【摘要】：目的： 1.觀察首烏益智膠囊對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成的影響，及對VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響，從而驗證首烏益智膠囊是否能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞血管新生，并探討其可能機(jī)制。 2.通過觀察首烏益智膠囊對血管性認(rèn)知障礙模型大鼠缺血腦組織微血管密度的影響，探討首烏益智膠囊促血管新生的療效。 3.觀察首烏益智膠囊對大鼠缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表達(dá)的影響，探討首烏益智膠囊促進(jìn)具有穩(wěn)定功能的血管新生的信號調(diào)控機(jī)制。 方法： 1.培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，隨機(jī)分為空白對照組、尼莫地平組（尼莫地平含藥血清）、首烏益智膠囊組（首烏益智膠囊含藥血清），分組用藥，采用MTT法、劃痕損傷實驗、管樣結(jié)構(gòu)生成實驗等檢測內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和管樣結(jié)構(gòu)生成；采用實時定量PCR檢測HUVECs細(xì)胞VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表達(dá)。 2.以Wistar大鼠為實驗對象，采用大腦中動脈缺血再灌注法建立血管性認(rèn)知障礙動物模型。將造模成功大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組（0.81mg/100g/d）、首烏益智膠囊組（54mg/100g/d），每組20只，造模后藥物干預(yù)4周，Morris水迷宮試驗檢測各組大鼠行為學(xué)改變，免疫組化檢測CD34表達(dá)觀察缺血周圍腦組織微血管密度的改變，電鏡觀察腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化，實時熒光定量PCR檢測缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因表達(dá)。 結(jié)果： 1.離體實驗結(jié)果 （1）首烏益智膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成的影響：首烏益智膠囊組OD值為0.99±0.03,明顯高于空白對照組的0.54±0.02(p0.01)；首烏益智膠囊組遷移率為94.83%,明顯高于空白對照組的70.94%(p0.01)；高倍視野(200×)隨機(jī)計算6個視野下形成的管腔個數(shù)，，首烏益智膠囊為23.42±2.83,明顯高于空白對照組的15.23±3.44(p0.01)。 （2）首烏益智膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響：空白對照組、尼莫地平組、首烏益智膠囊組的VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA水平依次升高。與空白對照組比較，尼莫地平組和首烏益智膠囊組有顯著性差異（p0.01, p0.05）；與尼莫地平組比較，首烏益智膠囊組Ang-1、Notch4mRNA表達(dá)有顯著性差異（p0.05），首烏益智膠囊組VEGF、Tie-2mRNA表達(dá)無顯著性差異（p0.05）。 2.在體實驗結(jié)果 （1）首烏益智膠囊對VCI模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響：水迷宮結(jié)果表明，首烏益智膠囊組大鼠的定位航行和空間探索實驗測試成績明顯優(yōu)于模型組和尼莫地平組(p 0.01, p 0.05)。 （2）首烏益智膠囊對缺血周圍腦組織微血管密度的影響：模型組、尼莫地平組、首烏益智膠囊組較假手術(shù)組依次升高；各組與假手術(shù)組相比，有顯著性差異（p 0.01,p0.05）；與模型組比較，尼莫地平組、首烏益智膠囊組有顯著性差異（p0.01, p0.05）；與尼莫地平組比較，首烏益智膠囊組差異無顯著性（p0.05）。 （3）首烏益智膠囊對VCI模型大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響：模型組缺血側(cè)微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)以及毛細(xì)血管周圍高度水腫，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目減少，線粒體的大部分嵴融合消失，部分核膜融合消失。首烏益智膠囊組和尼莫地平組：鏡下表現(xiàn)較模型組均有明顯改善，毛細(xì)血管周圍水腫較模型組輕，基膜基本正常，血管內(nèi)皮細(xì)胞可見較多的線粒體，已接近正常狀態(tài)。以首烏益智膠囊組對內(nèi)皮水腫改善最為顯著。 （4）首烏益智膠囊對VCI模型大鼠缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響：模型組VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4、DLL4mRNA水平較假手術(shù)組大鼠升高，差異有顯著性（p0.05）。尼莫地平組和首烏益智膠囊組VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA水平與模型組有明顯升高（p0.01, p0.05）；首烏益智膠囊組VEGF、Ang-1、Notch4mRNA表達(dá)升高，與尼莫地平組相比存在顯著性差異（p0.05）；首烏益智膠囊組Tie-2mRNA表達(dá)升高，與尼莫地平組相比無顯著性差異（p0.05）。 結(jié)論： 1.首烏益智膠囊能促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成，從而具有促進(jìn)血管新生的療效。首烏益智膠囊可能通過上調(diào)VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因的表達(dá)發(fā)揮促血管新生的療效。 2.首烏益智膠囊能明顯提高VCI模型大鼠缺血腦組織微血管密度，促進(jìn)血管新生。VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因表達(dá)的上調(diào)可能是首烏益智膠囊促血管新生的分子機(jī)制。 3.首烏益智膠囊通過促進(jìn)血管新生，改善神經(jīng)功能，從而提高VCI大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，是治療VCI的有效方藥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R285.5;R749.1

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本文編號：2348226