本文關(guān)鍵詞：雌激素降低慢性低灌注后血管-神經(jīng)元損傷及其機(jī)制

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【摘要】：目的通過(guò)制作雌性去勢(shì)大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎（Bilateral Common CarotidArtery Occlusion，BCCAO）模型，觀察大鼠腦慢性低灌注不同時(shí)期各組神經(jīng)血管單元（Neurovascular Unit，NVU）的損傷情況，探索長(zhǎng)期生理劑量雌激素（17-β-estrodiol，E2）替代治療介導(dǎo)的多靶點(diǎn)的神經(jīng)血管單元的保護(hù)作用并探討其可能的分子機(jī)制，為臨床上由于慢性低灌注引起的血管性癡呆等提供新的治療策略。 方法1制作雌性去勢(shì)大鼠BCCAO實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型：采用SPF級(jí)成年雌性SD大鼠，體重280~300g，行雙側(cè)卵巢切除術(shù)（OVX）一周后制作分階段雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎模型，，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為慢性低灌注早期組：sham，BCCAO（6h、1d、3d、7d），BCCAO3d+安慰劑，BCCAO3d+E2和慢性進(jìn)展期組：sham3m，BCCAO3m，BCCAO+安慰劑，BCCAO3m+E2。2采用伊文氏蘭（Evans Blue，EB）和熒光素鈉（NaF）染色技術(shù)觀察大鼠BCCAO后染料向組織的滲漏，采用Western blot技術(shù)檢測(cè)大鼠皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)緊密連結(jié)蛋白ZO-1、Occludin的表達(dá)水平變化以評(píng)估血腦屏障損傷狀況及程度。3采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)各組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)血管IgG的滲漏程度，以觀察BCCAO后不同時(shí)期各組大腦微血管的損傷情況。4采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)各組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)血管形態(tài)及血管密度的變化，以探求BCCAO后不同時(shí)期血管的病理發(fā)展變化。5采用透射電鏡技術(shù)觀察不同時(shí)期各組海馬神經(jīng)血管單元損傷的超微結(jié)構(gòu)。6Western blot技術(shù)檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF、神經(jīng)元骨架蛋白MAP2的表達(dá)及雌激素的作用。7激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)觀察BCCAO后不同時(shí)期神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化及VEGF的免疫定位以及E2的作用。 結(jié)果1慢性低灌注早期血腦屏障通透性顯著增加。EB和NaF滲漏于BCCAO后1d開(kāi)始顯著增加（P0.05），并于3d達(dá)到高峰，7d顯著下降，但仍高于sham組。2大腦慢性低灌注早期通過(guò)影響緊密連接蛋白ZO-1、Occludin的表達(dá)破壞血腦屏障的完整性。Western blot結(jié)果顯示BCCAO3d時(shí)間點(diǎn)，與相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)sham組相比，海馬及皮質(zhì)ZO-1、Occludin表達(dá)水平顯著下降（P0.05）。3IgG免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：與相應(yīng)sham（3d或3m）組相比，BCCAO后3d、3m組皮層和海馬CA1區(qū)可見(jiàn)大量損傷的血管被IgG免疫染色包圍；與BCCAO3d組相比，海馬CA1區(qū)BCCAO3m組IgG在血管周圍的染色較弱。給予E2處理均可顯著降低血管IgG的滲漏；4BCCAO后微血管密度的變化以及雌激素的保護(hù)作用。采用RECA-1免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果顯示：皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)sham（3d和3m）組50~500大小的血管較少，而B(niǎo)CCAO組（3d、3m）小血管的數(shù)量顯著增加，雌激素處理組顯著降低BCCAO處理后小血管的數(shù)量。像素大于2001的血管數(shù)目于BCCAO （3d、3m）后顯著降低（P0.05），生理劑量雌激素替代治療可有效增加大血管密度（P0.05）。5BCCAO后神經(jīng)血管單元損傷的超微結(jié)構(gòu)以及長(zhǎng)期生理劑量雌激素替代的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各組大鼠海馬超薄切片經(jīng)透射電鏡掃描后發(fā)現(xiàn)：BCCAO3d和3m組海馬CA1區(qū)血管周圍嚴(yán)重水腫，血管輕度擴(kuò)張及內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷；神經(jīng)元細(xì)胞核輕度固縮，核內(nèi)染色質(zhì)凝集，邊集，線粒體腫脹，嵴斷裂，部分可見(jiàn)凋亡現(xiàn)象。貼附于血管周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)肥大，胞突終端明顯水腫，線粒體嵴斷裂。給予E2可顯著改善血管神經(jīng)元單元的超微結(jié)構(gòu)。6雌激素可能通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF、MAP2的表達(dá)發(fā)揮其神經(jīng)血管單元的保護(hù)作用。Western blot結(jié)果顯示海馬CA1區(qū)VEGF的表達(dá)于BCCAO后6h,1d顯著增高，此后顯著降低，于3d達(dá)最低，且BCCAO后3m VEGF水平較sham3m組顯著降低；與相應(yīng)sham組相比，MAP2表達(dá)于BCCAO后3d、7d及3m組顯著降低（P0.05）；E2可顯著升高BCCAO后海馬CA1區(qū)VEGF及MAP2的表達(dá)（P0.05）。7激光共聚焦掃描顯微鏡結(jié)果示VEGF在BCCAO后6h、1d高表達(dá)于神經(jīng)元，而在BCCAO后3d、7d甚至3m主要表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞，且其表達(dá)變化與western blot結(jié)果一致。 結(jié)論1大鼠腦慢性低灌注可以通過(guò)破壞血管緊密連接蛋白而誘發(fā)神經(jīng)血管單元結(jié)構(gòu)及功能的損傷；2長(zhǎng)期生理劑量17-β-雌二醇替代治療能夠有效發(fā)揮其對(duì)神經(jīng)血管單元多靶點(diǎn)的整體保護(hù)作用；3雌激素通過(guò)上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF及MAP2表達(dá)發(fā)揮神經(jīng)血管單元的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎 慢性腦低灌注 血腦屏障 17-β-雌二醇 血管密度 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 微管相關(guān)蛋白2
【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.13
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 英文縮略表 續(xù)表11-12
• 引言12-14
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究14-42
• 1.1 材料與方法14-24
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-19
• 1.1.2 試驗(yàn)方法19-24
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24
• 1.2 結(jié)果24-33
• 1.2.1 BCCAO 早期血腦屏障的完整性破壞24-26
• 1.2.2 BCCAO 后微血管滲漏及 E2 替代治療的保護(hù)作用26
• 1.2.3 BCCAO 對(duì)大腦微血管密度的影響及 E2 替代治療的保護(hù)作用26-29
• 1.2.4 BCCAO 誘導(dǎo) NVU 超微結(jié)構(gòu)的損傷及 E2 對(duì) NVU 的保護(hù)作用29-30
• 1.2.5 BCCAO 顯著降低 VEGF 和 MAP2 的蛋白表達(dá)，E2 可逆轉(zhuǎn)此變化30-32
• 1.2.6 E2 可通過(guò)調(diào)節(jié) VEGF 的定位及表達(dá)發(fā)揮其 NVU 整體的保護(hù)作用32-33
• 1.3 討論33-37
• 1.4 結(jié)論37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 第2章 綜述神經(jīng)血管單元的研究進(jìn)展42-51
• 2.1 神經(jīng)血管單元概述42-45
• 2.1.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞43
• 2.1.2 血腦屏障的緊密連接43-44
• 2.1.3 周細(xì)胞44
• 2.1.4 細(xì)胞外基質(zhì)44-45
• 2.2 神經(jīng)血管單元各組分間的信號(hào)傳遞45-46
• 2.2.1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）信號(hào)通路與神經(jīng)血管單元45
• 2.2.2 Notch 信號(hào)通路在神經(jīng)血管單元中的作用45-46
• 2.2.3 Wingless 信號(hào)通路與神經(jīng)血管單元46
• 2.3 展望46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介52-53
• 作者簡(jiǎn)介53-54
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集54

