本文選題：Exendin-4 + Aβ31-35�。� 參考：《山西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)在腦內的異常積聚是阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)晝夜節(jié)律紊亂的病理基礎。研究發(fā)現,神經元對胞內鈣離子水平變化極度敏感,在過量沉積Aβ的雙轉基因小鼠腦區(qū)中研究發(fā)現Aβ積聚的區(qū)域鈣穩(wěn)態(tài)失衡。而神經系統(tǒng)正常功能的發(fā)揮需要鈣離子信號的參與。研究發(fā)現,周期性的鈣離子內流是維持SCN節(jié)律性的重要原因�？梢娾}離子信號與晝夜節(jié)律的形成與維持密切相關。per1作為晝夜系統(tǒng)輸出途徑的重要因子,在調控晝夜節(jié)律周期和維持晝夜節(jié)律穩(wěn)定中均發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現,per1基因的表達受鈣離子水平變化的影響,但由Aβ引發(fā)的鈣超載對Per1表達變化的影響目前仍未有報道。本研究將在細胞水平來探討Aβ31-35引起的鈣超載對Per1表達變化的影響。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)長效類似物Exendin-4的神經保護作用已有眾多研究報道,我們團隊前期研究發(fā)現Exendin-4在調節(jié)晝夜節(jié)律紊亂中具有重要作用,但可能的作用機制不清。本研究以海馬神經細胞系HT22為實驗對象,檢測不同處理組per1 mRNA在各CT時間點的表達變化情況,并在差異最顯著的CT時間檢測了PER1蛋白的相對表達量及其原位表達情況以及胞內鈣離子水平變化來進一步探討Aβ31-35對Per1表達變化影響及Exendin-4發(fā)揮神經保護作用的可能機制。第一部分:Aβ31-35導致HT22海馬神經細胞Per1異常表達目的:觀察Aβ31-35對HT22細胞存活率、形態(tài)及Per1表達變化的影響。方法:將培養(yǎng)細胞隨機分為對照組和aβ31-35組,以1%fbs饑餓1h來誘導細胞同步化(ct0);細胞同步化之后對照組用完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),而aβ31-35組則更換為終濃度為25μmaβ31-35繼續(xù)培養(yǎng);mtt法檢測細胞存活率;熒光倒置顯微鏡下仔細觀察實驗細胞形態(tài)并進行拍照;real-timepcr檢測不同ct時間per1mrna表達情況,并在差異性最顯著的ct時間采用westernblot的方法檢測per1蛋白相對表達量并用細胞免疫熒光染色的方法檢測了其原位表達情況。結果:經25μmaβ31-35作用24h后細胞存活率為(63±2.34%)顯著低于對照組(100±0.66%)且鏡下可見aβ31-35作用24h后與對照組相比細胞數量較少,胞體皺縮,變圓細胞增多且細胞形態(tài)出現異常;aβ31-35影響per1基因節(jié)律性表達且在ct16時,aβ31-35使per1mrna的表達(1.43±0.18)較對照組(0.65±0.11)異常升高(p0.05);進一步在該作用時間點檢測了per1蛋白的表達情況,與對照組(1.0±0.07)相比,經aβ31-35處理后per1蛋白相對表達量為(0.59±0.01);同樣經aβ31-35處理后與對照組(100.31±0.35%)相比aβ31-35使per1蛋白的熒光強度明顯降低(51.76±2.52%,p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。結論:aβ31-35使ht22細胞存活率降低,形態(tài)異常及per1表達異常。第二部分:exendin-4改善aβ31-35導致ht22海馬神經細胞per1異常表達目的:觀察exendin-4預處理1h后對aβ31-35造成的細胞存活率下降、形態(tài)改變及per1異常表達可能保護作用。方法:mtt法檢測細胞存活率;real-timepcr檢測exendin-4預處理1h后各ct時間per1mrna的表達情況,并在差異性最顯著的ct時間點采用westernblot的方法檢測exendin-4預處理后per1蛋白相對表達量并用細胞免疫熒光染色的方法檢測了其原位表達情況。結果:exendin-4預處理1h后能顯著提高aβ31-35導致的細胞存活率降低(77±2.68%)且鏡下觀察發(fā)現受損的細胞形態(tài)得到部分恢復;exendin-4預處理1h后能部分改善per1基因的異常表達且在ct16時能明顯降低aβ31-35導致的異常高表達per1基因水平(0.77±0.17,p0.05);經exendin-4預處理后與aβ31-35組相比per1蛋白的相對表達量明顯升高(0.80±0.03,p0.05);同樣其蛋白熒光強度值也顯著升高(81.18±4.98%,p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。結論:exendin-4能夠改善aβ31-35導致的ht22細胞存活率下降、形態(tài)異常及per1異常表達。第三部分:exendin-4改善aβ31-35誘導的ht22細胞per1異常表達中的鈣離子調節(jié)機制目的:探討aβ31-35導致per1異常表達的可能作用機制及exendin-4的保護作用。方法:Real-time PCR檢測Nimodipine預處理1 h后各CT時間per1基因的表達情況;在per1表達差異最顯著時間點,采用流式細胞術及鈣離子熒光染色的方法檢測該時間點細胞內的鈣離子水平變化并用細胞熒光強度值的大小來反映。結果:Nimodipine預處理1 h后對Aβ31-35造成的per1異常表達起到同Exendin-4類似的作用效果,在CT16,Nimodipine能明顯降低Aβ31-35導致的異常高表達per1基因水平(0.89±0.07,p0.05);進一步檢測該時間點細胞的熒光強度,結果發(fā)現:Aβ31-35組細胞熒光強度值為(584±31.35)較對照組(356±14.97)顯著增強;而經Exendin-4預處理后能明顯降低Aβ31-35導致的異常增強的熒光強度(360±26.81),該結果與Nimodipine預處理后降低(446±13.89)異常增強的熒光強度具有同等的效果。結論:Exendin-4通過拮抗鈣超載改善Aβ31-35導致HT22海馬神經細胞Per1異常表達。
[Abstract]:In this study , the effect of A尾31 - 35 on the expression of Per1 expression was studied . The results showed that the expression of per1 mRNA was closely related to the changes of the expression of Per1 . The results showed that the expression of per1 mRNA was closely related to the changes of the expression of Per1 . The expression of per1 gene was detected by MTT assay . The results showed that the expression of per1 gene was significantly increased after 1 h after pretreatment .
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

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1 趙學玲;王麗;李亞蒙;原媛;于倩倩;徐云云;李楊;曹秀麗;王曉暉;;Exendin-4通過拮抗鈣超載改善Aβ_(31-35)誘導的HT22海馬神經細胞per1基因異常表達[J];神經解剖學雜志;2016年06期

2 Christian Hlscher;;抗糖尿病藥物有助于治療阿爾茨海默病和帕金森病(英文)[J];生理學報;2014年05期

3 岳興華;劉曉杰;武美娜;陳晉原;祁金順;;淀粉樣β蛋白抑制大鼠海馬theta節(jié)律并致行為脫抑制和空間記憶損傷[J];生理學報;2014年02期

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本文編號：1898457