發(fā)布時間：2018-05-09 17:28

  本文選題：NQO1 + MPTP�。� 參考：《華東師范大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：在C57BL/6J小鼠上構(gòu)建穩(wěn)定的NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase1: EC1.6.99.2)轉(zhuǎn)基因小鼠種系,研究NQO1在小鼠各組織器官中的表達(dá)；以NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠為平臺,建立MPTP(1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氫吡啶)的帕金森病(Parkinson's Disease, PD)模型,研究高表達(dá)的NQO1是否對神經(jīng)元具有保護(hù)作用,從而進(jìn)一步探究帕金森病的發(fā)病機理與治療方法。 方法：分別用已有的NQO1表達(dá)量不同的轉(zhuǎn)基因小鼠Founder(Tg27、Tg39、Tg68)與WT小鼠進(jìn)行配種、繁育,對所有子代小鼠進(jìn)行標(biāo)記,獲得其DNA樣本,利用PCR和瓊脂糖凝膠電泳的方法進(jìn)行NQO1基因型的鑒定；跟蹤監(jiān)測三個種系的轉(zhuǎn)基因小鼠與WT小鼠的體重情況,比較之間的差別；將NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠雜合子進(jìn)行配種繁育,利用Real-Time PCR的方法篩選出NQO1純合子小鼠；利用蛋白印跡(Western Blot)的方法對不同種系小鼠和WT小鼠各組織器官中的NQO1含量進(jìn)行比較。分別以NOQ1+/-轉(zhuǎn)基因小鼠和WT小鼠為平臺,使用7次急性腹腔注射的給藥方式,建立MPTP的PD模型；利用NBT/Glycine法檢測不同組別的MPTP給藥組和對照組小鼠中各腦區(qū)中醌化蛋白含量的區(qū)別；免疫組化法觀察比較NOQ1+/-轉(zhuǎn)基因小鼠和WT小鼠MPTP給藥組和對照組間黑質(zhì)致密部(SNpc) TH神經(jīng)元的損傷情況;檢測比較了NOQ1+/-轉(zhuǎn)基因小鼠和WT小鼠組織中的GSSG和GSH、 NADPH和NADP的含量。 結(jié)果：保證繁育得到的每一只小鼠的信息(系別、性別、出生日期、基因型等)清晰,以便用于各類實驗。體重檢測沒有發(fā)現(xiàn)NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠與WT小鼠的生長曲線間存在顯著性差異(P0.05); NQOl在小鼠各組織器官中均有表達(dá),三個系的轉(zhuǎn)基因小鼠中NQO1的表達(dá)量間有所差異,但均明顯高于WT小鼠。成功地以NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠以及WT小鼠為平臺,建立了MPTP的PD模型；檢測得到,MPTP給藥組小鼠各腦區(qū)的醌化蛋白含量要顯著高于對照組小鼠(**PP0.01)；在MPTP給藥組中,NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠SNpc的TH神經(jīng)元細(xì)胞的受損程度要顯著高于WT小鼠(**P0.01)；NQ01小鼠腦內(nèi)的GSSG和GSH含量與WT小鼠沒有顯著區(qū)別(P0.05),但NADP的含量,NQO1與WT間存在顯著性差異(*P0.05)。 結(jié)論：對運用MPTP建立的PD模型,NQO1高表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠對PD的病理性癥狀未出現(xiàn)明顯緩解,反而加重了神經(jīng)元的受損程度。推測這種情況可能是由于NQO1小鼠體內(nèi)的氧化還原酶類平衡失調(diào)而導(dǎo)致的。
[Abstract]:Objective: to construct a stable strain of NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase1: EC1.6.99.2) transgenic mice in C57BL/6J mice, to study the expression of NQO1 in various tissues and organs of mice, and to establish a PD model of Parkinson's disease (PD) with MPTP1-methyl-4-phenyl-1-trihydropyridine (MPTP1-methyl-4-phenyl-1-trihydropyridine). To investigate the protective effect of high expression NQO1 on neurons and to further explore the pathogenesis and treatment of Parkinson's disease. Methods: transgenic mice with different NQO1 expression levels were used to breed and breed WT mice. All the offspring mice were labeled and their DNA samples were obtained. The NQO1 genotypes were identified by PCR and agarose gel electrophoresis. The body weight of transgenic mice and WT mice of three strains were monitored and the differences were compared. The heterozygotes of NQO1 transgenic mice were bred and the homozygote mice of NQO1 were screened by Real-Time PCR method. The contents of NQO1 in tissues and organs of different strain mice and WT mice were compared by Western blotting method. The PD model of MPTP was established on the platform of NOQ1 r-transgenic mice and WT mice by seven times of acute intraperitoneal injection. NBT/Glycine method was used to detect the difference of quinonated protein content in the brain regions of mice treated with different groups of MPTP and the control group. Immunohistochemical method was used to observe and compare the injury of th neurons in the substantia nigra densification region between the MPTP group and the control group of NOQ1 / 尾 -transgenic mice and WT mice, and the contents of GSSG, GSH, NADPH and NADP in the tissues of NOQ1 / 尾 -transgenic mice and WT mice were compared. Results: the information (gender, date of birth, genotype, etc.) of each mouse was clear for use in all kinds of experiments. There was no significant difference in growth curve between NQO1 transgenic mice and WT mice by body weight test. NQOl was expressed in all tissues and organs of mice, and the expression of NQO1 in three lines of transgenic mice was different. But both of them were significantly higher than those of WT mice. The PD model of MPTP was successfully established on the platform of NQO1 transgenic mice and WT mice. The content of quinone protein in the brain regions of mice treated with MPTP was significantly higher than that in the control group, and the damage degree of th neurons in SNpc of MPTP group was significantly higher than that in WT mice. The contents of GSSG and GSH were not significantly different from those of WT mice (P 0.05), but there was significant difference between NADP and WT. Conclusion: the pathological symptoms of PD in transgenic mice with high expression of NQO1 in PD model established by MPTP were not significantly alleviated, but the damage degree of neurons was aggravated. This may be due to the imbalance of redox enzymes in NQO1 mice.
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：Q78;R749

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本文編號：1866901