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2 王積原,張曉莉,陳晶,于珊媛;慢性低灌注狀態(tài)[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2002年05期

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4 宋揚(yáng);高山;;低灌注和栓塞的共同作用在缺血性卒中中扮演的角色[J];中國(guó)卒中雜志;2006年04期

5 趙艷;楊鴻雁;劉興德;;低灌注處理對(duì)家兔心肌缺血再灌注損傷的影響[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2014年02期

6 呂強(qiáng);卒中后丘腦和小腦的低灌注及血管反應(yīng)性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊(cè));1994年02期

7 董宏;李斌;王濤;;頸動(dòng)脈支架成形術(shù)后低灌注1例[J];臨床急診雜志;2009年01期

8 高宗恩;短暫性腦缺血發(fā)作持續(xù)低灌注:有臨床意義的新亞型[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊(cè));1996年06期

9 徐程華;王志敏;王鵬;應(yīng)江鮮;;穿支低灌注發(fā)病機(jī)制在內(nèi)囊預(yù)警綜合征病因中的參與二例[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年20期

10 劉波;桑池學(xué);葉泳松;周懂晶;董洋;鄧時(shí)貴;;低灌注兔模型腦血流動(dòng)力學(xué)的多層螺旋CT灌注成像研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2007年08期

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1 劉宏;邢安鳳;劉國(guó)貞;王玨;李良;;慢性腦血流低灌注對(duì)Aβ產(chǎn)生及清除的影響[A];2008年全國(guó)抗衰老與老年癡呆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

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2 宋文s

本文編號(hào)：1074278