發(fā)布時(shí)間：2017-11-17 04:00

  本文關(guān)鍵詞：aFGF和TAT-aFGF對(duì)ADDLs損傷的大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起的保護(hù)作用研究

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【摘要】：目的:利用β淀粉樣蛋白(amyloid beta,Aβ)寡聚體(Aβ-derived diffusible ligands,ADDLs)處理培養(yǎng)6天(DIV6)的SD乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元,建立阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)體外模型,觀(guān)察酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(a FGF)及其改構(gòu)體(TAT-a FGF)對(duì)皮質(zhì)神經(jīng)元突起的保護(hù)作用,并探索其相關(guān)神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。方法:(1)制備和鑒定ADDLs。用不同濃度的ADDLs(125、250、500、1000 n M)處理DIV6原代新生大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞,MTT檢測(cè)細(xì)胞活力,免疫熒光檢測(cè)各組MAP2陽(yáng)性神經(jīng)元的形態(tài),確定最佳造模劑量,建立AD體外細(xì)胞模型。(2)不同濃度的a FGF預(yù)保護(hù)原代皮質(zhì)神經(jīng)元2 hrs,用最佳造模濃度250 n M的ADDLs與相應(yīng)濃度a FGF或TAT-a FGF共同處理細(xì)胞24 hrs,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,免疫熒光檢測(cè)各組MAP2陽(yáng)性神經(jīng)元的形態(tài),確定a FGF和TAT-a FGF最佳作用濃度。(3)選用最佳作用濃度的aFGF或TAT-aFGF作用ADDLs損傷的原代神經(jīng)元,免疫印記檢測(cè)CREB磷酸化水平、PI3K/AKT及MEK/ERK信號(hào)通路以及突觸相關(guān)蛋白(MAP2、PSD95)的表達(dá)情況,同時(shí)采用PI3K抑制劑LY294002或ERK1/2抑制劑PD98059分組進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)各組細(xì)胞存活率、信號(hào)通路分子以及突觸相關(guān)蛋白的改變情況。結(jié)果:MTT與免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明ADDLs最佳造模濃度為250 n M,細(xì)胞活力為66.3%;建立了ADDLs誘導(dǎo)皮質(zhì)神經(jīng)損傷模型,篩選并確定a FGF和TAT-a FGF最佳作用濃度均為1000 ng/m L,在該濃度下a FGF或TAT-a FGF均能很好地拮抗ADDLs對(duì)皮質(zhì)神經(jīng)元造成的損傷,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)效應(yīng);通路蛋白和突觸相關(guān)蛋白檢測(cè)發(fā)現(xiàn):(1)在PI3K/AKT通路中,a FGF或TAT-a FGF作用24hrs后PI3K、AKT、GSK3β的磷酸化水平以及MAP2與PSD95的表達(dá)水平顯著上調(diào),加入PI3K抑制劑LY294002后其上調(diào)作用得到明顯抑制,同時(shí)細(xì)胞存活率也分別降至62.0%和61.8%。(2)在MEK/ERK通路中,a FGF或TAT-a FGF作用24hrs后ERK、CREB的磷酸化水平及MAP2和PSD95的蛋白表達(dá)水平也顯著上調(diào)。加入ERK1/2抑制劑PD98059后,其上調(diào)作用得到明顯抑制,同時(shí)細(xì)胞活率分別降至61.4%和62.8%。結(jié)論:a FGF和TAT-a FGF通過(guò)PI3K/AKT/GSK3β和ERK上調(diào)CREB磷酸化水平,促進(jìn)突觸相關(guān)蛋白MAP2與PSD95表達(dá),拮抗ADDLs誘導(dǎo)皮質(zhì)神經(jīng)元突起損傷,發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

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1 何向;aFGF和TAT-aFGF對(duì)ADDLs損傷的大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起的保護(hù)作用研究[D];暨南大學(xué);2016年

2 林健聰;Tat-aFGF融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達(dá)、純化及對(duì)海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用[D];暨南大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1194693