本文選題：LINGO-1　切入點：BACE1　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：阿爾茨海默病（Alzheimer’s diseases，AD）是老年人常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，是癡呆最常見的病因。流行病學(xué)調(diào)查顯示，44%的AD患者伴發(fā)有睡眠和（或）晝夜節(jié)律紊亂�，F(xiàn)在也有越來越多的實驗證明，睡眠障礙可能是阿爾茨海默病的重要誘因之一，kang等研究發(fā)現(xiàn)，腦組織液中Aβ濃度波動具有晝夜節(jié)律性，對APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠慢性睡眠剝奪后，其腦組織中Aβ的沉積顯著增加。目前觀點認(rèn)為這可能與睡眠障礙時神經(jīng)元活性、氧化應(yīng)激及褪黑素水平的改變相關(guān)，然而具體機制尚不明確。 LINGO-1(LRR and Ig domain-containing, Nogo Receptor interacting protein-1)是由15號染色體(15q24.3, GI:15029689)編碼，特異性表達(dá)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的跨膜糖蛋白，可負(fù)性調(diào)節(jié)神經(jīng)元的存活、軸突再生及髓鞘化，因而與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)、帕金森病、特發(fā)性震顫及神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變密切相關(guān)。目前有觀點研究認(rèn)為，LINGO-1也參與調(diào)節(jié)了AD的病理過程，LINGO-1能夠與APP相互結(jié)合，通過促進(jìn)β-分泌酶的剪切作用調(diào)節(jié)APP的代謝，其機制仍未闡明，作者認(rèn)為，LINGO-1可能促進(jìn)了β分泌酶的活性或表達(dá)，也可能是抑制了α-分泌酶的作用。 然而，LINGO-1的調(diào)控機制尚不明確，其表達(dá)增高見于PD患者、PD動物模型、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷模型及攜帶lingo1rs9652490等位基因的人群，神經(jīng)元的損傷和死亡也會引起LINGO-1表達(dá)的增加，據(jù)此，Zhou等認(rèn)為，LINGO-1的表達(dá)變化可能與氧化應(yīng)激及基因突變相關(guān)。Trifunovski等則證實神經(jīng)元活性增加可以促進(jìn)LINGO-1表達(dá)。而睡眠/覺醒狀態(tài)與神經(jīng)元活性密切相關(guān)，有研究顯示，睡眠剝奪可導(dǎo)致機體的默認(rèn)模式網(wǎng)絡(luò)功能持續(xù)激活。以上這些證據(jù)提示，睡眠/覺醒可能會通過影響神經(jīng)元活性影響LINGO-1的表達(dá)。LINGO-1可能參與介導(dǎo)了睡眠剝奪對APP代謝的調(diào)節(jié)。 本課題研究包括兩個部分。第一部分我們通過片段睡眠剝奪模型和Western blot技術(shù)研究了睡眠/覺醒對LINGO-1表達(dá)的影響，第二部分并利用RNA干擾及免疫共沉淀等方法研究LINGO-1是否參與介導(dǎo)睡眠剝對APP代謝的調(diào)節(jié)，并對其機制進(jìn)行探索。 本研究的主要結(jié)果如下： 1片段睡眠后ICR小鼠不同腦區(qū)LINGO-1表達(dá)上調(diào)，且與片段睡眠剝奪時間的長度相關(guān)。ICR小鼠片段睡眠剝奪三天后，分別取額葉、顳葉和下丘腦。采用Western blot方法檢測，與對照組相比，上述腦區(qū)LINGO-1表達(dá)均有所上調(diào)。對ICR小鼠分別給予1、3、5、7天的睡眠剝奪，然后檢測不同時長睡眠剝奪后LINGO-1表達(dá)的變化趨勢，發(fā)現(xiàn)LINGO-1的表達(dá)與片段睡眠剝奪的時長呈正相關(guān)。 2LINGO-1的表達(dá)具有晝夜節(jié)律性。用Western blot分別檢測0:00、4:00、8：00、12:00、16:00和20:00顳葉LINGO-1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)4:00LINGO-1的表達(dá)明顯高于其他時間點。 3片段睡眠剝奪后小鼠顳葉BACE1表達(dá)的增加。ICR小鼠片段睡眠剝奪三天后，取顳葉腦組織用Western blot檢測BACE1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)BACE1的表達(dá)明顯增高。 4LINGO-1參與調(diào)控BACE1的表達(dá)。用lingo-1RNA干擾慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元，收集細(xì)胞裂解液，用Western blot檢測BACE1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性干擾LINGO-1的表達(dá)后，BACE1的表達(dá)下調(diào)。 5LINGO-1與BACE1在體內(nèi)不直接結(jié)合。取ICR小鼠腦組織裂液，用免疫共沉淀技術(shù)分別用anti-BACE1antibody和anti-LINGO-1antibody從正反向驗證，發(fā)現(xiàn)二者在體內(nèi)不存在直接的結(jié)合。 6片段睡眠剝奪可導(dǎo)致GSK3β磷酸化水平下調(diào)。ICR小鼠片段睡眠剝奪三天后，取顳葉腦組織用Western blot檢測p-GSK3β和total-GSK3β的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，GSK3β磷酸化水平下調(diào)。 7LINGO-1參與調(diào)控GSK3β的磷酸化水平。用lingo-1RNA干擾慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元，收集細(xì)胞裂解液，用Western blot檢測的表達(dá)p-GSK3β和total-GSK3β的表達(dá)，，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性干擾LINGO-1的表達(dá)后，GSK3β磷酸化水平升高。 8LINGO-1與GSK-3β在體內(nèi)相互結(jié)合。取ICR小鼠腦組織裂解液，用免疫共沉淀技術(shù)證實，LINGO-1與GSK3β在體內(nèi)相互結(jié)合。 綜上所述，本實驗研究發(fā)現(xiàn)，LINGO-1的表達(dá)受睡眠/覺醒的調(diào)控，LINGO-1可通過調(diào)節(jié)GSK3β的磷酸化水平來間接調(diào)節(jié)BACE1的表達(dá)，從而參與介導(dǎo)睡眠剝奪對APP代謝的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Alzheimer's disease (Alzheimer 's diseases, AD) is a neurodegenerative disease common in the elderly, is the most common cause of dementia. Epidemiological investigation showed that 44% of patients with AD associated with sleep and circadian rhythm disorder (or). Now there are more and more experiments showed that sleep disorders may be one of the important causes of Alzheimer's disease disease, Kang found that fluctuations in the concentration of brain tissue in A beta liquid with circadian rhythm, chronic sleep deprivation on APPswe/PS1dE9 transgenic mice after deposition in the brain tissues of A beta increased significantly. At present the view that this may be a sleep disorder related neuronal activity, oxidative stress and melatonin levels change, but specific the mechanism is not clear.
LINGO-1 (LRR and Ig domain-containing Nogo Receptor interacting protein-1) is composed of 15 chromosomes (15q24.3, GI:15029689) encoding, the specific expression of transmembrane glycoprotein in the central nervous system, can negatively regulate neuronal survival, axonal regeneration and myelination, and nervous system development and nervous system damage, repair, Parkinson's disease. Essential tremor and nervous system demyelinating lesions are closely related. It is research that LINGO-1 is also involved in the regulation of the pathological process of AD, LINGO-1 can combine with APP, APP regulated by shear promotes beta secretase enzyme metabolism, its mechanism is still unclear, the author thinks that LINGO-1 may promote beta secretase the activity or expression may be inhibited alpha secretase.
