本文選題：MRTF-A　切入點：海馬　出處：《武漢科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的本研究通過構(gòu)建包裝MRTF-A的慢病毒載體,并微量注射到Tg2576小鼠海馬區(qū),探討MRTF-A對Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶功能以及對海馬神經(jīng)細胞凋亡和自噬的影響及機制。方法第一部分MRTF-A對Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶功能影響研究1.Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶功能與內(nèi)源性MRTF-A水平相關(guān)性研究分別選取野生型C57BL小鼠和Tg2576小鼠各10只,適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后以Morris水迷宮和條件恐懼實驗進行動物行為學(xué)測評,隨后取新鮮海馬組織,分別以Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測MRTF-A的m RNA和蛋白表達。2.過表達MRTF-A對Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響構(gòu)建攜帶小鼠MRTF-A(滴度為2×108TU/ml的慢病毒載體),將Tg2576小鼠隨機分為6組,每組6只,分別于側(cè)腦室注射慢病毒液1μl、2μl、4μl,另設(shè)一組注射同等體積的陰性慢病毒的作為對照組。以側(cè)腦室注射日為0天,在注射后第7天取小鼠新鮮腦組織做石蠟切片,用激光共聚焦顯微鏡觀察不同劑量的慢病毒感染小鼠海馬區(qū)基因的表達。根據(jù)表達結(jié)果選取最適劑量行側(cè)腦室注射,分別檢測側(cè)腦室注射慢病毒后第7、14、21、28天后海馬區(qū)的MRTF-A濃度,同時以條件恐懼實驗和曠場實驗測定其學(xué)習(xí)記憶功能。第二部分MRTF-A對Tg2576小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡及自噬的影響及機制研究1.過表達MRTF-A對Tg2576小鼠腦組織神經(jīng)元凋亡和自噬的影響實驗小鼠隨機分為對照組、模型組、實驗組,對照組為野生型C57BL小鼠,模型組和實驗組采用Tg2576小鼠。對照組和模型組側(cè)腦室注射4μl的陰性慢病毒,實驗組注射4μl的MRTF-A慢病毒液。注射后第28天取腦組織石蠟切片做HE染色觀察腦細胞形態(tài)學(xué)變化,透射電鏡觀察海馬區(qū)自噬小體的生成。2.過表達MRTF-A對Tg2576小鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)元自噬及凋亡相關(guān)基因的影響分組及動物處理同第三部分,側(cè)腦室注射慢病毒后第28天取新鮮海馬組織,Real-time PCR和Western blot技術(shù)分別檢測凋亡相關(guān)基因Bcl-2、mcl-1的m RNA和蛋白表達,自噬相關(guān)基因Atg5、Beclin1、Atg7的m RNA表達、及Beclin1和LC3的蛋白表達。結(jié)果1.MRTF-A對Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶功能影響研究:(1)Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶能力缺陷及海馬MRTF-A表達水平:與同周齡的野生型C57BL/6J小鼠相比,Tg2576小鼠在Morris水迷宮中到達平臺的時間延長,條件恐懼測試中Tg2576小鼠恐懼不動時間百分比低于野生型C57BL小鼠(P0.01)。取海馬組織檢測MRTF-A表達,發(fā)現(xiàn)Tg2576小鼠內(nèi)源性MRTF-A水平低于野生型小鼠,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。(2)過表達MRTF-A可緩解Tg2576小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙:過表達MRTF-A可緩解Tg2576小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙:側(cè)腦室注射慢病毒1μl熒光表達較弱,2μl和4μl劑量下可見明顯的熒光表達,4μl劑量組熒光表達水平明顯高于其它組。故選取4μl作為進一步研究海馬注射劑量。4μl MRTF-A慢病毒小鼠腦內(nèi)注射后,與陰性對照組相比,慢病毒注射組MRTF-A表達水平在注射后第7天達到最高,到第28天緩慢降低,但仍然高于同期野生型C57BL小鼠腦內(nèi)的表達水平。慢病毒側(cè)腦室注射一周后,小鼠每隔7天進行一次曠場實驗和環(huán)境條件恐懼記憶檢測發(fā)現(xiàn),過表達MRTF-A之后小鼠曠場實驗運動總距離沒有明顯變化,第28天時中央格停留時間縮短,而第28天后Tg2576小鼠條件恐懼實驗中恐懼不動時間百分比相比于對照組明顯提高。2.過表達MRTF-A對Tg2576小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡及自噬的影響及機制研究:(1)將4μl的慢病毒注射入Tg2576小鼠側(cè)腦室后第28天行海馬組織HE染色發(fā)現(xiàn),過表達MRTF-A能明顯減輕Tg2576小鼠海馬神經(jīng)細胞缺失及細胞核固縮情況;透射電鏡觀察海馬區(qū)自噬小體生成情況發(fā)現(xiàn),LV-MRTF-A處理后Tg2576小鼠海馬區(qū)可見發(fā)現(xiàn)有雙層膜環(huán)繞形成的自噬泡。(2)過表達MRTF-A上調(diào)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、mcl-1的m RNA和蛋白表達,同時自噬相關(guān)基因Atg5、Atg6、Atg7的m RNA表達升高,LC3Ⅰ蛋白向LC3Ⅱ蛋白轉(zhuǎn)化增多,Beclin1蛋白表達上調(diào)。結(jié)論隨著Tg2576小鼠學(xué)習(xí)記憶能力缺陷的發(fā)生,其海馬區(qū)MRTF-A的表達處于低水平狀態(tài)。腦組織過表達MRTF-A可改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。其機制可能通過MRTF-A上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2、mcl-1和自噬相關(guān)基因Atg5、Atg6、Atg7的表達,從而抑制Tg2576小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡,上調(diào)神經(jīng)元自噬水平有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李震中，張?zhí)K明，，白欣立;神經(jīng)元的凋亡和生存與神經(jīng)疾病[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;1996年03期

