【摘要】：目的：研究氟西�。‵luoxetine）改善腦神經(jīng)功能方面具有的作用與腦組織神經(jīng)干細胞（neural stem cell,NSC）之間所存在的聯(lián)系，進而探索氟西汀在改善修復(fù)腦神經(jīng)功能方面可能存在的機制。 方法： 1新生大鼠神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)和鑒定：在參考已有大鼠神經(jīng)干細胞分離和培養(yǎng)研究的基礎(chǔ)上，本實驗采用無血清培養(yǎng)技術(shù)，，并改進實驗中多項操作方法（如分離傳代NSC時采用機械分離的方法,這樣能保證一部分原代細胞不受胰酶損害；培養(yǎng)干細胞時給予一定的高密度，促進干細胞的生長增殖）,從新生大鼠海馬腦組織分離培養(yǎng)出具有分裂增殖能力的細胞。 2氟西汀刺激神經(jīng)干細胞產(chǎn)生的影響（實驗動物分組及標(biāo)本檢測）：將傳代培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞分別接種于小號培養(yǎng)皿中，細胞濃度為(4～5)×105/ml，每個培養(yǎng)皿接種3ml，每組接種3個培養(yǎng)皿，共接種15個小培養(yǎng)皿，均應(yīng)用無血清條件培養(yǎng)基培養(yǎng)，按氟西汀臨床穩(wěn)態(tài)血藥濃度（500nmol/L）分別加入不同終濃度的氟西汀進行分組，分組為：①空白對照組（加入等體積的PBS作為Control組）②氟西汀低劑量組（濃度為100nmol/L）③氟西汀中劑量組（臨床穩(wěn)態(tài)血藥濃度組，500nmol/L）④氟西汀高劑量組（1000nmol/L）⑤氟西汀超高劑量組（5000nmol/L）。分別應(yīng)用RT-PCR方法和Western blot方法檢測各組神經(jīng)干細胞膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF mRNA和蛋白的表達水平的差異。 3應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測各組神經(jīng)干細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性細胞百分率之間的差異，各種結(jié)果的差異應(yīng)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，P值均＜0.05。 結(jié)果： 1體外培養(yǎng)條件下從新生大鼠海馬腦組織成功分離培養(yǎng)出具有分裂增殖能力的細胞，nestin免疫組化染色顯示nestin抗原陽性細胞達到96%以上，并可以應(yīng)用于后續(xù)實驗。 2氟西汀刺激神經(jīng)干細胞后，各組神經(jīng)干細胞BDNF mRNA、GDNFmRNA、BDNF蛋白、GDNF蛋白表達量均采用各組與空白對照組的倍數(shù)比(Folds of control)進行統(tǒng)計分析，各實驗結(jié)果比較的大小分別為：（1）BDNF mRNA基本趨勢是：④＞③＞⑤≥②≥①；（2） GDNF mRNA基本趨勢是：④≥③＞②≥⑤＞①；（3）BDNF蛋白表達量基本趨勢是：④＞③＞⑤≥②≥①；（4）GDNF蛋白表達量基本趨勢是：④≥③＞②＞⑤≥①。(注≥表示P值≥0.05，兩組比較不具有顯著差異的兩組之間的表達量的多少；＞表示P值＜0.05，兩組比較具有顯著差異的兩組之間的表達量的多少)。 3氟西汀刺激神經(jīng)干細胞后，各組神經(jīng)干細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）陽性細胞所占百分比的檢測結(jié)果(±SD)%：①空白對照組:(12.52±3.83)%；②氟西汀低劑量組:(21.73±3.37)%；③氟西汀中劑量組:(25.68±4.21)%；④氟西汀高劑量組:(35.34±4.39)%；⑤氟西汀超高劑量組:(15.14±3.16)%；基本趨勢是：④＞③≥②＞⑤≥①。 結(jié)論： 1通過改良培養(yǎng)技術(shù)，采用Nestin免疫組織化學(xué)染色方法成功分離大鼠神經(jīng)干細胞，并應(yīng)用于后續(xù)實驗。 2氟西汀在一定劑量范圍內(nèi)可能通過促進神經(jīng)干細胞上調(diào)某些神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達來間接促進受損腦神經(jīng)的修復(fù)和再生。較低劑量（小于1000nmol/L）能夠刺激神經(jīng)干細胞上調(diào)神經(jīng)營養(yǎng)因子的轉(zhuǎn)錄和翻譯，如腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，可促進腦神經(jīng)功能恢復(fù)；較高劑量（大于1000nmol/L）反而影響神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)錄和翻譯，對神經(jīng)組織造成毒性損傷。 3氟西汀可能通過促進神經(jīng)干細胞分化增殖為星形膠質(zhì)細胞途徑促進受損腦神經(jīng)組織修復(fù)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)。一定劑量范圍內(nèi)（小于1000nmol/L）氟西汀能夠促進神經(jīng)干細胞高表達膠質(zhì)纖維酸性蛋白，使其陽性細胞所占比率升高，促使某些神經(jīng)干細胞活化增殖為星形膠質(zhì)細胞。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R96;R749.4

【參考文獻】

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本文編號：2521036