸擴(kuò)張(colorectal distention,CRD)引起內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)反射(visceromotor reflex,VMR)的方法檢測大鼠內(nèi)臟敏感性改變,并觀察HCN2阻斷劑ZD7288的抗內(nèi)臟傷害性刺激效應(yīng)。采用SPIKE2軟件分析腹外斜肌的放電活動(dòng),即計(jì)算出肌電圖(electromyogram,EMG)的平均曲線下面積(area under the curve,AUC),AUC值代表內(nèi)臟敏感性的高低。結(jié)果:與正常組比較,在40mm Hg壓力下行CRD時(shí),PTSD組AUC明顯高于正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.6200±0.0278 vs.0.3786±0.0155,P0.001);在60mm Hg壓力下行CRD時(shí),PTSD組AUC明顯亦高于正常對照組(0.7663±0.0262 vs.0.5271±0.0212,P0.001)。在20、40、60mm Hg壓力下行CRD時(shí),PTSD+ZD7288組AUC較PTSD組顯著降低,P值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.2180±0.0159 vs.0.2913±0.0229,P=0.005)、(0.4618±0.0157 vs.0.6200±0.0278,P0.001)、(0.6023±0.0173 vs.0.7663±0.0262,P0.001)。結(jié)論:采用SPS聯(lián)合足底電擊的方法可成功建立PTSD內(nèi)臟高敏感大鼠模型,PTSD可誘導(dǎo)慢性的內(nèi)臟高敏感性-中樞敏化狀態(tài)的形成;鞘內(nèi)注射HCN2的阻斷劑ZD7288有明顯的抗內(nèi)臟傷害性刺激的效應(yīng)。第一部分PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性改變及HCN2阻斷劑ZD7288的抗內(nèi)臟傷害研究PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下胸髓、腰髓和前額葉皮層、海馬HCN2表達(dá)的改變。方法:1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:選用清潔級成年雌性SD大鼠共14只,體重約150~200 g。將大鼠隨機(jī)分為2組:即正常對照組和PTSD組,每組各7只。正常對照組無任何處理正常飼養(yǎng);PTSD組,根據(jù)前述方法建立PTSD模型。2)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究HCN2在腰髓、胸髓和前額葉皮層、海馬表達(dá)的改變。采用Image-Pro Plus6.0分析軟件計(jì)算HCN2表達(dá)的平均光密度值(average optical density,AOD)值。結(jié)果:1)PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下HCN2在腰髓水平的表達(dá)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究發(fā)現(xiàn):在PTSD內(nèi)臟高敏感模型組,HCN2集中分布于脊髓背角I-II層,在前角亦有少量表達(dá),其HCN2表達(dá)的AOD值較正常對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(121.12±4.85 vs.78.05±6.49,P0.001)。2)PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下HCN2在胸髓水平的表達(dá)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究發(fā)現(xiàn):在PTSD內(nèi)臟高敏感模型組,HCN2亦主要分布于脊髓背角I-II層,在前角亦有少量表達(dá),其HCN2表達(dá)的AOD值較正常對照組顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(124.44±4.63 vs.70.13±5.46,P0.001)。3)PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下HCN2在海馬水平的表達(dá)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究發(fā)現(xiàn):在PTSD內(nèi)臟高敏感模型組,HCN2在海馬神經(jīng)元有大量表達(dá),呈密集分布的深綠色熒光。與正常對照組比較,其HCN2的AOD值顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(95.49±4.64 vs.65.36±4.34,P0.01)。4)PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下HCN2在前額葉皮層的表達(dá)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究發(fā)現(xiàn):在PTSD內(nèi)臟高敏感模型組,HCN2在前額葉皮層有大量表達(dá),其AOD值較正常對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(122.39±4.33 vs.96.28±5.78,P0.001)。結(jié)論:在PTSD狀態(tài)下,在脊髓和大腦水平HCN2的表達(dá)明顯上調(diào)。在中樞水平HCN2介導(dǎo)了PTSD內(nèi)臟高敏感-中樞敏化形成的分子機(jī)制。第三部分PTSD狀態(tài)下CTX通過影響HCN2的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性效應(yīng)的作用及機(jī)制目的:第二部分在PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下脊髓和大腦HCN2表達(dá)的改變目的:PTSD狀態(tài)下β-內(nèi)酰胺類抗生素頭孢曲松鈉(ceftriaxone,CTX)對脊髓HCN2表達(dá)的影響及CTX下調(diào)HCN2表達(dá)的抗傷害性效應(yīng)。方法:1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:選用清潔級成年雌性SD大鼠共44只,體重約150~200 g,將大鼠分為三組:正常對照組(14只,7只用于免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究,另外7只用于內(nèi)臟敏感性的測定);PTSD組(15只,7只用于免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究,另外8只用于內(nèi)臟敏感性的測定),PTSD+CTX組(15只,7只用于免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究,另外8只用于內(nèi)臟敏感性的測定)。正常對照組無任何處理正常飼養(yǎng);PTSD組,根據(jù)前述方法建立PTSD模型;PTSD+CTX組在PTSD術(shù)后,連續(xù)7d給予CTX腹腔注射(200 mg/kg)。2)采用CRD-VMR檢測大鼠內(nèi)臟敏感性改變3)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究脊髓水平CTX對HCN2表達(dá)的影響。結(jié)果:與PTSD組比較,在20mm Hg壓力下行CRD時(shí),PTSD+CTX組AUC明顯降低(0.2175±0.0090 vs.0.2913±0.0229,P=0.005);在40mm Hg壓力下行CRD時(shí),PTSD+CTX組AUC顯著降低(0.5038±0.0336 vs.0.6200±0.0278,P=0.006);在60mm Hg壓力下行CRD時(shí),PTSD+CTX組AUC亦較PTSD組顯著降低(0.6400±0.0245 vs.0.7663±0.0262,P=0.001)。免疫熒光結(jié)果顯示:與PTSD組比較,在腰髓水平PTSD+CTX組HCN2表達(dá)明顯減少,其AOD值顯著降低(98.24±5.86 vs.121.12±4.85,P=0.012)。結(jié)論:在內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下CTX可明顯下調(diào)HCN2的表達(dá),CTX可通過影響HCN2的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性作用。第四部分在PTSD狀態(tài)下HCN2與NR2B在脊髓和海馬共表達(dá)協(xié)同調(diào)控內(nèi)臟高敏感性的機(jī)制目的:研究PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下HCN2與NR2B在脊髓和海馬的共同表達(dá)的改變。方法:1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:選用清潔級成年雌性SD大鼠共13只,體重約150~200 g。將大鼠隨機(jī)分為2組:即正常對照組(6只)和PTSD組(7只)。正常對照組無任何處理正常飼養(yǎng);PTSD組,根據(jù)前述方法建立PTSD模型。2)采用免疫熒光及激光共聚焦技術(shù)研究HCN2與NR2B在脊髓和海馬的共同表達(dá)的改變。采用Image-Pro Plus6.0分析軟件計(jì)算HCN2表達(dá)的AOD值。結(jié)果:1)HCN2與NR2B在大鼠脊髓的共同表達(dá)觀察比較HCN2、NR2B在對照組與PTSD組大鼠脊髓的共同表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表示,HCN2、NR2B在PTSD組大鼠脊髓表達(dá)的AOD值均明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(119.83±3.13 vs.79.33±3.52,P0.01)與(90.83±4.35 vs.64.83±3.40,P0.01)。2)HCN2與NR2B在大鼠海馬的共同表達(dá)觀察比較HCN2、NR2B在對照組與PTSD組大鼠海馬的共同表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表示,HCN2、NR2B在PTSD組大鼠脊髓表達(dá)的AOD值均明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(96.17±3.47 vs.63.50±3.84,P0.01)與(114.17±3.52 vs.75.83±4.12,P0.01)。結(jié)論:在PTSD狀態(tài)下,在脊髓和海馬水平HCN2與NR2B的共同表達(dá)均明顯上調(diào)。在中樞水平HCN2與NR2B共同調(diào)控了PTSD內(nèi)臟高敏感-中樞敏化形成的分子機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：脊髓 結(jié)直腸擴(kuò)張 內(nèi)臟高敏感 頭孢曲松鈉 超極化激活環(huán)核苷酸門控通道2 創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.5
【目錄】：

