本文關(guān)鍵詞：在APPSwInd小鼠中基于iTRAQ技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究阿爾茨海默癥的早期改變

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【摘要】：背景 阿爾茨海默癥(Alzheimer's Disease)是一種神經(jīng)退行性疾病,多發(fā)于70歲以上人群中,發(fā)病率隨著年齡增加而上升。在目前社會(huì)逐步老齡化的當(dāng)下,已經(jīng)成為65歲以上人群中第四大死亡原因,是一個(gè)日趨嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題�；颊邥�(huì)出現(xiàn)抑郁、淡漠、煩躁、焦慮、攻擊等精神癥狀,以及更為普遍的記憶損傷、認(rèn)知障礙、執(zhí)行能力損害,逐漸發(fā)展到生活不能自理,最終昏迷,死于感染等并發(fā)癥。AD病因包括家族遺傳,頭部外傷,軀體疾病,社會(huì)心理因素等,然而發(fā)病機(jī)制尚不明確,并且缺乏早期診斷標(biāo)準(zhǔn)和早期干預(yù)手段,在中晚期階段確診后再進(jìn)行藥物干預(yù)治療等措施難以逆轉(zhuǎn)病情。所以尋找AD早期診斷標(biāo)志物是一個(gè)亟待解決的事情。目的 在質(zhì)譜結(jié)果中探究早期AD小鼠模型中出現(xiàn)的生物分子方面變化,篩選出能夠在兩種AD模型小鼠腦部均有顯著改變,并能夠影響體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞中淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)表達(dá)的潛在AD早期生物標(biāo)志物以及治療靶點(diǎn)。方法使用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(iTRAQ)對(duì)早期AD模型小鼠J20海馬部位與野生型小鼠海馬區(qū)進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè),得到表達(dá)量有顯著差異的蛋白。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-PCR)檢測(cè)在J20及雙轉(zhuǎn)基因小鼠APP/PSEN1海馬中待篩選蛋白mRNA表達(dá)量。用Western Blot檢測(cè)APP/PSEN1小鼠的不同腦區(qū)待篩選蛋白表達(dá)量與野生型小鼠中的差異。通過構(gòu)建蛋白shRNA質(zhì)粒進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染后敲減目的蛋白,用RT-PCR和Westren Blot驗(yàn)證敲減效應(yīng),并用Western Blot和細(xì)胞免疫熒光染色(ICC)進(jìn)行細(xì)胞APP表達(dá)情況分析。結(jié)果用iTRAQ技術(shù)我們發(fā)現(xiàn)了700余種蛋白質(zhì)在J20小鼠海馬區(qū)有改變,其中有顯著改變的有400余種,根據(jù)蛋白功能不同,將蛋白分成32類。我們發(fā)現(xiàn)胞外區(qū)域蛋白質(zhì)以及代謝過程有關(guān)蛋白質(zhì)大部分表現(xiàn)為增加,而突觸有關(guān)蛋白全部為表現(xiàn)為降低。將mRNA的結(jié)果與質(zhì)譜結(jié)果結(jié)合進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),在蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)水平上,兩種轉(zhuǎn)基因小鼠是有區(qū)別的。在APP/PSEN1小鼠不同腦區(qū)進(jìn)行western檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)Rac1蛋白在小腦區(qū)顯著增加,β-spectrin在海馬和皮層區(qū)域顯著降低。體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)β-spectrin蛋白的敲減對(duì)APP表達(dá)產(chǎn)生明顯影響。 結(jié)論綜合上述結(jié)果,我們得到了一批潛在的AD生物標(biāo)記物,并且發(fā)現(xiàn)了β-spectrin在AD早期對(duì)APP的轉(zhuǎn)運(yùn)有一定影響。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默癥 生物標(biāo)志物 淀粉樣前體蛋白 β-spectrin
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語9-11
• 1. 引言11-15
• 1.1 阿爾茨海默癥(Alzheimer's Disease)11-12
• 1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)與iTRAQ12-13
• 1.3 AD模型小鼠13-15
• 2. 材料和方法15-38
• 2.1 主要儀器設(shè)備和試劑15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用抗體16-17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)試劑及配制17-21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法21-38
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-52
• 3.1 J20小鼠海馬區(qū)與野生型小鼠海馬區(qū)蛋白表達(dá)量的改變38-41
• 3.2 驗(yàn)證在改變蛋白兩類AD模型小鼠海馬中蛋白mRNA的表達(dá)水平41-44
• 3.3 APP/PSEN1小鼠不同腦區(qū)中蛋白表達(dá)量與野生型小鼠的比較44-45
• 3.4 β-spectrin在J20小鼠海馬中蛋白水平改變的確認(rèn)45-46
• 3.5 蛋白敲減對(duì)N2A/APP細(xì)胞APP表達(dá)情況的影響46-52
• 4. 結(jié)論52-53
• 5. 討論53-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 綜述60-70
• 參考文獻(xiàn)68-70
• 作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Effect of amyloid peptides on serum withdrawal-induced cell differentiation and cell viability[J];Cell Research;2004年06期

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本文編號(hào)：1046317