本文關(guān)鍵詞：蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型12負(fù)性調(diào)控心臟HERG鉀通道電流

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【摘要】：目的研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型12(PTPN12)對(duì)心臟HERG鉀通道電流的調(diào)控作用。方法(1)質(zhì)粒構(gòu)建和基因轉(zhuǎn)染:PCR技術(shù)構(gòu)建各種質(zhì)粒,應(yīng)用脂質(zhì)體將各種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株;(2)應(yīng)用抗PTPN12抗體進(jìn)行Western blotting分析檢測(cè)PTPN12的表達(dá);(3)細(xì)胞電生理檢測(cè):應(yīng)用膜片鉗技術(shù)檢測(cè)單獨(dú)表達(dá)HERG組(HEK293/HERG細(xì)胞)、PTPN12過度表達(dá)組(將pCDNA3.1-PTPN12-RFP轉(zhuǎn)染HEK293/HERG細(xì)胞)、PAO處理組(PTPN12/HERG組基礎(chǔ)上加入抑制劑PAO)、herg突變組(將pCDNA3.1-PTPN12-RFP轉(zhuǎn)染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A細(xì)胞株)的HERG鉀通道電流。結(jié)果(1)成功構(gòu)建herg突變質(zhì)粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP質(zhì)粒,并獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株;(2)共轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-PTPN12-RFP質(zhì)粒的HEK293/HERG細(xì)胞在熒光顯微鏡下可觀察到PTPN12-RFP在細(xì)胞中的表達(dá),Western blotting可檢測(cè)到PTPN12的表達(dá);(3)PTPN12過度表達(dá)組脈沖電流密度明顯低于對(duì)照組(P0.01),PAO處理組和herg突變組電流密度明顯高于PTPN12/HERG組(P0.01)。結(jié)論 PTPN12對(duì)心臟HERG鉀通道電流具有明顯負(fù)性調(diào)控作用,其可能機(jī)制是PTPN12減弱了HERG鉀通道酪氨酸磷酸化程度。這一發(fā)現(xiàn)有助于更深刻理解HERG鉀通道調(diào)控機(jī)制和長QT綜合征發(fā)病機(jī)制。
【作者單位】： 廣東省心血管病研究所;廣東省人民醫(yī)院心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 長QT綜合征 HERG鉀通道 蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型 膜片鉗技術(shù)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81070151) 廣東省自然科學(xué)基金(S2012010009324)~~
【分類號(hào)】：R331
【正文快照】： 由人類herg(Human ether-a-go-go-related gene)所編碼心臟HERG鉀通道屬于電壓依賴性鉀通道,該通道 介導(dǎo)快速激活延遲整流鉀電流。herg基因突變和某些藥物阻滯HERG鉀通道均可引起長QT綜合征(LQTs)[1]。在心臟離子通道的眾多調(diào)控因素中,通道的磷酸化程度發(fā)揮了極其重要的作用,

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本文編號(hào)：990309