However, the regulation mechanism of LINGO-1 is not clear, its expression is increased in patients with PD, the animal model of PD, model of central nervous system injury and lingo1rs9652490 allele groups, neuronal damage and death will lead to increased expression of LINGO-1 in Zhou think that the expression of LINGO-1 may be associated with oxidative stress and gene related to the mutation of.Trifunovski are confirmed that neuronal activity can increase the expression of LINGO-1. And the sleep / wake state and neuronal activity are closely related, studies have shown that sleep deprivation can lead to the body of the default mode network function. These evidences suggest that sustained activation of the above, the sleep / wake may affect.LINGO-1 expression by neuronal activity may be involved in the effect of LINGO-1 by sleep deprivation, regulate the metabolism of APP.
This thesis consists of two parts. The first part of our influence by fragment sleep deprivation model and Western blot technology to study the sleep / wake on the expression of LINGO-1, whether the second part is the research and use of RNA interference and immunoprecipitation methods involved in LINGO-1 mediated regulation of APP metabolism, sleep deprivation, and the mechanism was explored.
The main results of this study are as follows:
1 fragments of ICR mice after sleep in different brain regions in LINGO-1 expression, and fragments of sleep deprivation time correlated with the length of.ICR fragment of mice were taken after three days of sleep deprivation, frontal lobe, temporal lobe and hypothalamus. Using Western blot detection method, compared with the control group, the expression of LINGO-1 in the brain were increased in ICR mice were given. 1,3,5,7 days of sleep deprivation, the change trend of the expression of LINGO-1 and then detected long after sleep deprivation, found the expression of LINGO-1 and the length of fragments of sleep deprivation was positively correlated.
The expression of 2LINGO-1 was circadian. Western blot was used to detect 0:00,4:00,8:00,12:00,16:00 and LINGO-1 expression in temporal lobe at 20:00, respectively. It was found that the expression of 4:00LINGO-1 was significantly higher than that of other time points.
The expression of BACE1 in temporal lobe increased after 3 sleep deprivation. After three days of sleep deprivation in.ICR mice, the expression of BACE1 was detected by Western blot in temporal lobe brain tissue, and the expression of BACE1 increased significantly.
4LINGO-1 was involved in the regulation of BACE1 expression. Lingo-1RNA interference was used to transfect neurons, and the cell lysate was collected. The expression of BACE1 was detected by Western blot. The expression of BACE1 was down regulated after the expression of endogenous interfering LINGO-1.
5LINGO-1 and BACE1 did not directly bind to the body. ICR mice brain tissue fluid was extracted by positive co immunization with anti-BACE1antibody and anti-LINGO-1antibody from the positive and negative sides. It was found that there was no direct combination between the two groups in vivo.
6 fragment sleep deprivation can lead to the phosphorylation level of GSK3 beta. After three days of sleep deprivation in.ICR mice, Western blot was used to detect the expression of p-GSK3 beta and total-GSK3 beta in temporal lobe brain tissue. It was found that the level of GSK3 beta phosphorylation was down regulated compared with the control group.
7LINGO-1 is involved in regulating the phosphorylation level of GSK3 beta. Lingo-1RNA interference with lentivirus transfected neurons, collecting cell lysate, and using Western blot to detect the expression of p-GSK3 beta and total-GSK3 beta, we found that the expression of GSK3 beta increased after the interference of LINGO-1 expression.
8LINGO-1 and GSK-3 beta were combined in the body. The brain tissue lysate of ICR mice was taken. It was confirmed by the immunoprecipitation technique that LINGO-1 and GSK3 beta were combined with each other in the body.
To sum up, we found that the expression of LINGO-1 is regulated by sleep / wakefulness. LINGO-1 can indirectly regulate the expression of BACE1 by regulating the phosphorylation level of GSK3 beta, thereby participating in the regulation of APP metabolism by sleep deprivation.

