【摘要】：目的通過水迷宮實驗,觀察美金剛和瑞舒伐他汀對血管性癡呆(vascular dementia,VaD)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響;通過對大鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的測定及海馬區(qū)微血管密度(microvessel density,MVD)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)測定,分析瑞舒伐他汀和鹽酸美金剛對VaD大鼠血管再生的影響并討論其作用機制;通過對大鼠海馬區(qū)溴脫氧尿苷(bromodeoxyuridine,BrdU)及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的測定并結(jié)合海馬區(qū)CA3-CA1區(qū)的長時程增強(long-term potentiation,LTP)的測定,分析瑞舒伐他汀和美金剛對VaD神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)突觸可塑性的影響并討論其作用機制。方法60只成年雄性SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、瑞舒伐他汀組、美金剛組、瑞舒伐他汀聯(lián)合美金剛組(聯(lián)合組),每組各12只。采用永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈方法(2VO)制作VaD模型。瑞舒伐他汀組、美金剛組及聯(lián)合組術(shù)后1周給予瑞舒伐他汀10mg/(kg·d)、美金剛10mg/(kg·d)及美金剛聯(lián)合瑞舒伐他汀,均為10mg/(kg·d)連續(xù)4周灌胃治療。模型組和假手術(shù)組灌胃等量生理鹽水。術(shù)后5周后通過Morris水迷宮定位航行實驗和空間探索實驗,記錄逃避潛伏期及目標(biāo)象限百分率,比較藥物治療組、模型組與假手術(shù)組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。各組大鼠中隨機抽取6只大鼠于眼球后靜脈取血約1ml,利用流式細(xì)胞儀測定各組大鼠EPCs計數(shù),取血后斷頭取腦,行HE染色方法觀察各組大鼠海馬區(qū)細(xì)胞形態(tài)的變化,免疫組織化學(xué)方法檢測海馬區(qū)MVD、BrdU的表達;各組剩余大鼠通過LTP檢測海馬CA3-CA1區(qū)的神經(jīng)突觸可塑性,Western Blot測定各組大鼠海馬區(qū)BDNF、VEGF蛋白的表達。結(jié)果1、Morris水迷宮測試結(jié)果與假手術(shù)組比較,VaD模型組大鼠術(shù)后水迷宮試驗逃避潛伏期明顯延長(p0.05),目標(biāo)象限百分率明顯減少(p0.05)。與模型組比較,各個治療組水迷宮逃避潛伏期明顯縮短、目標(biāo)象限百分率明顯增加(p0.05)。2、外周血epcs計數(shù)結(jié)果與模型組比較,美金剛組、瑞舒伐他汀組及聯(lián)合組術(shù)后5周epc顯著升高(p0.01);與假手術(shù)組比較,瑞舒伐他汀組和聯(lián)合組術(shù)后5周epc顯著升高,模型組明顯減少(p0.05)。3、he染色與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少,排列紊亂,細(xì)胞大量萎縮,輪廓不清,出現(xiàn)空泡變性、核固縮,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)不清。與模型組相比,各治療組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增多,排列較整齊,細(xì)胞形態(tài)較完整,僅見少量核固縮。4、免疫組化染色結(jié)果mvd計數(shù)結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較,模型組術(shù)后5周海馬區(qū)mvd計數(shù)明顯減少(p0.05)。與模型組比較,美金剛組、聯(lián)合組術(shù)后5周海馬區(qū)mvd計數(shù)明顯增多(p0.05);三個藥物干預(yù)治療組相比較,聯(lián)合組mvd計數(shù)較美金剛組增多更為明顯(p0.05)。brdu陽性細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示:模型組brdu陽性細(xì)胞與假手術(shù)組比較有所增加(p0.05);藥物干預(yù)后發(fā)現(xiàn),與模型組相比,瑞舒伐他汀組和聯(lián)合組brdu陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(p0.05),美金剛組無顯著差異(p0.05);三個藥物干預(yù)治療組相比較,聯(lián)合組brdu陽性細(xì)胞數(shù)較美金剛組明顯增多(p0.05)。5、ltp結(jié)果與假手術(shù)組比較,模型組海馬ca3-ca1區(qū)ltp明顯減低(p0.05);與模型組比較,美金剛組、瑞舒伐他汀組、聯(lián)合組均明顯增強(p0.05);且兩藥物聯(lián)合后較單一用藥斜率增強更多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。6、westernblot結(jié)果與假手術(shù)組比較,模型組大鼠術(shù)后5周vegf蛋白表達輕度上調(diào),bdnf蛋白表達下降(p0.05)。與模型組比較,各治療組大鼠vegf、bdnf蛋白表達增加(p0.05);三個治療組比較,聯(lián)合組bdnf蛋白表達較瑞舒伐他汀組增加更為明顯,vegf蛋白表達較美金剛組增加更為明顯,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論1、HE染色發(fā)現(xiàn)VaD大鼠海馬區(qū)細(xì)胞排列素亂、呈空泡樣變、核固縮及細(xì)胞突起減少等,Morris水迷宮實驗觀察到VaD大鼠空間記憶功能明顯減退。提示VO法制作的VaD大鼠模型可以部分模擬人類VaD的病理和行為改變。2、美金剛、瑞舒伐他汀及兩藥聯(lián)合均可使VaD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力有所改善。但是兩藥聯(lián)合使用較單一用藥無明顯差異。3、首次發(fā)現(xiàn)美金剛可以促進VaD大鼠海馬區(qū)血管再生。4、美金剛、瑞舒伐他汀及兩藥聯(lián)合治療VaD大鼠后能動員其外周血EPCs、提高海馬區(qū)MVD及VEGF蛋白的表達從而促進血管再生。但是兩藥聯(lián)合使用較單一用藥無明顯差異。5、瑞舒伐他汀治療VaD大鼠后其海馬區(qū)BrdU陽性細(xì)胞數(shù)有所增加,說明他汀類藥物可以激活內(nèi)源性NSCs從而促進神經(jīng)修復(fù)。美金剛、瑞舒伐他汀及兩藥聯(lián)合治療VaD大鼠能使海馬區(qū)LTP提高,BDNF表達增多,從而改善神經(jīng)突觸可塑性,進而改善VaD大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。兩藥聯(lián)合較單一用藥對VaD大鼠海馬神經(jīng)突觸可塑性改善更有效。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.13

【參考文獻】

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本文編號：2268168