本文關鍵詞：miRNA-122促進小鼠胚胎干細胞源性肝前體細胞的分化與成熟

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【摘要】：目的:通過miRNA-122(miR-122)轉染胚胎干細胞(ESCs)源性肝前體細胞,觀察及評估其是否能推進ESCs向肝細胞的分化過程。方法:采用丁酸鈉、成纖維細胞生長因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)聯(lián)合序貫誘導小鼠ESCs使之初步分化為肝前體細胞,然后利用Gateway技術構建出pAV.Ex1d-CMVmiR122/IRES/eGFP重組腺病毒表達載體,使其轉染貼壁誘導第9天的小鼠ESCs源性肝前體細胞,獲得穩(wěn)定高表達miR-122的細胞后繼續(xù)培養(yǎng)。采用熒光顯微鏡觀察轉染后細胞形態(tài)的變化;使用real-time RT-PCR檢測肝特異性基因的表達;免疫熒光檢測肝特異性蛋白表達水平;吲哚氰綠攝取實驗、糖原染色及尿素合成功能實驗檢測肝細胞功能。結果:丁酸鈉、FGF-4及Dex聯(lián)合序貫誘導可將小鼠ESCs成功地誘導為肝前體細胞。轉染miR-122后,細胞在形態(tài)學上更接近成熟肝細胞;肝特異性基因白蛋白(ALB)、甲狀腺素運載蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、細胞角蛋白8、膽固醇7α-羥化酶及細胞色素P450 3A4的mRNA表達均增高;肝特異性蛋白ALB及細胞角蛋白18均表達增高,而甲胎蛋白表達降低;吲哚氰綠攝取實驗、糖原染色及尿素合成功能實驗結果均顯示轉染miR-122后肝細胞功能較對照組明顯增強。結論:丁酸鈉、FGF-4及Dex聯(lián)合序貫誘導可將小鼠ESCs成功地誘導為肝前體細胞;miR-122能夠有效地促進小鼠肝前體細胞的分化與成熟。
【作者單位】： 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院小兒外科;
【關鍵詞】： 胚胎干細胞 肝細胞 miRNA-
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.30872700)
【分類號】：R329
【正文快照】： 由于具有自我更新、高度增殖和多向分化的能力,胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESCs)為多種難治性肝病、代謝性肝病的細胞替代治療提供了源源不斷的種子細胞來源,但是其誘導分化的低效率及致瘤風險一直是難以解決的關鍵問題[1-2]。微小RNA(microRNA,miRNA)是廣泛存在于真核

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄧小耿,方天翎,曹銘輝,楊勇志,邵靜,魏菁,陳積圣,閔軍;淤膽血清“病理微環(huán)境”誘導胚胎干細胞向肝細胞分化[J];中國病理生理雜志;2004年06期

2 商昌珍;閔軍;張磊;劉璐;鄧小耿;陳亞進;陳積圣;;丁酸鈉體外誘導小鼠胚胎干細胞分化為肝細胞[J];中國病理生理雜志;2006年12期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊婧;徐惠成;王延洲;梁志清;;丁酸鈉對大鼠骨髓間充質干細胞向平滑肌細胞分化的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2011年10期

2 曾妍;唐曉鵬;;胚胎干細胞治療肝病的進展[J];國際內科學雜志;2007年07期

3 高蕾;�？∑�;;肝干細胞向成熟肝細胞誘導分化的體內外特點[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年08期

4 王海瀾;高毅;蔣澤生;慕寧;;人骨髓來源多能成體祖細胞ZHJ-MAPCs與人肝細胞系L02體外共培養(yǎng)向肝樣細胞的分化[J];世界華人消化雜志;2006年23期

5 商昌珍;閔軍;張磊;劉璐;鄧小耿;陳亞進;陳積圣;;丁酸鈉體外誘導小鼠胚胎干細胞分化為肝細胞[J];中國病理生理雜志;2006年12期

6 劉璐;閔軍;王捷;商昌珍;萬云樂;余強;楊梅;曹君;陳積圣;;丁酸鈉誘導的未成熟樹突狀細胞的免疫學功能研究[J];中國病理生理雜志;2007年06期

7 鄧小耿;宋爾衛(wèi);閔軍;張杰;陳倫;曾炳勝;方天翎;陳積圣;;胚胎干細胞源性肝干細胞在治療性肝再生中的應用[J];中國病理生理雜志;2007年07期

8 任萌;閔軍;嚴勵;商昌珍;曹君;李靜宜;程樺;;丁酸鈉、激活素A和地塞米松誘導小鼠胚胎干細胞分化為胰腺外分泌細胞[J];中國病理生理雜志;2009年08期

9 羅定遠;黎洪浩;;表觀遺傳修飾調控胚胎干細胞定向分化的研究進展[J];中國病理生理雜志;2010年06期

10 陳亞進;閔軍;商昌珍;任萌;彭孝雄;曹君;陳積圣;;微小RNA在丁酸鈉誘導胚胎干細胞分化為肝細胞過程中表達差異譜的變化[J];中國醫(yī)學科學院學報;2008年04期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陸德云;1.阿德福韋酯治療拉米夫定耐藥HBeAg（+）慢性乙肝的臨床研究 2.重型肝炎患者血漿對體外培養(yǎng)臍血間充質干細胞影響的初步研究[D];四川大學;2006年

