【摘要】：目的： 研究Caspr（Contactin associated protein）與β-淀粉樣前體蛋白（Amyloid PrecursorProtein，APP）之間的關(guān)系，探討Caspr抑制β-淀粉樣蛋白（amyloid-β，Aβ）產(chǎn)生的機(jī)制，揭示Caspr在阿爾茨海默病病理機(jī)制中可能發(fā)揮的作用。 方法： 利用免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence staining）觀察Caspr在APP/PS1老年癡呆模型小鼠腦內(nèi)的分布情況；通過免疫印跡法（western blot）觀察Caspr在APP/PS1老年癡呆模型小鼠和同窩野生型小鼠腦內(nèi)的蛋白表達(dá)情況；以穩(wěn)定表達(dá)印第安納突變的APP的HEK-293細(xì)胞(V717F，HEK-APP)和表達(dá)內(nèi)源性APP的CHO細(xì)胞為研究對象，利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)將質(zhì)粒PCMV-Caspr-myc及它的空載體轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞中，通過免疫印跡法觀察細(xì)胞內(nèi)APP的蛋白表達(dá)情況，并利用實(shí)時(shí)定量PCR（Quantitativereal-time PCR，qPCR）的方法檢測APP的mRNA表達(dá)情況；利用免疫熒光技術(shù)觀察Caspr和APP在細(xì)胞中和C57BL/6J成年小鼠（雄性）大腦皮層中的共定位情況；用免疫共沉淀法（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）研究Caspr和APP的相互作用關(guān)系；將質(zhì)粒PCMV-Caspr-myc轉(zhuǎn)染進(jìn)HEK-APP細(xì)胞中，，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）研究Caspr對APP的酶切產(chǎn)物Aβ（Aβ40和Aβ42）的影響；用MTT比色法檢測轉(zhuǎn)染Caspr后對細(xì)胞活性的影響。 結(jié)果： 免疫熒光法顯示，在APP/PS1老年癡呆模型小鼠的大腦皮層中，Caspr高度聚集在老年斑周圍；Western blot顯示，與對照組相比，Caspr在APP/PS1老年癡呆模型小鼠的大腦皮層中表達(dá)增加；Western blot和qPCR結(jié)果表明，在HEK-APP和CHO細(xì)胞中，過表達(dá)Caspr使APP蛋白的表達(dá)量下降，但并不影響APP的mRNA水平；通過免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)，不論是在小鼠大腦皮層還是細(xì)胞系中，Caspr和APP都共定位于細(xì)胞膜上，并且Co-IP證實(shí)它們是有相互作用的；ELISA結(jié)果顯示，Caspr能抑制APP的酶切產(chǎn)物Aβ（Aβ40和Aβ42）的產(chǎn)生，但是Aβ42/Aβ40的比值不受影響；MTT比色法證實(shí)轉(zhuǎn)染Caspr后細(xì)胞活性并沒有受到明顯影響。 結(jié)論： 在APP/PS1模型小鼠皮層中，Caspr表達(dá)增加并聚集在老年斑周圍。Caspr與APP相互結(jié)合，Caspr通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制減少了APP蛋白的表達(dá)，并且抑制導(dǎo)致老年斑形成的Aβ的產(chǎn)生。由此，我們的研究發(fā)現(xiàn)Caspr參與了阿爾茨海默病病理機(jī)制，其有可能是治療AD的一個(gè)新的藥物靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: to study the relationship between Caspr (Contactin associated protein) and 尾 -amyloid precursor protein (Amyloid PrecursorProtein,APP), and to explore the mechanism of Caspr inhibiting the production of 尾 -amyloid protein (A 尾). To reveal the role of Caspr in the pathogenesis of Alzheimer's disease. Methods: the distribution of Caspr in the brain of APP/PS1 senile dementia mice was observed by immunofluorescence technique (Immunofluorescence staining). The expression of Caspr protein in the brain of APP/PS1 senile dementia mice and the same litter wild type mice was observed by Western blotting (western blot). HEK-293 cells (V717FnHEK-APP) expressing Indiana mutant APP and CHO cells expressing endogenous APP were used to transfect plasmid PCMV-Caspr-myc and its empty vector into the cells by cell transfection technique. The expression of APP protein was observed by Western blot and mRNA expression of APP was detected by real-time quantitative PCR (Quantitativereal-time PCR,qPCR). The co-localization of Caspr and APP in cells and cerebral cortex of adult C57BL/6J mice (male) was observed by immunofluorescence technique, and the interaction between Caspr and APP was studied by immunoprecipitation (Co-Immunoprecipitation,Co-IP). Plasmid PCMV-Caspr-myc was transfected into HEK-APP cells. The effect of Caspr on A 尾 (A 尾 40 and A 尾 42) of APP was studied by (ELISA), and the effect of Caspr transfection on cell activity was detected by MTT colorimetry. Results: immunofluorescence assay showed that in the cerebral cortex of APP/PS1 dementia mice, Caspr was highly concentrated around senile plaque. Western blot showed that the expression of Caspr was increased in the cerebral cortex of APP/PS1 senile dementia mice compared with the control group. The results of Western blot and qPCR showed that overexpression of Caspr in HEK-APP and CHO cells decreased the expression of APP protein, but did not affect the mRNA level of APP. Immunofluorescence technique showed that both Caspr and APP were located on the membrane of mouse cerebral cortex and cell line, and Co-IP confirmed that they interact with each other. The results of ELISA showed that Caspr could inhibit the production of A 尾 (A 尾 40 and A 尾 42), but the ratio of A 尾 42 / A 尾 40 was not affected, and the cell activity was not affected by MTT colorimetry. Conclusion: in the cortex of APP/PS1 model mice, the expression of Caspr increases and aggregates around the senile plaque. Caspr binds to APP and Caspr reduces the expression of APP protein through the mechanism of posttranscriptional regulation. And inhibit the production of A 尾, which leads to the formation of senile plaque. Therefore, our study found that Caspr is involved in the pathogenesis of Alzheimer's disease and may be a new drug target for the treatment of AD.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊紅旗;陳生弟;巴茂文;任汝靜;張宇紅;馬建芳;陸國強(qiáng);;蛋白激酶C激動劑對可溶性淀粉樣前體蛋白分泌的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年07期

