【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)利用AD鼠經(jīng)典模型APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠,研究新型Rho激酶抑制劑WAR5化合物在疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中對(duì)于減少病理產(chǎn)物,抑制炎癥方面多種的治療效果,同時(shí)進(jìn)一步探討其可能的相關(guān)作用機(jī)制,為進(jìn)一步阿爾茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型,按隨機(jī)原則分為AD組和WAR5組,每組8只。在鼠焌達(dá)8月時(shí)開(kāi)始腹腔注射WAR5化合物(40 mg/kg/day),同時(shí)AD組小鼠腹腔注射同劑量的生理鹽水(0.9%Na Cl);連續(xù)給予60天。之后進(jìn)行為期10天的水迷宮試驗(yàn):1.訓(xùn)練過(guò)程訓(xùn)練周期5 d,每天上下午各一次,訓(xùn)練小鼠從起點(diǎn)到達(dá)隱藏平臺(tái),60 s/次;如在60 s內(nèi)未能到達(dá)平臺(tái),則進(jìn)行人工引導(dǎo)。在小鼠到達(dá)平臺(tái)后留滯60 s;2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程在訓(xùn)練完成后進(jìn)行5 d的認(rèn)知功能測(cè)驗(yàn),將小鼠放入水中,自由游動(dòng)60 s。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,SMART V3.0攝像頭自動(dòng)跟蹤。在平臺(tái)SW區(qū)活動(dòng)度占總活動(dòng)度的比例(Global Activity in SW(%))、小鼠的逃避潛伏期(Escape latency)、入水到平臺(tái)時(shí)間(Latency to Target)、到平臺(tái)路徑距離(Mean Distance to Target)、第一次到達(dá)SW區(qū)時(shí)間(Latency 1st Entrance to SW)、在SW區(qū)滯留時(shí)間占總時(shí)間的比例(Time in SW(%))、在SW區(qū)路徑距離占總路徑距離的比例(Distance in SW(%))等指標(biāo)會(huì)被SMART V3.0系統(tǒng)跟蹤并記錄分析。水迷宮試驗(yàn)后處死動(dòng)物,分離腦組織,進(jìn)行冠狀位行冰凍切片,進(jìn)行腦組織免疫熒光染色技術(shù)。同時(shí)提取小鼠腦組織蛋白,檢測(cè)Aβ1-42,p-tau,BACE-1,TLR-4,p-NF-κB,Arginase,i NOS,PSD95和AMPAR2的蛋白表達(dá)情況。幾種實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果使用Graphpad Prism5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。結(jié)果:1.經(jīng)WAR5治療的APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知能力得到明顯提高。與AD組相比,WAR5組小鼠的逃避潛伏期(Escape latency),找到平臺(tái)的時(shí)間(Latency to Target)、在SW區(qū)路徑距離占總路徑距離的比例(Distance in SW(%))、入水到平臺(tái)時(shí)間(Latency to Target)、到平臺(tái)路徑距離(Mean Distance to Target)、第一次到達(dá)SW區(qū)時(shí)間(Latency 1st Entrance to SW)、在SW區(qū)滯留時(shí)間占總時(shí)間的比例(Time in SW(%))比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。顯示出學(xué)習(xí)和記憶認(rèn)知能力得到改善。2.WAR5治療明顯降低了小鼠CNS中病理產(chǎn)物Aβ1-42,p-tau,BACE-1的表達(dá)。免疫熒光染色可見(jiàn)經(jīng)WAR5治療的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中Aβ1-42.p-tau表達(dá)明顯降低;通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示W(wǎng)AR5組Aβ1-42,p-tau和BACE-1蛋白表達(dá)比AD組均降低(P0.05,P0.05,P0.05)。3.WAR5降低了CNS中炎性因子及相關(guān)因子TLR-4,p-NF-κB和i NOS的表達(dá),增加了Arginase的表達(dá)。與AD組相比,經(jīng)WAR5治療的小鼠腦組織中炎性因子及相關(guān)因子表達(dá)明顯降低(P0.05,P0.05,P0.05),提示W(wǎng)AR5對(duì)腦組織有明顯的抗炎抑炎的作用。4.WAR5治療增加了的表達(dá)PSD95和AMPAR2的表達(dá),WAR5治療組與AD組相比,在CNS中PSD95和AMPAR2因子的表達(dá)均增加(P0.05)。結(jié)論:通過(guò)結(jié)果顯示了WAR5化合物治療AD的潛在可能,明顯提高AD小鼠的認(rèn)知能力。WAR5抑制病理產(chǎn)物Aβ1-42,p-tau,BACE-1的表達(dá),降低腦組織中TLR-4,p-NF-κB和i NOS的表達(dá),增加了Arginase的表達(dá),同時(shí)增強(qiáng)了PSD95和AMPAR2的表達(dá)。WAR5的治療效果可能是抑制病理產(chǎn)物的產(chǎn)生,降低炎性因子及相關(guān)因子TLR-4,p-NF-κB和i NOS的表達(dá),增加了Arginase的表達(dá)。增加了PSD95和AMPAR2的表達(dá),最終延緩了疾病的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R749.16;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2387315