本文關(guān)鍵詞：抗氧化劑對阿爾茨海默病的神經(jīng)保護作用及其機制的研究

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【摘要】：第一部分：抗氧化劑普羅布考治療阿爾茨海默病的臨床研究 目的：比較普羅布考聯(lián)合多奈哌齊與單用多奈哌齊治療阿爾茨海默病的療效。 方法：收集40例阿爾茨海默病患者以單盲對照法，隨機分為聯(lián)合用藥治療組與單藥治療組，隨訪時間窗達(dá)8周，在治療前及治療第8周末采用簡易智能精神狀態(tài)量表(MMSE)測定認(rèn)知功能，評定臨床療效。 結(jié)果：治療8周末MMSE評分:聯(lián)合用藥治療組與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；單藥治療組與治療前比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；治療8周末兩組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：普羅布考聯(lián)合多奈哌齊能更好地改善阿爾茨海默病的認(rèn)知功能。 第二部分：木犀草素對阿爾茨海默病體外模型的神經(jīng)保護作用及其機制的研究 目的：探討木犀草素(Luteolin)對以Aβ25-35誘導(dǎo)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y細(xì)胞）創(chuàng)建的阿爾茨海默體外模型氧化損傷的神經(jīng)保護機制。 方法：以50μmol/L濃度Aβ25-35誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞，建立阿爾茨海默體外模型。以不同濃度劑量的木犀草素分別對AD體外模型進(jìn)行干預(yù)。實驗分組： 1.正常對照組：正常培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞； 2.AD體外模型組：50μmol/L的Aβ25-35誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞； 3.治療1組：1μmol/L的木犀草素干預(yù)AD體外模型組； 4.治療2組：5μmol/L的木犀草素干預(yù)AD體外模型組； 5.治療3組：10μmol/L的木犀草素干預(yù)AD體外模型組； 6.治療4組：20μmol/L的木犀草素干預(yù)AD體外模型組； 實驗采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變；MTT法檢測各組細(xì)胞存活率；酶標(biāo)儀法檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶（LDH）的活性；流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率；通過測定丙二醛（MDA）含量、總谷胱甘肽（GSH）含量以及測定超氧化物歧化酶（SOD）活力來評估細(xì)胞氧化損傷程度。 結(jié)果： （一）形態(tài)學(xué)觀察： 1.正常對照組：光鏡下細(xì)胞數(shù)量多，突觸明顯，細(xì)胞呈現(xiàn)多邊形，生長狀態(tài)良好，細(xì)胞的折光性正常。電鏡下細(xì)胞核圓，細(xì)胞核仁大，細(xì)胞器清晰可見，細(xì)胞器的數(shù)量，正常結(jié)構(gòu)。 2.AD體外模型組：光鏡下細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，細(xì)胞呈多邊形或不規(guī)則形，生長狀態(tài)差，細(xì)胞折光性明顯變差。電鏡下細(xì)胞核呈現(xiàn)不規(guī)則形狀，核仁呈邊向分布，細(xì)胞器數(shù)量明顯減少，整體結(jié)構(gòu)雜亂。 3.治療1-3組：光鏡下隨著藥物濃度的遞增，細(xì)胞數(shù)量均明顯增多，個體逐步飽滿，折光性明顯改善，生長狀態(tài)逐步好轉(zhuǎn)。電鏡下，細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)狀態(tài)逐步向正常細(xì)胞對照組接近，細(xì)胞核逐漸變圓，質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器增多，結(jié)構(gòu)逐步向正常細(xì)胞接近。 4.治療4組：光鏡下極少見明確細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)胞破碎，，生長狀態(tài)及折光性均極差，細(xì)胞損害程度相當(dāng)嚴(yán)重，形態(tài)學(xué)改變十分明顯。電鏡下僅存的細(xì)胞結(jié)構(gòu)不明顯，核膜皺縮，細(xì)胞器少而結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，較少見完整細(xì)胞器，整體結(jié)構(gòu)雜亂難以分辨。 （二）神經(jīng)保護作用的評估 1.與正常對照組相比較，AD體外模型組的MTT吸光度OD值與細(xì)胞存活率均明顯下降（P＜0.01），LDH活性及細(xì)胞凋亡率明顯抬高（P＜0.01）。 2.與AD體外模型組比較，治療1-3組的MTT吸光度OD值增加（P＜0.05），細(xì)胞存活率明顯提高（P＜0.01），LDH活性明顯回落（P＜0.01），細(xì)胞凋亡率下降（P＜0.05）。治療3組的MTT吸光度OD值及細(xì)胞存活率達(dá)最高，LDH活性及細(xì)胞凋亡率達(dá)最低。 3.與AD體外模型組比較，治療4組的吸光度OD值與細(xì)胞存活率均降低（P＜0.05），LDH活性及細(xì)胞凋亡率明顯提高（P＜0.01）。 （三）氧化損傷程度的評估 1.與正常對照組相比較，AD體外模型組的MDA含量顯著升高（P＜0.01），SOD活力顯著降低（P＜0.01），GSH含量明顯回落（P＜0.01）。 2.與AD體外模型組比較，治療1-3組的MDA含量均降低（P＜0.05），SOD活力明顯提高（P＜0.01），總GSH含量明顯提升（P＜0.01）。治療3組的MDA含量達(dá)最低，SOD活力及總GSH含量最高。 3.與AD體外模型組比較，治療4組的MDA含量顯著抬高（P＜0.01），SOD活力明顯回落（P＜0.01），GSH含量顯著下降（P＜0.01）。 結(jié)論： 1.低劑量的木犀草素對于AD體外模型具有神經(jīng)保護作用。 2.這種神經(jīng)保護作用的機制可能源于減少AD體外模型的氧化損傷程度所致。 3.當(dāng)木犀草素劑量增加到一定程度時，木犀草素的神經(jīng)保護作用轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞毒性作用。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16


本文編號：1188193