本文關鍵詞：蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型12負性調(diào)控心臟HERG鉀通道電流

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【摘要】：目的研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型12(PTPN12)對心臟HERG鉀通道電流的調(diào)控作用。方法(1)質(zhì)粒構建和基因轉(zhuǎn)染:PCR技術構建各種質(zhì)粒,應用脂質(zhì)體將各種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細胞,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達的細胞株;(2)應用抗PTPN12抗體進行Western blotting分析檢測PTPN12的表達;(3)細胞電生理檢測:應用膜片鉗技術檢測單獨表達HERG組(HEK293/HERG細胞)、PTPN12過度表達組(將pCDNA3.1-PTPN12-RFP轉(zhuǎn)染HEK293/HERG細胞)、PAO處理組(PTPN12/HERG組基礎上加入抑制劑PAO)、herg突變組(將pCDNA3.1-PTPN12-RFP轉(zhuǎn)染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A細胞株)的HERG鉀通道電流。結果(1)成功構建herg突變質(zhì)粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP質(zhì)粒,并獲得穩(wěn)定表達的細胞株;(2)共轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-PTPN12-RFP質(zhì)粒的HEK293/HERG細胞在熒光顯微鏡下可觀察到PTPN12-RFP在細胞中的表達,Western blotting可檢測到PTPN12的表達;(3)PTPN12過度表達組脈沖電流密度明顯低于對照組(P0.01),PAO處理組和herg突變組電流密度明顯高于PTPN12/HERG組(P0.01)。結論 PTPN12對心臟HERG鉀通道電流具有明顯負性調(diào)控作用,其可能機制是PTPN12減弱了HERG鉀通道酪氨酸磷酸化程度。這一發(fā)現(xiàn)有助于更深刻理解HERG鉀通道調(diào)控機制和長QT綜合征發(fā)病機制。
【作者單位】： 廣東省心血管病研究所;廣東省人民醫(yī)院心內(nèi)科;
【關鍵詞】： 長QT綜合征 HERG鉀通道 蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型 膜片鉗技術
【基金】：國家自然科學基金(81070151) 廣東省自然科學基金(S2012010009324)~~
【分類號】：R331
【正文快照】： 由人類herg(Human ether-a-go-go-related gene)所編碼心臟HERG鉀通道屬于電壓依賴性鉀通道,該通道 介導快速激活延遲整流鉀電流。herg基因突變和某些藥物阻滯HERG鉀通道均可引起長QT綜合征(LQTs)[1]。在心臟離子通道的眾多調(diào)控因素中,通道的磷酸化程度發(fā)揮了極其重要的作用,

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本文編號：990309