本文關鍵詞：弓形蟲棒狀體蛋白18的原核表達及免疫分析

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【摘要】：目的克隆剛地弓形蟲ROP18基因,進行原核表達及重組蛋白的免疫分析。方法提取弓形蟲RH株基因組DNA,經(jīng)PCR獲得ROP18基因片段,經(jīng)雙酶切分別連入原核表達載體pET-28a(+)和pET-32a(+),構建重組表達載體pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并轉化大腸桿菌BL21(DE3)。IPTG誘導表達后,收集菌體進行SDS-PAGE電泳及Western-blot檢測。結果 PCR得到約1 665bp目的基因片段,單、雙酶切及PCR鑒定結果顯示成功構建重組表達載體pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;經(jīng)IPTG誘導后,ROP18基因在大腸桿菌中高效表達;SDS-PAGE電泳及Western-blot分析顯示,pET28a-ROP18在相對分子質量約60kD的位置出現(xiàn)目的蛋白條帶,pET32a-ROP18在相對分子質量約83kD的位置出現(xiàn)目的蛋白條帶,均與理論值相符;Western-blot結果顯示重組蛋白與弓形蟲慢性感染小鼠血清具有特異免疫反應性。結論成功克隆和表達了ROP18基因,所表達的重組蛋白具有免疫效應,為其功能研究奠定基礎。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學學院病原生物學系;
【關鍵詞】： 剛地弓形蟲 棒狀體蛋白 基因克隆 原核表達 免疫分析
【基金】：國家自然科學基金(No.30972578,31030066) 教育部博士點項目(No.20094433120013,20094433120016) 廣東省自然科學基金(No.9151051501000075) 廣東省“大學生創(chuàng)新實驗計劃”項目(No.1212110025,1212110027) 南方醫(yī)科大學大學生課外科研項目(Nos.2010kw082,GWXS20110101,GWXS20110205)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種機會性細胞內寄生原蟲,能寄生于人和多種動物的有核細胞內引起人獸共患的弓形蟲病。弓形蟲呈世界性分布,人群普遍易感,多呈隱性感染,但在免疫抑制或免疫缺陷患者中(如長期使用免疫抑制劑、惡性腫瘤、AIDS等)可引起嚴重的器官損害(多見于腦和眼

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孫怡;何深一;叢華;楊婷婷;周懷瑜;古欽民;李瑛;趙群力;;弓形蟲SAG1-SAG2復合DNA疫苗免疫小鼠誘導的免疫保護性[J];國際醫(yī)學寄生蟲病雜志;2006年01期

2 何勇;周鵬;尹創(chuàng)成;袁子國;林瑞慶;;弓形蟲主要表面抗原的研究進展[J];畜牧與獸醫(yī);2010年05期

3 楊婷婷,何深一,蔣華,古欽民,叢華,周懷瑜,張加勤,李瑛,趙群力;弓形蟲主要表面抗原p30單價及復合基因疫苗的構建[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2005年01期

4 李文姝;謝自新;陳慶新;陳韶;張麗芳;;弓形蟲ROP2-SAG1重組復合蛋白及其重組質粒的免疫效應[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2010年05期

5 陳海峰,陳觀今,郭虹,鄭煥欽,王又紅;弓形蟲復合抗原基因SAG1/ROP1在大腸桿菌中表達的初步研究[J];中國人獸共患病雜志;2001年02期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 荊振宇;基于rROP18-rSAG2犬弓形蟲ELISA檢測技術及藥物篩選研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2011年

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫怡;弓形蟲疫苗研究進展[J];臨沂醫(yī)學�？茖W校學報;2005年05期

2 王衛(wèi)群;田春林;;剛地弓形蟲分子疫苗研究新進展[J];中國熱帶醫(yī)學;2008年04期

3 陳觀今,鄭煥欽,周永安,郭虹,陳海峰;弓形蟲SAG1 ROP1基因及其復合抗原基因的核酸免疫研究[J];熱帶醫(yī)學雜志;2002年04期

4 王樹萍;楊曉燕;姜素華;陳建萍;黃世光;呂芳麗;;弓形蟲感染宮內垂直傳播的免疫特點[J];熱帶醫(yī)學雜志;2008年05期

5 朱佩嫻;鄭煥欽;王樹萍;張瑞琳;黃世光;呂芳麗;;紫外線減毒弓形蟲對小鼠旋毛蟲感染的影響[J];熱帶醫(yī)學雜志;2008年10期

6 譚逵;張瓊;范久波;謝榮華;蔣立平;吳翔;舒衡平;;弓形蟲新基因wx2表位疫苗免疫小鼠的保護研究[J];生物化學與生物物理進展;2008年09期

7 姜淑芳,王珊;我國弓形蟲病研究新進展[J];實用寄生蟲病雜志;2002年01期

8 徐安健;谷俊朝;;剛地弓形蟲基因工程疫苗[J];中國生物工程雜志;2009年11期

9 談永飛,印鑫,湯俊明,司進,徐明,殷旭仁,曹國群,梁幼生,朱蔭昌;應用重組抗原(rSAG1)檢測IgM抗體診斷弓形蟲病的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;2004年02期

