本文選題：Exendin-4 + Aβ31-35��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)在腦內(nèi)的異常積聚是阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)晝夜節(jié)律紊亂的病理基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)元對(duì)胞內(nèi)鈣離子水平變化極度敏感,在過(guò)量沉積Aβ的雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦區(qū)中研究發(fā)現(xiàn)Aβ積聚的區(qū)域鈣穩(wěn)態(tài)失衡。而神經(jīng)系統(tǒng)正常功能的發(fā)揮需要鈣離子信號(hào)的參與。研究發(fā)現(xiàn),周期性的鈣離子內(nèi)流是維持SCN節(jié)律性的重要原因�？梢娾}離子信號(hào)與晝夜節(jié)律的形成與維持密切相關(guān)。per1作為晝夜系統(tǒng)輸出途徑的重要因子,在調(diào)控晝夜節(jié)律周期和維持晝夜節(jié)律穩(wěn)定中均發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn),per1基因的表達(dá)受鈣離子水平變化的影響,但由Aβ引發(fā)的鈣超載對(duì)Per1表達(dá)變化的影響目前仍未有報(bào)道。本研究將在細(xì)胞水平來(lái)探討Aβ31-35引起的鈣超載對(duì)Per1表達(dá)變化的影響。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)長(zhǎng)效類似物Exendin-4的神經(jīng)保護(hù)作用已有眾多研究報(bào)道,我們團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)Exendin-4在調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律紊亂中具有重要作用,但可能的作用機(jī)制不清。本研究以海馬神經(jīng)細(xì)胞系HT22為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,檢測(cè)不同處理組per1 mRNA在各CT時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化情況,并在差異最顯著的CT時(shí)間檢測(cè)了PER1蛋白的相對(duì)表達(dá)量及其原位表達(dá)情況以及胞內(nèi)鈣離子水平變化來(lái)進(jìn)一步探討Aβ31-35對(duì)Per1表達(dá)變化影響及Exendin-4發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制。第一部分:Aβ31-35導(dǎo)致HT22海馬神經(jīng)細(xì)胞Per1異常表達(dá)目的:觀察Aβ31-35對(duì)HT22細(xì)胞存活率、形態(tài)及Per1表達(dá)變化的影響。方法:將培養(yǎng)細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和aβ31-35組,以1%fbs饑餓1h來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞同步化(ct0);細(xì)胞同步化之后對(duì)照組用完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),而aβ31-35組則更換為終濃度為25μmaβ31-35繼續(xù)培養(yǎng);mtt法檢測(cè)細(xì)胞存活率;熒光倒置顯微鏡下仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行拍照;real-timepcr檢測(cè)不同ct時(shí)間per1mrna表達(dá)情況,并在差異性最顯著的ct時(shí)間采用westernblot的方法檢測(cè)per1蛋白相對(duì)表達(dá)量并用細(xì)胞免疫熒光染色的方法檢測(cè)了其原位表達(dá)情況。結(jié)果:經(jīng)25μmaβ31-35作用24h后細(xì)胞存活率為(63±2.34%)顯著低于對(duì)照組(100±0.66%)且鏡下可見aβ31-35作用24h后與對(duì)照組相比細(xì)胞數(shù)量較少,胞體皺縮,變圓細(xì)胞增多且細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)異常;aβ31-35影響per1基因節(jié)律性表達(dá)且在ct16時(shí),aβ31-35使per1mrna的表達(dá)(1.43±0.18)較對(duì)照組(0.65±0.11)異常升高(p0.05);進(jìn)一步在該作用時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)了per1蛋白的表達(dá)情況,與對(duì)照組(1.0±0.07)相比,經(jīng)aβ31-35處理后per1蛋白相對(duì)表達(dá)量為(0.59±0.01);同樣經(jīng)aβ31-35處理后與對(duì)照組(100.31±0.35%)相比aβ31-35使per1蛋白的熒光強(qiáng)度明顯降低(51.76±2.52%,p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:aβ31-35使ht22細(xì)胞存活率降低,形態(tài)異常及per1表達(dá)異常。