本文關(guān)鍵詞：抗VEGFR-2全人源IgG1抗體的構(gòu)建及其在CHO-k細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：本文在實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的單鏈抗體-Fc融合抗體[scFv(AK404R)-Fc]的基礎(chǔ)上構(gòu)建抗VEGFR-2全人源IgG1樣全長抗體(Mab-04)。利用重疊PCR,獲得Mab-04的輕鏈和重鏈的核酸序列后分別克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3.1,獲得重組質(zhì)粒。脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-k細(xì)胞,經(jīng)Protein A柱純化細(xì)胞培養(yǎng)上清液獲得目的蛋白,利用Western blotting檢測目的蛋白,ELISA檢測Mab-04與抗原親和力。測序表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,Western blotting檢測顯示目的蛋白成功表達(dá)(1μg·mL-1),ELISA檢測闡明該抗體能與抗原結(jié)合并呈濃度依賴性(IC50為50 nmol·L-1),表明Mab-04成功表達(dá)并正確裝配,為進(jìn)一步大量制備該抗體及其活性研究打下基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國藥科大學(xué)天然藥物活性組分與藥效國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： VEGFR- 全長抗體 抗腫瘤血管生成
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072561,81102364) 天然藥物活性組分與藥效國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目(JKGP201101) 江蘇省青藍(lán)工程項(xiàng)目(2010)
【分類號】：R392
【正文快照】： 血管生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的必要條件,而血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothelial growth factorreceptor,VEGFR)作為血管生成關(guān)鍵因子VEGF的受體也成為抗腫瘤藥物的靶向研究熱點(diǎn)[1]。VEGFR有3種亞型:Flt1(VEGFR-1)、KDR(VEGFR-2)、VEGFR-3,其中VEGFR-2與VEGF具有高親和力

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：950004