2 徐衛(wèi)東;疏肝健脾法對肝干細胞誘導分化及調控機理的研究[D];湖北中醫(yī)學院;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳萍;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對小鼠胚胎干細胞的毒性作用[D];泰山醫(yī)學院;2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孟瑛,黃紹良,閔軍,郭中敏;定向誘導小鼠ES細胞為肝臟細胞及其凝血因子Ⅷ,Ⅸ的表達[J];中國科學C輯:生命科學;2005年03期

2 蔡云峰,閔軍,方天翎,褚忠華,鄧小耿,何勁松,陳積圣;含淤膽血清的培養(yǎng)體系從大鼠骨髓細胞中篩選與擴增肝干細胞亞群[J];中國病理生理雜志;2003年08期

3 鄧小耿,方天翎,曹銘輝,楊勇志,邵靜,魏菁,陳積圣,閔軍;淤膽血清“病理微環(huán)境”誘導胚胎干細胞向肝細胞分化[J];中國病理生理雜志;2004年06期

4 王萍,賈繼東,唐淑珍,閻鐘鈺,尤紅,叢敏,王寶恩,陳麗,安威;丁酸鈉誘導體外培養(yǎng)的大鼠肝卵圓細胞分化為成熟肝細胞[J];中華肝臟病雜志;2004年12期

5 單云峰,周偉平,楊文,劉淑琴,曹惠芳,邱秀華,吳孟超,王紅陽;大鼠肝卵圓細胞的分離培養(yǎng)和體外分化研究[J];中華實驗外科雜志;2005年08期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉濤;王英杰;張世昌;陳霞;李桂清;;胚胎干細胞用于肝組織工程研究的初步評價[J];胃腸病學和肝病學雜志;2009年09期

2 滕越;王韞芳;裴雪濤;;肝細胞微囊化移植——肝病細胞治療的新希望[J];自然科學進展;2007年06期

3 胡安斌;何曉順;鄭啟昌;蔡繼業(yè);;胚胎干細胞來源的肝細胞對急性肝功能衰竭小鼠的移植治療作用[J];中華醫(yī)學雜志;2006年46期

4 蔡斌,侯鐵勝,劉少君;誘導胚胎干細胞向神經(jīng)元分化及其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的應用[J];中國神經(jīng)科學雜志;2001年02期

5 沈干,吳春芳,叢笑倩,劉曉音,劉偉,曹誼林;胚胎干細胞在轉化生長因子-β1誘導下表達vWF、CD34的研究[J];中華實驗外科雜志;2003年01期

6 劉鴻禧;胚胎干細胞的研究及其在臨床上的應用[J];汕頭大學醫(yī)學院學報;2003年01期

7 于增國,倫永志;胚胎干細胞與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療[J];大連大學學報;2003年06期

8 丁國治;;可轉變成多神細胞和組織的成人干細胞[J];國外醫(yī)學情報;2003年06期

9 周毅,宋純,呂冰潔,宋一民,許評,宋春芳;小鼠胚胎干細胞轉基因治療甲狀旁腺功能低下癥的實驗研究[J];中華實驗外科雜志;2004年02期

10 王波,黃荷鳳;胚胎干細胞向胰島細胞誘導分化的研究[J];國外醫(yī)學.生物醫(yī)學工程分冊;2004年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦茂林;蔡文琴;張吉強;李成仁;李巍;;雌二醇對胚胎干細胞神經(jīng)定向分化誘導的影響[A];中國解剖學會第十一屆全國組織學與胚胎學青年學術研討會論文匯編[C];2009年

2 徐小明;竇忠英;華進聯(lián);葛秀國;;免疫外科法分離克隆BALB/c小鼠胚胎干細胞[A];全國首屆動物生物技術學術研討會論文集[C];2004年

3 蔣暉;瞿東濱;金大地;鞠躬;;新型神經(jīng)營養(yǎng)因子TAT-BDNF促進胚胎干細胞的神經(jīng)元性分化[A];第一屆全國脊髓損傷治療與康復研討會暨中國康復醫(yī)學會脊柱脊髓損傷專業(yè)委員會脊髓損傷與康復學組成立會論文匯編[C];2009年