第二部分:exendin-4改善aβ31-35導(dǎo)致ht22海馬神經(jīng)細(xì)胞per1異常表達(dá)目的:觀察exendin-4預(yù)處理1h后對(duì)aβ31-35造成的細(xì)胞存活率下降、形態(tài)改變及per1異常表達(dá)可能保護(hù)作用。方法:mtt法檢測(cè)細(xì)胞存活率;real-timepcr檢測(cè)exendin-4預(yù)處理1h后各ct時(shí)間per1mrna的表達(dá)情況,并在差異性最顯著的ct時(shí)間點(diǎn)采用westernblot的方法檢測(cè)exendin-4預(yù)處理后per1蛋白相對(duì)表達(dá)量并用細(xì)胞免疫熒光染色的方法檢測(cè)了其原位表達(dá)情況。結(jié)果:exendin-4預(yù)處理1h后能顯著提高aβ31-35導(dǎo)致的細(xì)胞存活率降低(77±2.68%)且鏡下觀察發(fā)現(xiàn)受損的細(xì)胞形態(tài)得到部分恢復(fù);exendin-4預(yù)處理1h后能部分改善per1基因的異常表達(dá)且在ct16時(shí)能明顯降低aβ31-35導(dǎo)致的異常高表達(dá)per1基因水平(0.77±0.17,p0.05);經(jīng)exendin-4預(yù)處理后與aβ31-35組相比per1蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯升高(0.80±0.03,p0.05);同樣其蛋白熒光強(qiáng)度值也顯著升高(81.18±4.98%,p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:exendin-4能夠改善aβ31-35導(dǎo)致的ht22細(xì)胞存活率下降、形態(tài)異常及per1異常表達(dá)。第三部分:exendin-4改善aβ31-35誘導(dǎo)的ht22細(xì)胞per1異常表達(dá)中的鈣離子調(diào)節(jié)機(jī)制目的:探討aβ31-35導(dǎo)致per1異常表達(dá)的可能作用機(jī)制及exendin-4的保護(hù)作用。方法:Real-time PCR檢測(cè)Nimodipine預(yù)處理1 h后各CT時(shí)間per1基因的表達(dá)情況;在per1表達(dá)差異最顯著時(shí)間點(diǎn),采用流式細(xì)胞術(shù)及鈣離子熒光染色的方法檢測(cè)該時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平變化并用細(xì)胞熒光強(qiáng)度值的大小來(lái)反映。結(jié)果:Nimodipine預(yù)處理1 h后對(duì)Aβ31-35造成的per1異常表達(dá)起到同Exendin-4類似的作用效果,在CT16,Nimodipine能明顯降低Aβ31-35導(dǎo)致的異常高表達(dá)per1基因水平(0.89±0.07,p0.05);進(jìn)一步檢測(cè)該時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度,結(jié)果發(fā)現(xiàn):Aβ31-35組細(xì)胞熒光強(qiáng)度值為(584±31.35)較對(duì)照組(356±14.97)顯著增強(qiáng);而經(jīng)Exendin-4預(yù)處理后能明顯降低Aβ31-35導(dǎo)致的異常增強(qiáng)的熒光強(qiáng)度(360±26.81),該結(jié)果與Nimodipine預(yù)處理后降低(446±13.89)異常增強(qiáng)的熒光強(qiáng)度具有同等的效果。結(jié)論:Exendin-4通過(guò)拮抗鈣超載改善Aβ31-35導(dǎo)致HT22海馬神經(jīng)細(xì)胞Per1異常表達(dá)。
[Abstract]:In this study , the effect of A尾31 - 35 on the expression of Per1 expression was studied . The results showed that the expression of per1 mRNA was closely related to the changes of the expression of Per1 . The results showed that the expression of per1 mRNA was closely related to the changes of the expression of Per1 . The expression of per1 gene was detected by MTT assay . The results showed that the expression of per1 gene was significantly increased after 1 h after pretreatment .
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1898457