本文關(guān)鍵詞：弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白18的原核表達(dá)及免疫分析

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【摘要】：目的克隆剛地弓形蟲(chóng)ROP18基因,進(jìn)行原核表達(dá)及重組蛋白的免疫分析。方法提取弓形蟲(chóng)RH株基因組DNA,經(jīng)PCR獲得ROP18基因片段,經(jīng)雙酶切分別連入原核表達(dá)載體pET-28a(+)和pET-32a(+),構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,收集菌體進(jìn)行SDS-PAGE電泳及Western-blot檢測(cè)。結(jié)果 PCR得到約1 665bp目的基因片段,單、雙酶切及PCR鑒定結(jié)果顯示成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,ROP18基因在大腸桿菌中高效表達(dá);SDS-PAGE電泳及Western-blot分析顯示,pET28a-ROP18在相對(duì)分子質(zhì)量約60kD的位置出現(xiàn)目的蛋白條帶,pET32a-ROP18在相對(duì)分子質(zhì)量約83kD的位置出現(xiàn)目的蛋白條帶,均與理論值相符;Western-blot結(jié)果顯示重組蛋白與弓形蟲(chóng)慢性感染小鼠血清具有特異免疫反應(yīng)性。結(jié)論成功克隆和表達(dá)了ROP18基因,所表達(dá)的重組蛋白具有免疫效應(yīng),為其功能研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲(chóng) 棒狀體蛋白 基因克隆 原核表達(dá) 免疫分析
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30972578,31030066) 教育部博士點(diǎn)項(xiàng)目(No.20094433120013,20094433120016) 廣東省自然科學(xué)基金(No.9151051501000075) 廣東省“大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃”項(xiàng)目(No.1212110025,1212110027) 南方醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生課外科研項(xiàng)目(Nos.2010kw082,GWXS20110101,GWXS20110205)~~
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)是一種機(jī)會(huì)性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng),能寄生于人和多種動(dòng)物的有核細(xì)胞內(nèi)引起人獸共患的弓形蟲(chóng)病。弓形蟲(chóng)呈世界性分布,人群普遍易感,多呈隱性感染,但在免疫抑制或免疫缺陷患者中(如長(zhǎng)期使用免疫抑制劑、惡性腫瘤、AIDS等)可引起嚴(yán)重的器官損害(多見(jiàn)于腦和眼

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：992267