10 張曉文;惠清法;;弓形蟲疫苗的研究進展[J];延安大學學報(自然科學版);2007年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張影;張瑾;薄淑英;楊英超;辛曉芳;王國治;;弓形蟲STAg免疫小鼠后血清抗體水平的動態(tài)檢測[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學術研討會論文匯編[C];2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 曲道峰;弓形蟲微線體蛋白MIC3生物學特性及免疫原性研究[D];浙江大學;2011年

2 李文姝;弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗免疫效果研究及弓形蟲ROP2-P30基因工程復合抗原的構建[D];蘇州大學;2004年

3 楊培梁;弓形蟲多表位基因的疫苗研究及其重組抗原在免疫診斷中的應用[D];第一軍醫(yī)大學;2007年

4 王妍;弓形蟲GRA3基因的原核表達及單克隆抗體的制備與初步應用研究[D];延邊大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 章黎;弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）對小鼠部分免疫細胞亞群的影響[D];南京醫(yī)科大學;2009年

2 楊培梁;弓形蟲多表位基因的構建及其在大腸桿菌和酵母系統(tǒng)中的初步表達[D];第一軍醫(yī)大學;2001年

3 吳q;弓形蟲ROP2、SAG1基因的克隆及表達和復合基因SAG1/ROP2的構建及表達[D];第一軍醫(yī)大學;2002年

4 孫怡;弓形蟲P30-P22 DNA疫苗免疫小鼠誘導的免疫保護效應[D];山東大學;2005年

5 張瓊;弓形蟲入侵相關蛋白MIC3的定位及DNA疫苗的研究[D];中南大學;2008年

6 崔玉玲;弓形蟲SAG1-ROP2-SAG2復合基因疫苗與免疫佐劑pmIL-12對小鼠的免疫保護性研究[D];山東大學;2008年

7 曹麗艷;弓形蟲GJS株表面抗原1基因的克隆、表達及鑒定[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2009年

8 蘆峗;山羊弓形蟲代謝分泌抗原免疫應答研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2009年

9 黃祥盛;弓形蟲ADF基因亞單位疫苗與核酸疫苗的實驗免疫研究[D];吉林大學;2009年

10 李娟;牛瑟氏泰勒蟲pVAX1-P33-P23的構建及在Hela細胞中的表達[D];延邊大學;2009年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王秀芹;孫克良;李秀敏;;磺胺類藥物治療豬弓形體病的初步效果[J];當代畜牧;2005年12期

2 李佳佳;李楊;鞠玉琳;王韻篪;劉立本;;樺褐孔菌多糖對小鼠臟器中弓形蟲感染的影響[J];動物醫(yī)學進展;2011年02期

3 陳艷;毛克強;;用ABC-Dot-ELISA檢測兔弓形蟲循環(huán)抗體的初步研究[J];貴陽醫(yī)學院學報;1990年04期

4 杜宗亮;;當前豬無名高熱綜合征的現(xiàn)狀分析與防控對策[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年01期

5 程雪嬌;鞠玉琳;吳雨龍;;黃芩、甘草等十種中藥體外抗弓形蟲效果的比較[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年05期

6 歐陽顆，楊家芬，，李鎮(zhèn)輝，唐發(fā)清;青蒿提取物對剛地弓形蟲的抑制作用[J];湖南醫(yī)科大學學報;1994年02期

7 程軍;清熱活血法治療弓形蟲抗體陽性療效觀察[J];河南中醫(yī);2000年01期

8 吳君霞;沈繼龍;羅慶禮;喬增培;余莉;胡元生;;重組抗原聯(lián)合用于弓形蟲病IgG免疫診斷的研究[J];臨床輸血與檢驗;2008年03期

9 周永華,石火英,劉耀興,吳菁,王崇功;阿奇霉素抗弓形蟲速殖子作用的體外實驗和超微研究[J];南京師大學報(自然科學版);2001年02期

10 王岳五,張海波,呂杰,史玉榮,何敏,王雙石,丁友舫;甘草殘渣中多糖GPS抗腫瘤作用的研究[J];南開大學學報(自然科學版);2000年04期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 官劍武;三種蜘蛛毒素抗弓形蟲藥物的篩選及其作用機制的初探[D];中南大學;2010年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭鴻娟;弓形蟲棒狀體蛋白研究進展[J];國外醫(yī)學.寄生蟲病分冊;1999年05期

