本文關(guān)鍵詞：攜帶GFP的慢病毒感染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及其對(duì)Oct4表達(dá)的影響

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【摘要】：目的將攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的慢病毒感染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs),并觀察其對(duì)Oct4表達(dá)的影響。方法采用組織塊貼壁法分離、培養(yǎng)hUCMSCs,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物;利用含GFP的慢病毒,以不同感染復(fù)數(shù)(MOI值)感染hUCMSCs,熒光顯微鏡下觀察GFP的表達(dá)情況,并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP的陽(yáng)性率,確定最佳MOI值;實(shí)驗(yàn)分為未感染組和感染組;MTT法檢測(cè)感染慢病毒后對(duì)細(xì)胞增殖的影響;GFP慢病毒感染hUCMSCs后體外持續(xù)培養(yǎng)2周和8周,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)和免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞中Oct4的表達(dá)變化。結(jié)果體外培養(yǎng)出的hUCMSCs呈長(zhǎng)梭形成纖維細(xì)胞樣,第3代細(xì)胞高表達(dá)CD29、CD105和CD90,低表達(dá)CD34、CD45;熒光顯微鏡觀察在感染96 h后熒光表達(dá)最強(qiáng);當(dāng)以MOI=20感染細(xì)胞96 h后,GFP陽(yáng)性率達(dá)75%以上;與未感染組相比,MTT顯示GFP慢病毒對(duì)細(xì)胞增殖沒有明顯影響(P0.05);qRT-PCR檢測(cè)Oct4在培養(yǎng)2周和8周的細(xì)胞中相對(duì)表達(dá)量分別為0.9075±0.0124和0.8600±0.0135;免疫熒光染色顯示Oct4在培養(yǎng)2、8周中均有表達(dá)且定位于胞核。結(jié)論慢病毒攜帶的GFP基因能夠表達(dá)于hUCMSCs中,且不影響Oct4的表達(dá)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 綠色熒光蛋白 慢病毒 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 Oct
【基金】：重慶市科委基金(0200060226)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 臍帶來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilicalcord mesenchymal stem cells,hUCMSC)作為一種具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞,可分化為心肌細(xì)胞[1]、血管內(nèi)皮細(xì)胞[2]、成骨細(xì)胞[3]等,是目前研究和應(yīng)用較多的間充質(zhì)干細(xì)胞之一。八聚體轉(zhuǎn)錄因子4(octamer transcription factor 4,Oct

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2 江小霞,張毅,李秀森,吳英,于曉Y，

本文編號(hào)：999274