本文關鍵詞：NHE1抑制劑Cariporide及新型FKBPS配體HD5-6對SAMP8快速老化小鼠的作用機制研究

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【摘要】：目的 研究鈉氫交換蛋白（Na+/H+exchanger1,NHE1）抑制劑cariporide(HOE642)對SAMP8（senescence accelerated-prone mouse8）快速老化小鼠海馬神經(jīng)細胞pH及基因表達譜的影響，探明其對SAMP8快速老化小鼠的作用機制。觀察FKBPs(FK506blinding proteins)配體噻嗪酰胺衍生物（HD5-6）對SAMP8快速老化小鼠的學習記憶能力、海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)以及海馬神經(jīng)元基因表達譜的影響，探討其對SAMP8小鼠的抗老化作用。為阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)發(fā)病機制的探索和對其防治藥物的研究開發(fā)提供進一步的理論及實驗依據(jù)。 方法 選用10月齡SAMP8雄性小鼠39只，隨機分為癡呆組、HD5-6組、HOE642組，每組13只；另選10月齡正常老化的SAMR1(senescenceaccelerated-resistant mouse1)雄性小鼠13只作為正常對照組。各組分別腹腔注射相應藥物35d，并于第29d采用Morris水迷宮實驗評價正常對照組、癡呆組、HD5-6組三組小鼠學習記憶能力的變化；水迷宮實驗結(jié)束后，采用HE染色和TUNEL熒光染色觀察正常對照組、癡呆組、HD5-6組三組小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及凋亡情況；采用非損傷微測技術檢測正常對照組、癡呆組、HOE642組三組小鼠海馬神經(jīng)細胞H+流速；最后采用Agilent表達譜芯片技術檢測各組小鼠海馬神經(jīng)元基因表達譜的變化差異，并用RT-PCR驗證芯片結(jié)果的可靠性。 結(jié)果 在Morris水迷宮實驗的定位航行實驗中，與正常對照組相比，癡呆組、HD5-6組逃避潛伏期均顯著延長（p0.01），表現(xiàn)出明顯的學習記憶障礙，但HD5-6組潛伏期較癡呆組明顯縮短（p0.01）。HE染色及TUNEL熒光染色結(jié)果顯示：與正常對照組相比，癡呆組海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，細胞排列紊亂，大量的神經(jīng)元細胞核固縮、深染、壞死，其神經(jīng)元凋亡指數(shù)(51.734.48)%明顯高于正常對照組(28.0211.25)%（p0.05），而HD5-6干預的SAMP8小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元病理改變明顯改善，海馬神經(jīng)元凋亡指數(shù)（20.472.25）%明顯降低（p0.01）。非損傷微測實驗結(jié)果顯示：與正常對照組小鼠海馬神經(jīng)細胞H+流速（0.13810.0791pmol.cm-2.s-1）相比，癡呆組小鼠海馬神經(jīng)細胞H+流速（0.38260.0578pmol.cm-2.s-1）明顯加快（p0.05）；與癡呆組相比，HOE642干預的SAMP8小鼠H+流速(0.64980.0922pmol·cm-2·s-1）進一步加快（p0.05）。Agilent表達譜芯片結(jié)果顯示：與癡呆組基因表達譜相比，HOE642干預的SAMP8小鼠海馬神經(jīng)元的表達差異在2倍以上的基因有99條，表達上調(diào)的為5條，表達下調(diào)的為94條，其中有功能的mRNA中，表達上調(diào)的有3條，表達下調(diào)的有30條；與癡呆組基因表達譜相比，HD5-6干預的SAMP8小鼠海馬神經(jīng)元的表達差異在2倍以上的基因有118條，表達上調(diào)的為9條，表達下調(diào)的為109條，其中有功能的mRNA中，，表達上調(diào)的有4條，表達下調(diào)的有21條。RT-PCR結(jié)果顯示差異基因表達量與基因表達譜結(jié)果具有相同的方向性，芯片結(jié)果可靠。 結(jié)論 Cariporide能夠加重SAMP8快速老化小鼠大腦神經(jīng)細胞的酸性環(huán)境，并且通過對與錯誤蛋白產(chǎn)生和降解有關的基因表達產(chǎn)生可能的影響，進而影響SAMP8小鼠的老化速度。HD5-6能夠改善快速老化小鼠SAMP8的學習記憶能力和海馬神經(jīng)元病理改變，并且通過對基因表達譜產(chǎn)生可能的影響發(fā)揮明顯的抗衰老作用。
【學位授予單位】：遼寧醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.1

【參考文獻】

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1 Evan Dorey;Nina Chang;Qing Yan Liu;Ze Yang;Wandong Zhang;;Apolipoprotein E, amyloid-beta, and neuroinflammation in Alzheimer's disease[J];Neuroscience Bulletin;2014年02期

本文編號：1264655