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 歐陽儒穎,季紅光,蔡懿靈,阮芳銘,王海明;補充支鏈氨基酸對睡眠剝奪大鼠行為和血清游離脂肪酸水平的影響[J];氨基酸和生物資源;2003年04期

2 Avery Tung,Bernard M.Bergmann,Stacy Herrera,Dingcai Cao,Wallace B.Mendelson,許鵬程,曾因明;異丙酚促進(jìn)睡眠剝奪恢復(fù)[J];國外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊;2004年03期

3 Manganotti P;Bongiovanni L.G;Fuggetta G. ;王鵬;;睡眠剝奪對青少年肌陣攣性癲癇患者皮質(zhì)興奮性的影響:經(jīng)顱磁刺激和EEG的聯(lián)合研究[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊);2006年05期

4 張舒,吳興裕;睡眠剝奪對工作能力影響的防護(hù)研究進(jìn)展[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1998年01期

5 王曉東,宿長軍,李柱一,王者晉,饒志仁;不同時間點睡眠剝奪與星形膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)系[J];中國臨床康復(fù);2004年07期

6 黃裕新,王景杰,秦明,楊琦,王旭霞,劉震雄;睡眠剝奪對大鼠胃運動及其神經(jīng)中樞的影響[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2005年02期

7 張舒,吳興裕,韓厲萍,李學(xué)義,姚永杰;睡眠剝奪48h對追蹤作業(yè)工效、視反應(yīng)能力的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1998年05期

8 章茜,閻艷琴,喬鵬,袁義強,王書春,張朝,王雨若;部分睡眠剝奪對大鼠免疫功能的影響[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年05期

9 李求實,王升旭;刺五加總甙穴位貼敷抗睡眠剝奪作用的實驗研究[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

10 劉長云,許恒,周建光,錢萍萍,季紅光,沈慧,王海明;睡眠剝奪對大鼠腦神經(jīng)元型一氧化氮合酶mRNA表達(dá)的影響[J];中國公共衛(wèi)生;2003年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 宋國萍;苗丹民;皇甫恩;陳足懷;馮學(xué)文;;睡眠剝奪對大鼠學(xué)習(xí)和行為的影響[A];新世紀(jì) 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年

2 趙正卿;黃流清;吳惠涓;李雁鵬;向正華;趙忠新;;神經(jīng)肽S可改善REM睡眠剝奪導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能損害[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 李寧;郁洪強;王明時;劉海嬰;;睡眠剝奪影響大腦功能區(qū)狀態(tài)的非線性評價[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2008年年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程與臨床論壇論文集[C];2008年

4 彭華;賀斌;李雁鵬;趙忠新;黃流清;張琳;林巧;李振;;大鼠REM期睡眠剝奪及恢復(fù)后MMP-9對學(xué)習(xí)記憶的影響[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

5 朱紅蓮;趙忠新;;睡眠剝奪與一氧化氮合酶及學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

6 張紅菊;趙忠新;;REM睡眠剝奪后GRP78、GRP94在大鼠皮質(zhì)、海馬及延髓表達(dá)的研究[A];2006年中國睡眠研究會第四屆學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2006年