• 英文縮寫詞表5-6
• 英文摘要6-12
• 中文摘要12-17
• 第一章 前言17-19
• 第二章 PTSD狀態(tài)下內(nèi)臟敏感性改變及HCN2阻斷劑ZD7288的抗內(nèi)臟傷害性刺激效應(yīng)19-24
• 2.1 材料和方法19-21
• 2.2 結(jié)果21-22
• 2.3 討論22-24
• 第三章 在PTSD內(nèi)臟高敏感狀態(tài)下脊髓和大腦HCN2表達(dá)的改變24-33
• 3.1 材料和方法24-26
• 3.2 結(jié)果26-31
• 3.3 討論31-33
• 第四章 PTSD狀態(tài)下CTX通過影響HCN2的表達(dá)發(fā)揮抗內(nèi)臟傷害性效應(yīng)的作用及機(jī)制33-41
• 4.1 材料和方法33-36
• 4.2 結(jié)果36-39
• 4.3 討論39-41
• 第五章 在PTSD狀態(tài)下HCN2與NR2B在脊髓和海馬共表達(dá)協(xié)同調(diào)控內(nèi)臟高敏感性的機(jī)制41-47
• 5.1 材料和方法41-43
• 5.2 結(jié)果43-46
• 5.3 討論46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 文獻(xiàn)綜述 HCN通道與疼痛的研究進(jìn)展54-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 碩士期間發(fā)表論文63-64
• 致謝64

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7 李蒙;

本文編號：252649