本文選題：MGE前體細(xì)胞 + GABA��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的和意義掌握MGE區(qū)前體細(xì)胞體外分離提取的方法,檢測其GABA神經(jīng)前體細(xì)胞特性標(biāo)記和神經(jīng)元定向分化能力;探討MGE前體細(xì)胞移植后的存活、遷移及分化情況;了解MGE前體細(xì)胞移植對TRIM32-/-小鼠自閉癥樣行為學(xué)缺陷和腦電圖癇性放電的影響。研究方法體外分離MGE前體細(xì)胞,采用細(xì)胞免疫熒光染色檢測細(xì)胞培養(yǎng)后Nestin、Lhx6、Nkx2.1以及GABA、GAD67和PV的表達(dá)。采用組織免疫熒光染色檢測細(xì)胞移植后GFP熒光移植細(xì)胞與GABA、GAD67、PV、CR、NPY和NeuN等共染情況,行為學(xué)實驗檢測細(xì)胞移植后TRIM32-/-小鼠自閉癥樣行為的改善情況以及腦電圖檢測其癇性放電的改變。研究內(nèi)容和過程1.部分細(xì)胞懸液繼續(xù)培養(yǎng),分別進(jìn)行干性維持和定向分化培養(yǎng),之后進(jìn)行Nestin、Nkx2.1和LHX6以及GABA、GAD67和PV等蛋白細(xì)胞免疫熒光染色。2.細(xì)胞密度為1X 107個/mL,細(xì)胞懸液移植每注射點2ul細(xì)胞懸液,注射點海馬(±1.8,-2.0,-2.0)和皮層(±1.8,0,-1.0),200nl/min 的速度注射細(xì)胞懸液,注射完畢留針5min,術(shù)前及術(shù)后各注射環(huán)孢菌素2ml(2ml/g;5ug/g),連續(xù)注射14天。3.MGE前體細(xì)胞移植4周后,組織免疫熒光染色GABA、GAD67、PV、CR、NPY和NeuN,統(tǒng)計各標(biāo)記物陽性細(xì)胞在皮層和海馬區(qū)以及海馬傘區(qū)域分化成熟后的比例數(shù)。4.三室社交偏好實驗,社交互動實驗,筑巢實驗,Y迷宮自發(fā)性選擇實驗,自我捋毛實驗等行為學(xué)檢測MGE前體細(xì)胞移植4周后,MGE-NPCs移植TRIM32-/-小鼠、失活MGE前體細(xì)胞細(xì)胞移植TRIM32-/-小鼠及TRIM32+/+小鼠等實驗組行為學(xué)評分。5.MGE前體細(xì)胞移植4周時檢測各實驗組移植區(qū)域腦電圖癇性放電頻率的差異。研究結(jié)果1.分離出的MGE前體細(xì)胞臺盼藍(lán)染色80%-90%活細(xì)胞。2.MGE前體細(xì)胞巢蛋白(Nestin)、NK2同源框1(NKX2.1)、6型LIM同源框蛋白(LHX6)等干細(xì)胞及MGE特定蛋白均陽性表達(dá),體外分化后的GABA、GAD67、PV 表達(dá)陽性比率分別為(0.718±0.091),(0.694±0.058),(0.433±0.08)。3.冰凍腦組織切片免疫熒光顯微鏡觀察移植后MGE前體細(xì)胞在海馬、皮層和紋狀體等區(qū)域均有遷移和分化,而非特定遷移區(qū)如胼胝體、海馬傘等區(qū)域細(xì)胞遷移和分化少。4.組織免疫熒光染色統(tǒng)計海馬區(qū)移植后4周時成熟神經(jīng)元標(biāo)記NeuN(0.764±0.098),GABA(0.704± 0.124),GABA 合成酶 GAD(0.752±0.062),PV(0.255±0.055),CR(0.193±0.062),NPY(0.163±0.047)。同樣,皮層區(qū) GABA(0.600±0.107),GAD67(0.546±0.125),PV(0.171±0.053),CR(0.100±0.030),NPY(0.130±0.041),NeuN(0.631±0.064)。而在海馬傘區(qū) GABA、GAD67、PV、CR、NPY、NeuN 等均表達(dá)陰性。5.組織免疫熒光染色觀察部分移植細(xì)胞髓鞘堿性蛋白(MBP)和表達(dá)突觸小泡蛋白(SYP)表達(dá)陽性,而基本上所有移植細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)陰性表達(dá)。6.三室社交偏好實驗、社交互動實驗、自我捋毛實驗、Y迷宮自發(fā)性選擇實驗、筑巢實驗等行為學(xué)結(jié)果顯示細(xì)胞移植組TRIM32-/-小鼠較對照組TRIM32-/-小鼠均有較明顯的改善,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。7.皮層和海馬腦電圖記錄顯示細(xì)胞移植組TRIM32-/-小鼠較對照組TRIM32-/-小鼠在癇性放電頻率上有明顯的減少,與對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。(P0.05)。
[Abstract]:In vitro isolation of MGE precursor cells was performed to detect the effects of MGE precursor cell transplantation on the survival , migration and differentiation of TRIM32 - / - mice . The expression of GABA , GAD67 , PV , CR , NPY and NeuN in hippocampus , cortex and striatum was significantly improved in the hippocampus , cortex and striatum . The results showed that there was significant difference in GABA , GAD67 , PV , CR , NPY and NeuN in hippocampus .
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R749

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10 謝尚U，

本文編號：2024659