7 王貴平;趙忠新;莊建華;黃流清;吳惠涓;張琳;彭華;由振東;;REM睡眠剝奪與恢復(fù)對大鼠空間記憶及海馬CaN的影響[A];第三屆中國睡眠醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

8 張紅菊;索愛琴;趙忠新;;REM睡眠剝奪誘導(dǎo)大鼠皮質(zhì)、海馬及延髓的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡基因的表達(dá)[A];2006年中國睡眠研究會第四屆學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2006年

9 趙忠新;;睡眠剝奪對認(rèn)知功能影響及其機制的研究[A];2006年中國睡眠研究會第四屆學(xué)術(shù)年會知識更新講座[C];2006年

10 林巧;趙忠新;李雁鵬;彭華;李振;;REM期睡眠剝奪對大鼠大腦皮質(zhì)CHOP蛋白表達(dá)的影響及藥物干預(yù)[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 ;APP榮獲“中華慈善獎”[N];消費日報;2008年

2 本報記者 侯繼勇;馬云玩手機 云應(yīng)用揚棄App模式[N];21世紀(jì)經(jīng)濟報道;2011年

3 劉長云;睡眠剝奪影響人體免疫功能[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

4 文軒;APP盤點“承諾”兌現(xiàn)情況[N];消費日報;2009年

5 ;APP廣西林漿紙項目傾力環(huán)保[N];消費日報;2009年

6 鄭南初;重慶宣傳戳關(guān)注“AAPP”[N];中國郵政報;2002年

7 李文;APP水泥工作組第七次會議在韓國首爾召開[N];中國建材報;2009年

8 記者段華;APP(中國)積極踐行社會責(zé)任[N];中國綠色時報;2010年

9 商報記者 姜銳剛;《大家都有病》:APP營銷以創(chuàng)意超越“軟廣告”[N];中國圖書商報;2011年

10 特約記者 金煜純　曾少強;APP林業(yè)實現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展[N];中國貿(mào)易報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 盛柏楊;APP的異常剪切導(dǎo)致神經(jīng)損傷的機理研究[D];清華大學(xué);2009年

2 薛衛(wèi)國;電針對APP轉(zhuǎn)基因鼠腦Aβ水平及腦微血管病變影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

3 樊雙義;連續(xù)作業(yè)與睡眠剝奪對認(rèn)知功能的影響及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 危立飛;丁內(nèi)酯衍生物3BDO通過降低腦內(nèi)Aβ含量改善了APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠的認(rèn)知障礙[D];山東大學(xué);2012年

5 蔣玲;APP基因調(diào)控AML1/ETO~+白血病細(xì)胞遷移及其分子機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

6 竇偉;睡眠剝奪對大鼠不同腦區(qū)PrP~C表達(dá)的影響及PrP~C在睡眠剝奪誘導(dǎo)的認(rèn)知損害中可能的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

7 林楠;雷公藤氯內(nèi)酯醇(T_4)通過改善突觸可塑性和APP代謝減輕SAMP8小鼠認(rèn)知功能損害[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

8 張忠;益智湯對APP695轉(zhuǎn)基因小鼠的治療作用及其機理研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

9 張鵬;淀粉樣前體蛋白可溶性α片段與睡眠的相關(guān)性及潛在的認(rèn)知保護(hù)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

10 王貴平;REM睡眠剝奪對大鼠空間記憶、海馬CaN的影響及FK506的干預(yù)作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉振宇;LINGO-1參與介導(dǎo)睡眠剝奪對APP剪切的調(diào)節(jié)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 曾杰;17α雌二醇對APP/PS1N_2a基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞Aβ生成的影響及其機制的研究[D];中南大學(xué);2010年

3 曾杰;17α雌二醇對APP/PS1 N_2a基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞Aβ生成的影響及其機制的研究[D];中南大學(xué);2010年

4 方舟;睡眠剝奪對心臟部分功能的影響和機制研究及其藥物干預(yù)[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

5 魏延宏;利用發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)APP菌影疫苗的研究[D];天津農(nóng)學(xué)院;2013年

6 黃晟;基于用戶體驗的APP設(shè)計研究[D];陜西科技大學(xué);2012年

7 江傳瑋;睡眠剝奪大鼠腹外側(cè)視前區(qū)腺苷水平的變化[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

8 鐘靜瑜;睡眠剝奪對大鼠血漿去甲腎上腺素、多巴胺、五羥色胺及認(rèn)知功能的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 彭竹蕓;外源性硫化氫對PC12細(xì)胞APP的α代謝途徑的調(diào)控研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

10 劉觀良;睡眠剝奪問題的基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析方法研究[D];國防科學(xué)技術(shù)大學(xué);2010年

本文編號：1655351