【摘要】：研究背景 抑郁癥是常見的精神疾病，以顯著而持久的情緒低落為主要臨床特征，其終生患病率高達16%，但發(fā)病機制尚不明確，缺乏客觀有效的診斷標志物。由于血漿是一種取材容易、應用廣泛的研究樣品，檢測血漿特異蛋白的改變越來越廣泛應用于臨床疾病的診斷。近幾年發(fā)展起來的差異蛋白質(zhì)組學技術在研究疾病發(fā)病機制、尋找疾病相關標志物、探索并揭示許多未知但具有重要作用的蛋白質(zhì)方面具有明顯的優(yōu)勢。因此，運用血漿差異蛋白組學的方法，尋找抑郁癥相關的蛋白分子，有望為抑郁癥的早期診斷提供客觀標志物。 雖然血漿差異蛋白質(zhì)組學技術在尋找疾病相關標志物方面較傳統(tǒng)方法更有優(yōu)勢，但方法本身也有不足和局限性。首要問題是必須對蛋白質(zhì)組學篩查的差異表達蛋白進行深入驗證，以確保結果的可靠性。Western blot是常用的進行差異蛋白驗證方法之一。在血漿Western blot實驗中，選擇合適的內(nèi)參對Western blot驗證結果的準確性尤為重要。β-actin是一種重要的細胞骨架蛋白，廣泛分布于細胞漿內(nèi)，在各組織和細胞中的表達豐富且相對恒定，是組織和細胞樣品中常用的內(nèi)參。然而β-actin是否存在于血漿中？如果存在，其在血漿中的含量如何，能否作為抑郁癥患者血漿Western blot的內(nèi)參？這些問題目前還不清楚。 目的 探索β-actin是否存在于人的血漿中，并進一步探討β-actin能否作為抑郁癥患者血漿Western blot的內(nèi)參。 方法 1.經(jīng)肘正中靜脈采集6例空腹抑郁癥患者與6例空腹健康對照者血液5ml（EDTA抗凝），分離血漿保存以備使用。 2.運用ELISA方法檢測抑郁癥患者及健康人的血漿中β-actin含量。 3.分析血漿蛋白上樣量與Western blot方法檢測的β-actin灰度值的線性關系。 4.運用Western blot的方法檢測β-actin在抑郁癥患者和健康人血漿中的表達情況，分析兩組間血漿β-actin表達是否存在差異。 結果 1. β-actin存在于抑郁癥患者及健康人血漿中，并且占血漿總蛋白的9.4×10~(-8)。 2.上樣量與β-actin灰度值的線性關系非常好（R2=0.974±0.012）。 3.抑郁癥患者與健康人血漿中β-actin的表達沒有統(tǒng)計學差異（P0.05），且兩組β-actin灰度值變異系數(shù)很�。–V=9.2±1.2%）。 結論 1. β-actin存在于人的血漿中，但其含量較組織和細胞中少。 2.初步研究證明β-actin可以作為抑郁癥患者血漿Western blot的內(nèi)參。
[Abstract]:Background Depression is a common mental disorder with significant and persistent depression as the main clinical feature. The lifetime prevalence rate of depression is as high as 16. However, the pathogenesis of depression is still unclear and lacks of objective and effective diagnostic markers. Because plasma is a kind of easy material, it is widely used to detect the change of plasma specific protein in the diagnosis of clinical diseases. The differential proteomics technology developed in recent years has obvious advantages in studying the pathogenesis of diseases, searching for disease related markers, and exploring and revealing many unknown but important proteins. Therefore, using the method of plasma differential proteomics to search for depressive related protein molecules may provide an objective marker for the early diagnosis of depression. Although plasma differential proteomics technique has more advantages than traditional methods in finding disease-related markers, the method itself has its own shortcomings and limitations. The most important problem is that the differential expression proteins of proteomics screening must be thoroughly verified to ensure the reliability of the results. Western blot is one of the commonly used differential protein verification methods. In plasma Western blot assay, it is very important to select suitable internal parameters to verify the accuracy of Western blot results. 尾-actin is an important cytoskeleton protein, widely distributed in the cytoplasm, and its expression is abundant and relatively constant in all tissues and cells. It is a common internal reference in tissue and cell samples. However, does 尾-actin exist in plasma? If so, what is its content in plasma and can it be used as an internal reference for plasma Western blot in patients with depression? These problems are still unclear. Objective to investigate whether 尾-actin exists in human plasma and whether 尾-actin can be used as an internal reference for plasma Western blot in patients with depression. Method 1. Blood 5ml (EDTA anticoagulant) was collected from 6 patients with depression and 6 healthy controls through the median cubital vein. The content of 尾-actin in the plasma of patients with depression and healthy persons was detected by ELISA method. To analyze the linear relationship between the amount of plasma protein sample and the gray value of 尾-actin detected by Western blot method. 4. Western blot was used to detect the expression of 尾-actin in the plasma of depression patients and healthy people, and the difference of 尾-actin expression between the two groups was analyzed. Results 1. 尾-actin existed in the plasma of patients with depression and healthy people, and accounted for 9.4 脳 10 ~ (-8) 路2. 2 of the total plasma protein. 2. The linear relationship between the amount of sample and the gray value of 尾-actin is very good (R20.974 鹵0.012). There was no significant difference in the expression of 尾-actin between patients with depression and healthy subjects (P0.05), and the coefficient of variation of 尾-actin in the two groups was very small (CV=9.2 鹵1.2%). Conclusion 1. 尾-actin exists in human plasma, but its content is less than that in tissue and cell. 2. Preliminary studies have demonstrated that 尾-actin can be used as an internal reference for plasma Western blot in patients with depression.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R749.4

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本文編號：2287324