4 于洲;徐海濱;;應用胚胎干細胞實驗模型體系對異硫氰酸鹽發(fā)育毒性的研究[A];2010年全國藥物毒理學學術會議論文集[C];2010年

5 劉平;關云謙;鄒春林;張愚;陳彪;劉焯霖;;胚胎干細胞在體內外誘導分化成為多巴胺能神經(jīng)的初步研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編[C];2004年

6 隋婧;姜方旭;施秉銀;;胚胎干細胞定向分化為胰島祖細胞的基因表達譜分析[A];中華醫(yī)學會第十次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

7 胡敏華;區(qū)穎蕾;李莉;郭欣政;張守全;;胚胎干細胞飼養(yǎng)層的優(yōu)化及影響內細胞團貼壁率的探討[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十五屆學術研討會論文集（上冊）[C];2010年

8 馬育芳;楊陽;李燕;王少華;趙蕊;李寧;;豬胚胎干細胞多能性因子Nanog對胚胎發(fā)育的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十五屆學術研討會論文集（上冊）[C];2010年

9 曹楠;楊黃恬;;大鼠胚胎干細胞向心肌細胞體外分化的研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

10 田孝祥;韓雅玲;康建;徐凱;閆承慧;;利用胚胎干細胞建立貼壁制備胚胎小體的新方法[A];中華醫(yī)學會心血管病學分會第八次全國心血管病學術會議匯編[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張樹庸　趙貴英;干細胞研究的突破[N];人民日報;2009年

2 記者 劉霞;英用胚胎干細胞制造出紅血球[N];科技日報;2010年

3 孫國根;復旦大學成功提取首個大鼠胚胎干細胞[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 本報首席記者 任荃;第二顆“全能種子”會不會搶先“發(fā)芽”[N];文匯報;2009年

5 劉霞;美用胚胎干細胞制造出血小板[N];科技日報;2011年

6 記者 鄭曉春;科學家發(fā)現(xiàn)胚胎干細胞分化機制[N];科技日報;2008年

7 記者 李大慶;“小小”入選《時代周刊》2009年十大醫(yī)學突破[N];科技日報;2009年

8 曹淑芬;用胚胎干細胞生成骨骼[N];中國中醫(yī)藥報;2001年

9 閆潔;胚胎干細胞治療:首次臨床試驗[N];新華每日電訊;2010年

10 記者 黃X;利用人類卵細胞,成功培養(yǎng)出胚胎干細胞[N];新華每日電訊;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 譚舟;MK和GM-CSFRα在胚胎干細胞中的表達與功能研究[D];浙江大學;2010年

2 滕越;肝細胞微囊化制備與胚胎干細胞發(fā)育調控研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

3 蘇中淵;胚胎干細胞來源的間充質干細胞歸巢及胚胎干細胞表面分子的研究[D];浙江大學;2010年

4 廖宏慶;人類不同原核數(shù)目受精卵中篩選正常優(yōu)質胚胎的策略研究[D];中南大學;2010年

5 白春玲;牛孤雌多倍體胚胎與克隆多倍體胚胎的研究[D];內蒙古大學;2011年

6 曲文玉;人胚胎干細胞的分離、培養(yǎng)及建系[D];中國醫(yī)科大學;2006年

7 李相運;小鼠胚胎干細胞多能性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2001年

8 許丹;胚胎干細胞參與形成的融合細胞對損傷肝細胞作用的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2009年

9 姚嘉宜;胚胎干細胞重新編程腫瘤細胞的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2008年

10 趙惠萍;骨髓內皮細胞條件培養(yǎng)液誘導胚胎干細胞向造血細胞分化[D];中南大學;2003年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫國杰;山羊類胚胎干細胞的分離、克隆[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2002年

2 呂一帆;胚胎干細胞在內膜損傷小鼠宮腔內移植的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2010年

3 周文平;小鼠三種胚胎干細胞表觀相關基因的分析[D];河南大學;2011年

4 姜靜宜;胚胎干細胞中外源性IbeB靶蛋白的篩選及驗證[D];中國醫(yī)科大學;2010年

5 蔡斌;體外誘導胚胎干細胞為神經(jīng)細胞模型的建立及相關因子的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2001年

6 顧文佳;誘導胚胎干細胞向神經(jīng)細胞分化的研究[D];中國醫(yī)科大學;2004年

7 劉愿;小鼠球形精子受精胚胎制備及培養(yǎng)方法的改進[D];山東師范大學;2011年

8 秦茂林;小鼠胚胎干細胞的分離、鑒定和神經(jīng)定向誘導分化[D];第三軍醫(yī)大學;2001年

9 呂志一;小鼠2細胞胚胎基因表達譜研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

10 曲智;大鼠氣管粘膜上皮細胞損傷修復過程中胚胎干細胞相關基因OCT3/4的表達及其意義[D];中國醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：987073