本文選題：阿爾茨海默病ApoE + N-甲基-D-門冬氨酸受體　； 參考：《福建醫(yī)科大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：【目的】ApoEε4作為晚發(fā)型家族性AD和散發(fā)性AD的易感基因已被國內(nèi)外學(xué)者普遍接受。本論文旨在原有的理論和實驗研究的基礎(chǔ)上，利用5xFAD小鼠和不同ApoE基因背景的轉(zhuǎn)基因小鼠研究內(nèi)源性ApoE異構(gòu)體介導(dǎo)腦內(nèi)NMDA受體功能失調(diào)在早期AD發(fā)病機制中的作用，并同時利用體內(nèi)和體外研究，從整體、細(xì)胞和分子等不同水平深入探討可能的機制。 【方法】1.SPF級2、4、6月齡雌性ApoE-TR/5XFAD小鼠，隨機分組，每組9～12只，分為ApoE2/5XFAD組、ApoE3/5XFAD組, ApoE4/5XFAD組，ApoEko/5XFAD組，應(yīng)用Y迷宮、Morris水迷宮等行為學(xué)實驗檢測ApoE基因型對5XFAD小鼠學(xué)習(xí)記憶影響的情況。通過免疫組化技術(shù)檢測海馬CA1區(qū)NMDAR1、NMDAR2B表達(dá)情況，并采用Westernblot方法，檢測突觸相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化。 2.通過體外原代培養(yǎng)P0海馬神經(jīng)元并應(yīng)用重組人ApoE2/3/4進(jìn)行干預(yù)，通過MTT實驗確立ApoE安全劑量范圍，分為ApoE2干預(yù)組（200nm）、ApoE3（200nm）干預(yù)組、ApoE4（200nm）干預(yù)組、溶媒對照組。通過流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦顯微鏡檢測海馬神經(jīng)元細(xì)胞鈣的情況，并借助Westernblot、激光共聚焦顯微鏡、免疫共沉淀等方法，從NMDA受體→Ca~(2+)→鈣調(diào)蛋白（CaMK-II、DAPK1）→CREB磷酸化→BDNF通路探討ApoE4對海馬神經(jīng)元鈣失衡的影響及可能的分子機制。 【結(jié)果】 1. ApoE4能明顯加劇5XFAD小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的下降。 2. ApoE4能明顯下調(diào)5XFAD小鼠海馬區(qū)突觸相關(guān)蛋白PSD-95、NMDA受體亞基、Drebin、p－CREB/CREB以及BDNF表達(dá)水平，并通過NMDAR/p－CaMKII/CREB途徑下調(diào)了BDNF的表達(dá)，從而加劇5XFAD小鼠認(rèn)知功能的損害。 3. ApoE4能導(dǎo)致海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣通道異常，并通過調(diào)節(jié)NMDA受體→Ca~(2+)→鈣調(diào)蛋白（CaMK-II、DAPK1）→CREB磷酸化→BDNF通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載，進(jìn)一步探討ApoE4經(jīng)由NMDA受體影響海馬神經(jīng)元鈣穩(wěn)態(tài)以及NMDA受體后信號的可能機制。 【結(jié)論】ApoE4可通過NMDAR/p－CaMKII/CREB途徑下調(diào)了BDNF的表達(dá)，影響突觸可塑性，進(jìn)而加劇5XFAD小鼠認(rèn)知功能障礙。ApoE4能導(dǎo)致海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣通道異常，引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載，并通過調(diào)節(jié)NMDA受體→Ca~(2+)→鈣調(diào)蛋白（CaMK-II、DAPK1）→CREB磷酸化→BDNF通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，，進(jìn)一步證實了ApoE4經(jīng)由NMDA受體影響海馬神經(jīng)元鈣穩(wěn)態(tài)以及NMDA受體后信號的機制。
[Abstract]:[objective] ApoE 蔚 4 as a susceptibility gene of late onset familial AD and sporadic AD has been widely accepted by scholars at home and abroad. On the basis of previous theoretical and experimental studies, this thesis aims to investigate the role of endogenous ApoE isomers in the pathogenesis of early AD by using 5xFAD mice and transgenic mice with different ApoE gene backgrounds. At the same time, in vivo and in vitro studies, from the whole, cell and molecular levels to explore the possible mechanisms. [methods] female ApoE-TR/5XFAD mice of 1.SPF grade 2 and 4 and 6 months of age were randomly divided into ApoE2/5XFAD group (ApoE3 / 5XFAD group) and ApoE4/5XFAD group (ApoEko / 5XFAD group). The influence of ApoE genotype on learning and memory of 5XFAD mice was investigated by using Y-maze Morris water maze and other behavioral experiments. The expression of NMDAR1 and NMDAR2B in hippocampal CA1 was detected by immunohistochemical technique, and the expression level of synaptophysin was detected by Westernblot method. 2. The P0 hippocampal neurons were cultured in vitro and intervened with recombinant human ApoE2/3/4. The safe dose range of ApoE was established by MTT experiment. The P0 hippocampal neurons were divided into two groups: ApoE2 intervention group (ApoE3 + 200nm) intervention group (ApoE4 + 200nm) intervention group and solvent control group (control group). Calcium in hippocampal neurons was detected by flow cytometry, laser confocal microscopy, Western blot, laser confocal microscopy and immunoprecipitation. The effect of ApoE4 on calcium imbalance in hippocampal neurons and its possible molecular mechanism were investigated by NMDA receptor Ca~(2) calmodulin (CaMK-IIP DAPK1) and CREB phosphorylated BDNF pathway. [results] 1. ApoE4 significantly increased the ability of learning and memory in 5XFAD mice. 2. ApoE4 could significantly down-regulate the expression of synaptic associated protein (PSD-95) and BDNF in the hippocampus of 5XFAD mice. It also down-regulated the expression of BDNF through the NMDAR/p-CaMKII/CREB pathway, thus exacerbating the impairment of cognitive function in 5XFAD mice. 3. ApoE4 can induce abnormal calcium channel in hippocampal neurons and induce intracellular calcium overload by regulating the expression of CREB phosphorylation and BDNF pathway related proteins by regulating NMDA receptor Ca~(2) calmodulin (CaMK-IIP DAPK1). To explore the possible mechanism of ApoE4 affecting calcium homeostasis and postreceptor signal of NMDA receptor in hippocampal neurons via NMDA receptor. [conclusion] ApoE4 can down-regulate the expression of BDNF through the NMDAR/p-CaMKII/CREB pathway, affect synaptic plasticity, and then aggravate the cognitive dysfunction of 5XFAD mice. ApoE4 can lead to abnormal calcium channels in hippocampal neurons and induce intracellular calcium overload. By regulating the expression level of CREB phosphorylated BDNF pathway associated with calmodulin (CaMK-IIP DAPK1) of NMDA receptor Ca~(2, the mechanism of ApoE4 affecting calcium homeostasis and NMDA postreceptor signal in hippocampal neurons via NMDA receptor was further demonstrated.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1846719