2 任汝靜;王剛;潘靜;楊紅旗;陸國強(qiáng);陳生弟;;尼古丁對Aβ_(25～35)細(xì)胞毒性的拮抗作用及與β-淀粉樣前體蛋白代謝的關(guān)系[J];中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2007年03期

3 蔡志友;晏寧;晏勇;張駿;王鳳英;王詠龍;吳芳;張建剛;;淀粉樣前體蛋白酶與β-淀粉樣蛋白在衰老癡呆大鼠腦組織中的表達(dá)[J];中國老年學(xué)雜志;2009年13期

4 肖飛;羅煥敏;;淀粉樣前體蛋白結(jié)構(gòu)和功能的研究進(jìn)展[J];中國老年學(xué)雜志;2009年23期

5 別曼;;淀粉樣前體蛋白5'端啟動子非翻譯區(qū)域的核因子結(jié)合區(qū)可調(diào)控基因表達(dá)[J];中國病理生理雜志;2010年07期

6 張華;谷小云;孟濤;代政偉;趙豐麗;彭雪梅;彭竹云;晏勇;;硫化氫對淀粉樣前體蛋白代謝途徑的影響[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年02期

7 譚家澤;宦小芳;;胰島素樣生長因子-1對β-淀粉樣前體蛋白裂解酶1的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

8 王懷明,麻琳,郭洪志,楊望清;β-淀粉樣前體蛋白、生長抑素在鋁鹽致大鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙中的作用[J];中華神經(jīng)科雜志;2001年04期

9 劉薇,盧光t;攜帶淀粉樣前體蛋白瑞典型突變基因轉(zhuǎn)基因小鼠的制備及體內(nèi)表達(dá)研究[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2002年02期

10 查芹芹,阮燕,劉中華,曹連元,張岱;β-淀粉樣前體蛋白第二、三外顯子刪除突變抑制β-淀粉樣蛋白分泌[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張癸榮;殷明;;興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸對于可溶性淀粉樣前體蛋白生成的影響[A];第九屆中國神經(jīng)藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2000年

2 陳生弟;楊紅旗;巴茂文;任汝靜;張宇紅;馬建芳;陸國強(qiáng);;蛋白激酶C激動劑促進(jìn)可溶性淀粉樣前體蛋白的分泌[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

3 樊彩妮;丁健青;陳生弟;湯薈冬;;β淀粉樣前體蛋白羧基端肽對小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的毒性作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 王抒;孫蘭;杜冠華;;人淀粉樣前體蛋白高表達(dá)抑制SH-SY5Y細(xì)胞M膽堿受體結(jié)合[A];第十一屆全國神經(jīng)藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2004年

5 樊彩妮;湯薈冬;陳生弟;;β淀粉樣前體蛋白羧基端肽對小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的毒性作用及機(jī)制[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第九屆全國學(xué)術(shù)會議暨第五次會員代表大會論文摘要集[C];2011年

6 李瑞林;袁寶莉;郭亞樂;;腦白質(zhì)損害新生大鼠腦內(nèi)β淀粉樣前體蛋白表達(dá)及意義[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會首屆兒童康復(fù)學(xué)術(shù)會議暨中國殘疾人康復(fù)協(xié)會第八屆小兒腦癱學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 楊紅旗;陳生弟;巴茂文;任汝靜;張宇紅;譚玉燕;;Deprenyl對淀粉樣前體蛋白代謝的影響[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

8 邱瑜;吳興軍;榮征星;周冠懷;陳紅專;;M受體對大鼠海馬和大腦皮層的淀粉樣前體蛋白代謝調(diào)節(jié)作用[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

9 楊紅旗;陳生弟;巴茂文;陸國強(qiáng);梁梁;徐潔懿;;絲裂原活化的蛋白激酶在TPPB促進(jìn)可溶性淀粉樣前體蛋白釋放中的作用[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

10 韓恩吉;姚俊英;崔行;曾季平;夏文;;海風(fēng)藤對淀粉樣前體蛋白表達(dá)的抑制作用[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 麥迪信;淀粉樣前體蛋白令神經(jīng)元“挨餓”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 高素琴;干預(yù)β-淀粉樣前體蛋白裂解酶基因減少神經(jīng)細(xì)胞β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生[D];山東大學(xué);2009年

2 張華;胰島素樣生長因子-1對PC12細(xì)胞APP代謝和BACE-1表達(dá)的影響及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

3 張鵬;淀粉樣前體蛋白可溶性α片段與睡眠的相關(guān)性及潛在的認(rèn)知保護(hù)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 鄭瑋;DMT1參與β-淀粉樣前體蛋白表達(dá)和Aβ分泌的機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

5 李e

本文編號：2414763