本文關(guān)鍵詞：miRNA-122促進(jìn)小鼠胚胎干細(xì)胞源性肝前體細(xì)胞的分化與成熟

  更多相關(guān)文章： 胚胎干細(xì)胞 肝細(xì)胞 miRNA-

【摘要】：目的:通過miRNA-122(miR-122)轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞(ESCs)源性肝前體細(xì)胞,觀察及評估其是否能推進(jìn)ESCs向肝細(xì)胞的分化過程。方法:采用丁酸鈉、成纖維細(xì)胞生長因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)聯(lián)合序貫誘導(dǎo)小鼠ESCs使之初步分化為肝前體細(xì)胞,然后利用Gateway技術(shù)構(gòu)建出pAV.Ex1d-CMVmiR122/IRES/eGFP重組腺病毒表達(dá)載體,使其轉(zhuǎn)染貼壁誘導(dǎo)第9天的小鼠ESCs源性肝前體細(xì)胞,獲得穩(wěn)定高表達(dá)miR-122的細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)。采用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)的變化;使用real-time RT-PCR檢測肝特異性基因的表達(dá);免疫熒光檢測肝特異性蛋白表達(dá)水平;吲哚氰綠攝取實(shí)驗(yàn)、糖原染色及尿素合成功能實(shí)驗(yàn)檢測肝細(xì)胞功能。結(jié)果:丁酸鈉、FGF-4及Dex聯(lián)合序貫誘導(dǎo)可將小鼠ESCs成功地誘導(dǎo)為肝前體細(xì)胞。轉(zhuǎn)染miR-122后,細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上更接近成熟肝細(xì)胞;肝特異性基因白蛋白(ALB)、甲狀腺素運(yùn)載蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、細(xì)胞角蛋白8、膽固醇7α-羥化酶及細(xì)胞色素P450 3A4的mRNA表達(dá)均增高;肝特異性蛋白ALB及細(xì)胞角蛋白18均表達(dá)增高,而甲胎蛋白表達(dá)降低;吲哚氰綠攝取實(shí)驗(yàn)、糖原染色及尿素合成功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示轉(zhuǎn)染miR-122后肝細(xì)胞功能較對照組明顯增強(qiáng)。結(jié)論:丁酸鈉、FGF-4及Dex聯(lián)合序貫誘導(dǎo)可將小鼠ESCs成功地誘導(dǎo)為肝前體細(xì)胞;miR-122能夠有效地促進(jìn)小鼠肝前體細(xì)胞的分化與成熟。
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院小兒外科;
【關(guān)鍵詞】： 胚胎干細(xì)胞 肝細(xì)胞 miRNA-
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30872700)
【分類號】：R329
【正文快照】： 由于具有自我更新、高度增殖和多向分化的能力,胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ESCs)為多種難治性肝病、代謝性肝病的細(xì)胞替代治療提供了源源不斷的種子細(xì)胞來源,但是其誘導(dǎo)分化的低效率及致瘤風(fēng)險(xiǎn)一直是難以解決的關(guān)鍵問題[1-2]。微小RNA(microRNA,miRNA)是廣泛存在于真核

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本文編號：987073