2 史東葵;癲癇發(fā)作對腦神經(jīng)元凋亡的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);1997年04期

3 趙爽;黃瑞雅;;癲癇與神經(jīng)元凋亡調(diào)控[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年06期

4 姚瑜,俞惠民,余鐘聲;一氧化氮合酶抑制劑對大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)元凋亡的影響[J];科技通報;2005年06期

5 倪錦;神經(jīng)元與凋亡[J];四川生理科學(xué)雜志;2002年01期

6 賈棟,高國棟;細胞器與缺血性神經(jīng)元凋亡[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2004年03期

7 李國風(fēng);李蘭芳;張勤增;解麗君;姜紅;李立萍;郝娜;王薇;張建新;;硫化氫對局灶性腦缺血損傷大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡的影響[J];中國病理生理雜志;2012年11期

8 鄒浩軍;林莉莉;孫達;;奧美拉唑激活乙醛脫氫酶2的抗神經(jīng)元凋亡作用研究[J];中國全科醫(yī)學(xué);2014年06期

9 陳申軍,徐志偉;缺血再灌注誘發(fā)神經(jīng)元凋亡的機制和影響因素[J];細胞生物學(xué)雜志;2002年01期

10 陳應(yīng)柱,顧永健;一氧化氮與缺血缺氧性腦損傷時的神經(jīng)元凋亡[J];國外醫(yī)學(xué)腦血管疾病分冊;2002年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 吳宜娟;徐安定;苗海鋒;;一氧化氮在內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡中的作用[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

2 顧瑜蓉;張重華;李華偉;;嗅感覺神經(jīng)元凋亡的實驗研究(摘要)[A];第三屆第四次全國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會論文匯編[C];2002年

3 趙麗;張策;;第Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動劑對AβP31-35誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡的保護作用[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

4 彭雷;高青;張靜;暴麗華;李貴寶;董海曼;馮曉雯;岳慶偉;孫晉浩;高英茂;;地佐環(huán)平誘發(fā)原代培養(yǎng)腦皮層神經(jīng)元凋亡的實驗研究[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

5 馬小亞;武冬梅;譚婷;王美納;;L-四氫巴馬汀對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用及對神經(jīng)元凋亡的影響[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

6 王宏濤;孫建寧;徐秋萍;陳國強;;異亞丙級莽草酸對局灶性缺血再灌注損傷致大鼠神經(jīng)元凋亡的保護作用[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

7 劉永紅;萬琪;;小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元缺血/再灌注后胞漿內(nèi)游離鈣離子和神經(jīng)元凋亡的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

8 黎明濤;;神經(jīng)元凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控[A];中國病理生理學(xué)會受體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)專業(yè)委員會暨消化專業(yè)委員會聯(lián)合學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

9 任惠明;;腺苷A2A受體與神經(jīng)元凋亡的研究進展[A];2013浙江省物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨第八屆浙江省康復(fù)醫(yī)學(xué)發(fā)展論壇論文集[C];2013年

10 陳興泳;唐榮華;唐洲平;孟祥武;雷惠新;汪銀洲;謝雪微;王偉;;膠原蛋白-硫酸肝素生物支架對豬神經(jīng)元凋亡的影響[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐詩;記憶相關(guān)基因KIBRA抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡研究[D];山東大學(xué);2017年

2 阿馬爾阿巴達尼(Ammar AL-baadani);PCMT1/MST1通路調(diào)控蛛網(wǎng)膜下腔出血后神經(jīng)元凋亡的機制研究[D];浙江大學(xué);2017年

3 周孟華;脂筏成份調(diào)節(jié)Kv2.1的機制及在凋亡中作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 楊俊卿;5-Lipoxygenase和Cyclooxygenase-2參與鋁過負荷致神經(jīng)元損傷過程的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

5 錢巍;APC-Cdh1在體內(nèi)外神經(jīng)元缺氧損傷中的作用[D];華中科技大學(xué);2010年

6 譚軍;星形膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)液對缺氧/復(fù)氧損傷神經(jīng)元的保護作用及其機制探討[D];鄭州大學(xué);2013年

7 張s

本文編號：1688068