2 苑文英;吳素煥;劉秀華;;弓形蟲棒狀體蛋白及疫苗研究進展[J];河北職工醫(yī)學院學報;2007年03期

3 牟凌云;間日瘧原蟲網(wǎng)織紅細胞結合蛋白-2(PvRBP-2)與PvRBP-1及約氏瘧原蟲235kDa棒狀體蛋白家族具有共同結構特征[J];國外醫(yī)學.寄生蟲病分冊;2001年02期

4 劉苗苗;周鵬;朱興全;;弓形蟲棒狀體蛋白的研究進展[J];中國獸醫(yī)科學;2008年05期

5 李文姝;陸惠民;閔太善;黃偉達;;弓形蟲棒狀體蛋白2和膜表面蛋白1融合基因的克隆與表達[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2005年06期

6 郭虹,陳觀今,鄭煥欽,周永安;弓形蟲不同分離株ROP1和P30基因的體外擴增[J];中國寄生蟲病防治雜志;1999年02期

7 郭虹,陳觀今,鄭煥欽;含弓形蟲ROP1基因真核表達重組質粒DNA免疫小鼠的研究 IV.免疫鼠血清細胞因子IFN-γ、IL-2及NO的測定[J];中國人獸共患病雜志;2000年04期

8 張佃波;魏慶寬;宰德富;崔勇;李瑾;高紅剛;柏雪蓮;趙立江;韓廣東;劉克義;;剛地弓形蟲ROP2-P30復合基因在E.coliBL21中的表達和鑒定(英文)[J];中國人獸共患病學報;2006年06期

9 張佃波;高紅剛;崔勇;魏慶寬;宰德富;李瑾;柏雪蓮;趙立江;劉克義;;編碼剛地弓形蟲棒狀體蛋白2與主要表面抗原1基因的克隆和表達(英文)[J];中國病原生物學雜志;2006年03期

10 李學瑞;王艷華;趙象忠;張德林;;弓形蟲侵入宿主細胞的研究進展[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2007年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張潔;何深一;薛明福;崔玉玲;;小鼠白介素-12對弓形蟲復合基因疫苗SAG1-ROP2免疫增強作用的研究[A];中華醫(yī)學會熱帶病與寄生蟲學分會機會性感染學術研討會論文匯編[C];2007年

2 魏慶寬;張佃波;李瑾;傅婷霞;柏雪蓮;崔勇;王用斌;王洪法;付斌;劉玉冰;宰德福;黃炳成;劉克義;韓廣東;;抗弓形蟲感染ROP2基因疫苗的研究[A];全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2006年

3 張德林;李學瑞;王艷華;;弓形蟲代謝分泌抗原在免疫中研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第九次學術研討會論文摘要集[C];2006年

4 喬軍;楊松濤;高玉偉;秦川;華育平;王立剛;劉丹;王瑋;周明;夏咸柱;;弓形蟲野毒株ROP5蛋白基因的克隆、表達及反應原性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

5 剡海闊;彭高輝;袁子國;林瑞慶;朱興全;;抗弓形蟲核酸疫苗的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十次學術研討會論文集[C];2009年

6 吳昆;陳曉光;李華;彭鴻娟;;弓形蟲ROP2基因的體外擴增、克隆及在大腸桿菌中的表達[A];中國原生動物學學會第十一次學術討論會論文摘要匯編[C];2001年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 平憲卿;柔嫩艾美耳球蟲A08與棒狀體蛋白的單抗制備及酵母表達系統(tǒng)構建[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 其木格;弓形蟲RH株ROP4基因的原核表達及重組蛋白的免疫原性分析[D];延邊大學;2010年

3 韓欣悅;弓形蟲高反應原性抗原的篩選及其初步應用[D];吉林大學;2012年

4 陳琳;弓形蟲ROP18-MIC2雙基因疫苗對小鼠的免疫保護性研究[D];山東大學;2012年

5 石娜;弓形蟲基因疫苗pBudCE4.1-AMA1-ROP18免疫小鼠的保護作用研究[D];山東大學;2012年

6 王海礁;雙抗體夾心ELISA法檢測弓形蟲循環(huán)抗原的方法建立[D];吉林大學;2011年

7 蔡志杰;豬弓形蟲代謝分泌抗原免疫應答的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2010年

8 章黎;弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）對小鼠部分免疫細胞亞群的影響[D];南京醫(yī)科大學;2009年

9 吳彬;弓形蟲GRA1和MIC3核酸疫苗的構建及免疫反應研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2013年

10 葉強;弓形蟲排泄分泌抗原的功能組分分析與鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

本文編號：992267