本文選題：脂肪間充質(zhì)干細胞　切入點：慢病毒　出處：《中南大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是威脅老年人生活質(zhì)量與晚年生活的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變之一,其發(fā)病機制不明,目前尚無有效的治療方法。干細胞移植是阿爾茨海默病治療方法之一,而脂肪間充質(zhì)干細胞(adipose derived mesenchymal stem cells, ADSCs)由于其來源廣泛、創(chuàng)傷小等優(yōu)勢被國內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。但由于阿爾茨海默病通常高發(fā)于老年人中,所以自體干細胞將面臨由于生理性衰老而導(dǎo)致的功能衰退,治療效果減低的問題。p16ink4a基因作為一種抑癌基因,在衰老干細胞中過度表達,并且在體外培養(yǎng)的衰老／QADSCs中也表達上調(diào)。因此,利用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾(RNA interference, RNAi)技術(shù)可望阻斷衰老ADSCs中的p16ink4a基因,緩解干細胞功能衰退,從而提高其治療阿爾茨海默病的治療效果。 目的： 利用慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)阻斷老齡ADSCs中p16ink4a基因表達,觀察p16ink4a基因沉默后,老齡ADSCs增殖能力、衰老情況以及向神經(jīng)細胞定向分化能力的變化。 方法： 取SD大鼠的腹股溝和腹膜后脂肪,分離體外培養(yǎng)青年大鼠及老年大鼠ADSCs,流式細胞術(shù)鑒定表面分子標(biāo)志物。將ADSCs分為以下四組：經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染的老齡ADSCs(老齡ADSCs+慢病毒9934-1),經(jīng)陰性對照病毒轉(zhuǎn)染的老齡ADSCs(老齡ADSCs+陰性對照病毒CONO49),未經(jīng)任何處理的老齡ADSCs(老齡ADSCs),加入磷酸緩沖鹽溶液(PBS)的老齡ADSCs(老齡ADSCs+PBS)。Western blot、realtime PCR測定四組ADSCs中p16ink4a基因的表達差異。然后以青年ADSCs組作為對照,MTT比色法描繪生長曲線探查五組ADSCs增殖能力差別。對五組細胞進行衰老染色以觀察干細胞衰老情況。過兩步誘導(dǎo)法誘導(dǎo)ADSC向神經(jīng)細胞方向分化,免疫熒光法檢測分化后細胞Nestin的表達情況,比較五組細胞分化能力的區(qū)別。 結(jié)果： 1.從大鼠的脂肪組織中可成功提取老齡及青年ADSCs,并穩(wěn)定增殖傳代。提取的ADSCs強烈表達CD29. CD90,低表達CD1lb。 2.與其他三組老齡ADSCs相比,老齡ADSCs+慢病毒9934-1組中p16ink4a基因表達明顯降低(P0.05)。而老齡ADSCs+陰性對照病毒CONO49組,老齡ADSCs組及老齡ADSCs+PBS組之間p16ink4a基因表達無顯著性差異。 3.與其他三組老齡ADSCs相比,老齡ADSCs+慢病毒9934-1組生長能力及誘導(dǎo)分化后細胞Nestin的表達情況明顯提高(P0.05),但低于青年ADSCs組(P0.05)。而老齡ADSCs+陰性對照病毒CONO49組,老齡ADSCs組及老齡ADSCs+PBS組之間生長能力及誘導(dǎo)分化后細胞Nestin的表達情況無顯著性差異。 4.與其他三組老齡ADSCs相比,老齡ADSCs+慢病毒9934-1組衰老細胞比例明顯降低(P0.05),但高于青年ADSCs組(P0.05)。而老齡ADSCs+陰性對照病毒CONO49組,老齡ADSCs組及老齡ADSCs+PBS組之間衰老細胞比例無顯著性差異。 結(jié)論： 1.利用慢病毒轉(zhuǎn)染可成功抑制老齡ADSCs中的p16ink4a基因表達。 2. pl6ink4a基因沉默后的老齡ADSCs在一定程度上延緩了老齡ADSCs的衰老程度,改善了其增殖能力和向神經(jīng)細胞的定向分化能力。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 童坦君 ,張宗玉;細胞衰老主導(dǎo)基因p16的作用機理及其負調(diào)控[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2002年01期

2 楊立業(yè);鄭佳坤;汪朝陽;林小聰;李文玉;許曼丹;;人脂肪組織來源的基質(zhì)細胞分化為神經(jīng)元樣細胞的體外研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2006年08期

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本文編號：1670486