【摘要】：目的：研究氟西汀（Fluoxetine）改善腦神經(jīng)功能方面具有的作用與腦組織神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cell,NSC）之間所存在的聯(lián)系，進(jìn)而探索氟西汀在改善修復(fù)腦神經(jīng)功能方面可能存在的機(jī)制。 方法： 1新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定：在參考已有大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分離和培養(yǎng)研究的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)采用無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)，，并改進(jìn)實(shí)驗(yàn)中多項(xiàng)操作方法（如分離傳代NSC時(shí)采用機(jī)械分離的方法,這樣能保證一部分原代細(xì)胞不受胰酶損害；培養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)給予一定的高密度，促進(jìn)干細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖）,從新生大鼠海馬腦組織分離培養(yǎng)出具有分裂增殖能力的細(xì)胞。 2氟西汀刺激神經(jīng)干細(xì)胞產(chǎn)生的影響（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及標(biāo)本檢測(cè)）：將傳代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞分別接種于小號(hào)培養(yǎng)皿中，細(xì)胞濃度為(4～5)×105/ml，每個(gè)培養(yǎng)皿接種3ml，每組接種3個(gè)培養(yǎng)皿，共接種15個(gè)小培養(yǎng)皿，均應(yīng)用無(wú)血清條件培養(yǎng)基培養(yǎng)，按氟西汀臨床穩(wěn)態(tài)血藥濃度（500nmol/L）分別加入不同終濃度的氟西汀進(jìn)行分組，分組為：①空白對(duì)照組（加入等體積的PBS作為Control組）②氟西汀低劑量組（濃度為100nmol/L）③氟西汀中劑量組（臨床穩(wěn)態(tài)血藥濃度組，500nmol/L）④氟西汀高劑量組（1000nmol/L）⑤氟西汀超高劑量組（5000nmol/L）。分別應(yīng)用RT-PCR方法和Western blot方法檢測(cè)各組神經(jīng)干細(xì)胞膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF mRNA和蛋白的表達(dá)水平的差異。 3應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組神經(jīng)干細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞百分率之間的差異，各種結(jié)果的差異應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P值均＜0.05。 結(jié)果： 1體外培養(yǎng)條件下從新生大鼠海馬腦組織成功分離培養(yǎng)出具有分裂增殖能力的細(xì)胞，nestin免疫組化染色顯示nestin抗原陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)到96%以上，并可以應(yīng)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2氟西汀刺激神經(jīng)干細(xì)胞后，各組神經(jīng)干細(xì)胞BDNF mRNA、GDNFmRNA、BDNF蛋白、GDNF蛋白表達(dá)量均采用各組與空白對(duì)照組的倍數(shù)比(Folds of control)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較的大小分別為：（1）BDNF mRNA基本趨勢(shì)是：④＞③＞⑤≥②≥①；（2） GDNF mRNA基本趨勢(shì)是：④≥③＞②≥⑤＞①；（3）BDNF蛋白表達(dá)量基本趨勢(shì)是：④＞③＞⑤≥②≥①；（4）GDNF蛋白表達(dá)量基本趨勢(shì)是：④≥③＞②＞⑤≥①。(注≥表示P值≥0.05，兩組比較不具有顯著差異的兩組之間的表達(dá)量的多少；＞表示P值＜0.05，兩組比較具有顯著差異的兩組之間的表達(dá)量的多少)。 3氟西汀刺激神經(jīng)干細(xì)胞后，各組神經(jīng)干細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比的檢測(cè)結(jié)果(±SD)%：①空白對(duì)照組:(12.52±3.83)%；②氟西汀低劑量組:(21.73±3.37)%；③氟西汀中劑量組:(25.68±4.21)%；④氟西汀高劑量組:(35.34±4.39)%；⑤氟西汀超高劑量組:(15.14±3.16)%；基本趨勢(shì)是：④＞③≥②＞⑤≥①。 結(jié)論： 1通過(guò)改良培養(yǎng)技術(shù)，采用Nestin免疫組織化學(xué)染色方法成功分離大鼠神經(jīng)干細(xì)胞，并應(yīng)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2氟西汀在一定劑量范圍內(nèi)可能通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞上調(diào)某些神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)來(lái)間接促進(jìn)受損腦神經(jīng)的修復(fù)和再生。較低劑量（小于1000nmol/L）能夠刺激神經(jīng)干細(xì)胞上調(diào)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的轉(zhuǎn)錄和翻譯，如腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，可促進(jìn)腦神經(jīng)功能恢復(fù)；較高劑量（大于1000nmol/L）反而影響神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子轉(zhuǎn)錄和翻譯，對(duì)神經(jīng)組織造成毒性損傷。 3氟西汀可能通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化增殖為星形膠質(zhì)細(xì)胞途徑促進(jìn)受損腦神經(jīng)組織修復(fù)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)。一定劑量范圍內(nèi)（小于1000nmol/L）氟西汀能夠促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞高表達(dá)膠質(zhì)纖維酸性蛋白，使其陽(yáng)性細(xì)胞所占比率升高，促使某些神經(jīng)干細(xì)胞活化增殖為星形膠質(zhì)細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R96;R749.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2521036